凱氏定氮法測蛋白質蒸餾後收集液是

Ⅰ 凱氏定氮法測定蛋白質

提高溶液溫度、催化劑和指示劑、40g/L硼酸、鹽酸

Ⅱ 凱氏定氮法測定蛋白質時,若在蒸餾過程中,吸收液始終未變為藍綠色,為什麼

蒸餾液中忘加氫氧化鈉了吧

Ⅲ 凱氏定氮法測蛋白質

凱氏定氮法通過測出樣品中的總含氮量再乘以相應的蛋白質系數而求出蛋白質的含專量屬,此法的結果稱為粗蛋白質含量：由於樣品中含有少量非蛋白質含氮化合物，如核酸、生物鹼、含氮類脂、卟啉以及含氮色素等非蛋白質的含氮化合物。凱氏定氮法測定出的含氮量，再乘以系數6.25，即為蛋白質含量。
消化的步驟是：准確稱取一定量的樣品，加入硫酸銅0.5g、硫酸鉀10g和濃硫酸20mL、玻璃珠數粒→小心移入乾燥潔凈的500ml凱氏燒瓶中(固體或粉末用紙捲成紙筒送入)，輕輕搖勻，以45º斜支於有小孔的石棉網上→用電爐以小火加熱(或先燒瓶放在距電爐較遠處)，待內容物全部炭化、泡沫停止產生後→加大火力(或將燒瓶放在電爐上)，保持瓶內液體微沸→至液體變藍綠色透明後→繼續加熱微沸30min→關閉電爐，取下燒瓶、冷卻→轉移至100ml容量瓶中，加水定容

Ⅳ 凱氏定氮法檢測蛋白質含量，試劑空白太高達到0.50ml,蒸餾水空白0.03ml,是試劑的問題嗎

估計是硫酸鉀的問題

Ⅳ 凱氏定氮法測定蛋白質含量吸收液的變色范圍

吸收液中用溴甲酚綠-甲基紅混合指示劑。其變色范圍在pH5.0-5.2，pH 5.0 以下為暗紅色，pH 5.1 為灰綠色，pH 5.2 以上為綠色。

Ⅵ 凱氏定氮法測定蛋白質中氨基酸含量的主要步驟有哪些

凱氏定氮法只能檢測蛋白質中氮含量，不能檢測氨基酸的含量。其中蛋白質含量也只是稱為粗蛋白質的含量，只是用氮的含量乘以6.25（系數）得出，不是真正的蛋白質的含量。
凱氏定氮法測氮的方法如下：
1、稱取0.5～1g試樣（含氮量5～80mg）准確至0.0002g，無損失地放入凱氏燒瓶中，加入硫酸銅0.9g，無水硫酸鉀（或硫酸鈉）15g，與試樣混合均勻，再加硫酸25ml和2粒玻璃珠，在消煮爐士小心加熱，待樣品焦化，泡沫消失，再加強火力（360～410℃）直至溶液澄清後，再加熱消化15min。
2、氨的蒸餾
（1）常量直接茂餾法 將上述的試樣消煮液冷卻，加蒸餾水200ml，搖勻，冷卻。沿瓶壁小心加入40％氫氧化鈉溶液100ml，立即與蒸餾裝置相連．蒸餾裝置冷凝管的末端應浸入50ml硼酸吸收液lcm。加混合指示劑2滴，輕搖凱氏燒瓶，使溶液混勻，加熱蒸餾，直至餾出液體積約150ml。先將吸收液取下，再停止加熱。
（2）半微量水蒸汽蒸餾法 上述試樣的消煮液冷卻，加蒸餾水20m1轉入100ml容量瓶，冷卻後用水稀釋至刻度，搖勻，為試樣分解液。取2％硼酸溶液20ml，加混合指示劑2滴，使半微量蕉餾裝置的冷凝管末端浸入此溶液；蒸餾裝置的蒸汽發生器的水中應加甲基紅指示劑數滴，硫酸數滴，且保持此液為橙紅色，否則應補加少許硫酸。准確移取試樣分解液10～20ml注入蒸餾裝置的反應室中，用少量蒸餾水沖洗進樣入口，塞好入口玻璃塞，再加10ml40％氫氧化鈉溶液，小心提起玻璃塞使之流入反應室，將玻璃塞塞好，並在入口處加水封密好，防止漏氣，蒸餾4min，使冷凝管末端離開吸收液面，用蒸餾水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。
3、滴定 用硼酸吸收氨後，立即用0.05mol/L的HCI標准溶液滴定，仍以甲基紅或混合甲基紅為指示劑。
在測定樣本中含氮量的同時，應做一空白對照測定，即各種試劑的用量及操作步驟完全相同，但不加樣本，這樣可以校正因葯品不純所發生的誤差，吸收氨後的吸收液立即用0.05mol/L鹽酸標准溶液滴定，溶液由藍綠色變為灰紅色為終點。
4、空白測定 稱取蔗糖0.0lg，以代替試樣，按上述測定步驟進行空白測定，消耗0.05mol/L鹽酸標准溶液的體積應不得超過0.3ml。
5、計算
N%*6.25=粗蛋白質（%）=（V2-V1）*0.014*6.25*100/m*（V』/ V）
每m1的lmol/L鹽酸標准溶液相當於0.0140g的N。因此，
式中：v2—試樣滴定時所需酸標准溶液的體積（m1）；
v1—空白滴定時所需酸標准溶液的體積(m1)；
c—鹽酸標准溶液的濃度(mol/L)；
m一試樣的質量（g）；
v —試樣的分解液總體積（ml）；
v』—試樣分解液蒸餾用體積（m1）；
0.0140—每ml HCl標准溶液相當於N的克數；
6.25一氮換算成蛋白質的平均系數。
每個試樣取兩個平行樣進行測定，以其算術平均值為結果。 當粗蛋質含量在25％以。上，允許相對偏差為1％；當粗蛋白質含量在l0％～25％時，允許相對偏差為2％；當粗蛋白質含量在10％以下時，允許相對偏差為3％。

Ⅶ 試述用凱氏定氮法測定麵粉中蛋白質含量的原理，簡要步驟和計算公式。

麵粉與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然後鹼化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收後再以硫酸或鹽酸標准溶液滴定。
1、 樣品處理：精密稱取0.2-2.0g固體樣品或2-5g半固體樣品或吸取10-20ml液體樣品（約相當氮30-40mg），移入乾燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸銅，6g硫酸鉀及20毫升硫酸，稍搖勻後於瓶口放一小漏斗，將瓶以45度角斜支於有小孔的石棉網上，小火加熱，待內容物全部炭化，泡沫完全停止後，加強火力，並保持瓶內液體微沸，至液體呈藍綠色澄清透明後，再繼續加熱0.5小時。取下放冷，小心加20ml水，放冷後，移入100ml容量瓶中，並用少量水洗定氮瓶，洗液並入容量瓶中，再加水至刻度，混勻備用。取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、濃硫酸同一方法做試劑空白試驗。
2、 裝好定氮裝置，於水蒸氣發生器內裝水約2/3處加甲基紅指示劑數滴及數毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入數粒玻璃珠以防暴沸，用調壓器控制，加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。
3、 向接收瓶內加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示劑1滴，並使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml樣品消化液由小玻璃杯流入反應室，並以10ml水洗滌小燒杯使流入反應室內，塞緊小玻璃杯的棒狀玻璃塞。將10ml 40%氫氧化鈉溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其緩慢流入反應室，立即將玻璃蓋塞緊，並加水於小玻璃杯以防漏氣。夾緊螺旋夾，開始蒸餾，蒸氣通入反應室使氨通過冷凝管而進入接收瓶內，蒸餾5min。移動接收瓶，使冷凝管下端離開液皿，再蒸餾1min，然後用少量水沖洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.01N硫酸或0.01N鹽酸標准溶液定至灰色或藍紫色為終點。 同時吸取10.0ml試劑空白消化液按3操作。
X =(（V1-V2）*N*0.014)/( m*（10/100）) *F*100% X：樣品中蛋白質的百分含量，g； V1：樣品消耗硫酸或鹽酸標准液的體積，ml； V2：試劑空白消耗硫酸或鹽酸標准溶液的體積，ml； N：硫酸或鹽酸標准溶液的當量濃度； 0.014：1N硫酸或鹽酸標准溶液1ml相當於氮克數； m：樣品的質量（體積），g（ml）； F：氮換算為蛋白質的系數。蛋白質中的氮含量一般為15～17.6%，按16%計算乘以6.25即為蛋白質，乳製品為6.38，麵粉為5.70，玉米、高粱為6.24，花生為5.46，米為5.95，大豆及其製品為5.71，肉與肉製品為6.25，大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83，芝麻、向日葵為 5.30。

Ⅷ 凱氏定氮法與分光光度法的優缺點

凱氏定氮法的優點：可用於所有食品的蛋白質分析中；操作相對比較簡單；實驗費用較低；結果准確，是一種測定蛋白質的經典方法；用改進方法（微量凱氏定氮法）可測定樣品中微量的蛋白質。

缺點：最終測定的是總有機氮，而不只是蛋白質氮；實驗時間太長(至少需要2h才能完成)；精度差，精度低於雙縮脲法；所用試劑有腐蝕性。

分光光度法的優點：靈敏度高；儀器設備簡單，操作簡便、快速；應用廣泛。

缺點是：准確度相對不高；有的檢測不可用，有限制性。

蛋白質與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然後鹼化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收後再以硫酸或鹽酸標准溶液滴定，根據酸的消耗量乘以換算系數，並換算成蛋白質含量。

(8)凱氏定氮法測蛋白質蒸餾後收集液是擴展閱讀：

在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化樣品將有機氮都轉變成無機銨鹽，然後在鹼性條件下將銨鹽轉化為氨，隨水蒸氣蒸餾出來並為過量的硼酸液吸收，再以標准鹽酸滴定，就可計算出樣品中的氮量。由於蛋白質含氮量比較恆定，可由其氮量計算蛋白質含量，故此法是經典的蛋白質定量方法。

物質與光作用，具有選擇吸收的特性。有色物質的顏色是該物質與光作用產生的。即有色溶液所呈現的顏色是由於溶液中的物質對光的選擇性吸收所致。

由於不同的物質其分子結構不同，對不同波長光的吸收能力也不同，因此具有特徵結構的結構集團，存在選擇吸收特性的最大實收波長，形成最大吸收峰，而產生特有的吸收光譜。

Ⅸ 凱氏定氮法測定蛋白質，蒸餾液加入過量的氫氧化鈉後呈色

綠色
因為所用混合指示劑在鹼性溶液中呈綠色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈紅色。如果沒有溴甲酚綠，可單獨使用0.1%甲基紅乙醇溶液。