A. 分光光度計是測什麼的
分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度,對該物質進行定性和定量分析的方液基橘法。它具有靈敏度高、操作簡便、快速等優點,是生物化學實驗中最常用的實驗方法。
分光光度計基本上量化了給定物質反射或吸收光的程度,我們傾向於認為這是更定性的。您可能認為將不透明產品描述為紅色或藍色,具有啞光或光澤的光澤。分光光度計使這種評估更進了一步,並將這些特徵量化為可以測量和用於精確應用的東西,包括臨床診斷、質量控制、產品設計和生化研究。
分光光度計優點
(1)顯示清晰、明確的結果:通過明確的顏色測量,觀看環境的差異不會影響您使用的顏色。例如,計算機屏幕設置和照明的變化可能會使顏色看起來與預期不同。即使是人鬧團類感知的差異,例如色盲和眼睛疲勞,也會導致許多不同的顏色解釋。通過特定的測量,這個問題就會消失。
(2)量化定性鋒和特徵:由於顏色樣本是精確定義的,您可以告別人們對顏色的主觀差異。 「栗色」對於兩個不同的人來說可能是一種完全不同的顏色,但他們無法與特定的顏色測量爭論。這可以改善溝通並更容易討論工作。
B. 721紫外分光光度計能測出酒中的甲醇含量嗎,如何測啊!
幾種甲醇含量測定方法的比較<br>摘要:白酒中甲醇含量的測定方法包括比色法、氣相色譜法、高效液相色譜法、蒸餾法等。採用氣相色譜法和比<br>色法,對不同酒精度和不同甲醇含量的樣品進行檢測。結果表明,兩種檢測方法之間存在一定的差異,在實際檢驗過<br>程中應根據不同情況選用相應的測定方法。<br>關鍵詞:白酒;甲醇;檢測;氣相色譜<br>甲醇是白酒中對人體有害的成分,為保障人體的健<br>康安全,國家發布的蒸餾酒及配製酒衛生標准中對白酒<br>中甲醇含量提出了嚴格的上限要求,以谷類為原料的白<br>酒中甲醇含量不得超過0.04 g/100 mL,以薯干及代用品<br>為原料的白酒中甲醇含量不得超過0.12 g/100 mL[1]。但<br>是在白酒生產發酵過程中會自然產生甲醇,同時由於甲<br>醇和乙醇的沸點接近,目前絕大部分白酒生產廠家的蒸<br>餾設備很難將其完全分離開來,所以白酒中不可避免地<br>含有一定量的甲醇。<br>目前,國內外檢測酒中甲醇含量的方法主要有比色<br>法、氣相色譜法、高效液相色譜法、固定化酶流動注射分<br>析法、酶電極法、激光拉曼光譜法、Fourier變換紅外光譜<br>法、折射法、蒸餾法等[2]。白酒生產企業中的甲醇檢測,既<br>要保證結果的准確性,又要節約檢測成本,准確及時地出<br>具檢測結果。因此,許多企業根據自身實際情況,選用了<br>不同的檢測方法。<br>DNP氣相色譜法因具有穩定性好、操作簡便、檢測<br>速度快、成本低等優點,在白酒企業得到廣泛的應用,但<br>該法用於甲醇檢測的准確度變化尚不明確;毛細管氣相<br>色譜法為GB/T394.2規定的醇類測定第一法,該法具有<br>靈敏度高、分離效能和選擇性好的優點,但檢測所用時間<br>較長。比色法是GB/T5009.48規定的甲醇檢測方法,該法<br>使用的儀器簡單,但操作較為繁瑣,吸光度易受溫度、時<br>間等因素影響,對檢驗員的操作水平要求較高。本文擬就<br>上述3種方法在測定白酒甲醇時的准確性進行對比實<br>驗。<br>1材料與方法<br>1.1試劑<br>甲醇(色譜純)、無甲醇酒精、蒸餾水、高錳酸鉀-磷酸<br>溶液、草酸-硫酸溶液、品紅-亞硫酸溶液。<br>1.2設備<br>氣相色譜(上海分析儀器廠1102型色譜儀)、氣相色<br>譜(上海天美分析儀器廠7890型色譜儀)、紫外-可見分<br>光光度計(上海精密科學儀器有限公司754N)。<br>1.3方法<br>1.3.1樣品的制備<br>為對比不同酒精度、不同甲醇含量的白酒按照上述3種方法進行檢測時的誤差情況,筆者結合目前市場上<br>常見成品白酒的酒精度分布,採用無甲醇酒精、蒸餾水配<br>制34%vol、39%vol、44%vol、52%vol 4種不同酒精度<br>樣品各1000 mL,然後,將每個酒精度的樣品分為4份共<br>計16個樣品,再量取一定量的色譜純甲醇分別加入到<br>16個樣品中,使樣品的甲醇含量分別為0.1 g/L、0.4 g/L、<br>0.8 g/L和1.2 g/L。具體樣品規格見表1。</p><img class=ed_capture src="http://pic.wenwen.soso.com/p/20090920/20090920140324-704144154.jpg">1.3.2氣相色譜法之一(固定相DNP)<br>選用上海分析儀器廠生產的1102色譜儀,色譜柱采<br>用填充柱,固定相為20%DNP。<br>色譜條件:載氣(N2)流速為150 mL/min;氫氣(H2)<br>流速為40 mL/min;空氣流速為400 mL/min;氣化室溫度<br>為160℃;檢測器溫度為150℃;柱溫為90℃。<br>打開N2000色譜工作站,選取正確的方法文件,吸<br>取樣品1μL進樣檢測,檢測結果見表2。<br>1.3.3氣相色譜法之二(毛細管柱)<br>選用上海天美分析儀器廠7890色譜儀,色譜柱為交<br>聯石英毛細管柱。<br>色譜條件:載氣(N2)流速1 mL/min;氫氣(H2)流速<br>30 mL/min;空氣流速300 mL/min;檢測器溫度200℃[3],<br>柱溫採用程序升溫:初始溫度40℃,保持3 min,升溫速<br>率為5℃/min,升至100℃後保持5 min,然後升溫至<br>200℃保持5 min。<br>打開N2000色譜工作站,選取正確的方法文件,吸<br>取樣品1μL進樣檢測,檢測結果見表2。<br>1.3.4比色法<br>根據試樣中乙醇濃度適當取樣置於25 mL具塞比<br>色管中。吸取甲醇標准使用液分別置於25 mL具塞比<br>色管中,並加入0.5 mL無甲醇的乙醇。於試樣管及標准<br>管中各加水至5 mL,再依次各加2 mL高錳酸鉀-磷酸<br>溶液,混勻,放置10 min,各加2 mL草酸-硫酸溶液,混<br>勻使之褪色,再各加5 mL品紅-亞硫酸溶液,混勻,於<br>20℃靜置30 min,用2 cm比色杯,以零管調節零點,於波長590 nm處測吸光度,繪制標准曲線比較,或與標准<br>系列目測比較。此外,還可以採用建立線性回歸方程的方<br>法來計算。檢測結果見表2。</p><img class=ed_capture src="http://pic.wenwen.soso.com/p/20090920/20090920140404-2022133599.jpg">2結果與分析<br>2.1甲醇含量對測定結果的影響<br>由表2可以看出,樣品中甲醇含量的多少,對3種檢<br>測方法有著較為明顯的影響,其變化曲線見圖1。</p><img class=ed_capture src="http://pic.wenwen.soso.com/p/20090920/20090920140438-931846792.jpg">從圖1可明顯看出,當試樣中甲醇含量小於0.4 g/L<br>時(樣品1~4甲醇含量為0.1 g/L、樣品5~8甲醇含量<br>為0.4 g/L),3種方法的檢測結果差異較小;當甲醇含量<br>大於0.4 g/L時(樣品9~12甲醇含量為0.8 g/L、樣品<br>13~16甲醇含量為1.2 g/L),3種方法的檢測結果差異<br>較大。<br>2.2酒精度對測定結果的影響<br>酒精度對測定結果的影響也比較顯著,以甲醇含量<br>0.1 g/L的樣品(樣品1~4)為例,3種檢測方法的結果<br>見圖2,其中橫坐標1~4分別代表酒精度為34%vol、</p><img class=ed_capture src="http://pic.wenwen.soso.com/p/20090920/20090920140501-1579827409.jpg">39%vol、44%vol和52%vol的樣品。<br>從圖2可以看出,隨著酒精度的增加,氣相色譜法測<br>定的甲醇含量誤差有增大的趨勢,其中,DNP氣相色譜<br>法受酒精度影響較大,毛細管柱氣相色譜法次之。<br>3結論<br>3.1從檢測結果看,當酒樣中甲醇含量為0.1 g/L和0.4 g/L時,不同酒精度酒樣,分別用3種檢測方法檢測<br>所得結果之間差異較小;而當酒樣中甲醇含量為0.8 g/L<br>和1.2 g/L時,3種不同檢測方法所得結果之間的差異較<br>大,相比而言,DNP法的檢測結果誤差最大,結果偏高,<br>毛細管柱次之。<br>3.2酒精度為34%vol和39%vol的酒樣採用3種檢<br>測方法的結果之間差異較小,而酒精度為44%vol和<br>52%vol的酒樣採用3種方法檢測結果之間的差異較<br>大,相比而言,DNP法的檢測結果誤差最大,毛細管柱<br>次之。因此,在實際檢驗工作中,當酒精度含量大於<br>40%vol時,不推薦使用DNP氣相色譜法。<br>參考文獻:<br>[1]GB/T5009.48-2003,蒸餾酒與配製酒衛生標準的分析方<br>法[S].<br>[2]李永生,齊嬌娜,高秀峰.酒中甲醇測定方法的研究進展[J].釀<br>酒科技,2006,(1):84-89.<br>[3]GB/T394.2-1994,酒精通用實驗方法[S].
C. 用分光光度計法測定時在什麼情況下可用蒸餾水作為參比溶液
紫外分光光度計測定時,那個空白溶液或者叫做參比溶液通常——不是水回
如:要測量x溶液答中物質a的含量時,
取x溶液加y物質,然後加z物質,
另取同體積的蒸餾水,加y物質,再加z物質
空白溶液與待測液相比,外加的條件是一致的(要盡可能地保持一致),
而待測液中原來含有物質a,而空白液中不含有a
D. 甲醇的氧化反應——如何測量酒中的甲醇濃度
甲醇能氧化成甲醛,生成的甲醛與品紅亞硫酸反應,進一步生成藍紫色物質。利用生成的藍紫色物質的顏色深淺與已知甲醇濃度的對照品春毀作比較,就可以測定出甲醇的濃度。
「五花馬,千金裘。呼兒將出換美酒,與爾同消萬古愁」,自古以來,醇香的美酒是很多人的大愛,但是如今劣質酒中往往含有超量的甲醇。倘若有誰知道自己杯中的「佳釀」裡面的甲醇超標,再怎麼嗜酒的人也會大驚失色。有數據表明,人若誤飲甲醇超過10毫升即可造成失明,扒薯備而超過30毫升將危及生命。
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E. 分光光度計是測什麼的
分光光度計主要是檢測,黑色金屬材料所含元素,以及合金元素的,化學成分的定量分析的比色法測定,有色金屬材料的所含元素的化學成分的定量分析的比色法測定,以及還有稀有元素的定量分析的比色法測定,還有有機材料元素的定量分析的比色法測定。
它利用光和能量的特性來識別顏色並確定光線中每種顏色的含量沖冊。分光光度計的兩個主要組件是和光度計。
分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用於核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。
儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器備判鉛、信號處理器和顯示與存儲系統組成。
特點:
1、獨特的雙光路、雙光束光學系統,儀器解析度更高,雜散光更低,穩定性、可靠性更強,分析更加准確。
2、採用320*240位點陣式高亮6 」液仿好晶顯示器,顯示清晰,信息完備。
3、獨特的長光程光路設計,使儀器解析度更高,尤其適合微量測試 強大的數據處理功能,使測試結果能得到充分的應用,用戶編輯更為簡單快捷。
4、採用懸架式光學系統設計,整體光路獨立固定在16mm厚的鋁制無變形基座上,底板的變形和外界的震動對光學系統不產生任何影響,從而大大提高了儀器的穩定性和可靠性。
5、採用同步正弦機構,波長准確度高,重復性好。
F. 白酒中的甲醇應該用什麼方法檢測
原理
酒中甲醇在磷酸溶液中被高錳酸鉀氧化成甲醛,過量的高錳酸鉀及在
反應中產生的二氧化錳用硫酸草酸溶液除去,
甲醛與品紅亞硫酸作用生
成藍紫色醌型色素,與標准系列比較定量。
品紅與亞硫酸形成非醌型無色化合物,甲醛與品紅-亞硫酸作用生成藍紫色醌型色素。
三、試劑
配製。
1.高錳酸鉀-磷酸溶液
稱取3g高錳酸鉀,加入15m1 85%磷酸溶液及70ml水的混合液中,待高錳酸鉀溶解後用水定容至100ml。貯於棕色瓶中備用。
2. 草酸-硫酸溶液
稱取5g無水草酸(H2C2O4)或7g含2個結晶水的草酸(H2C2O2?2H2O),溶於1:1冷硫酸中,並用1:1冷硫酸定容至100ml。混勻後,貯於棕色瓶中皮告隱備用。
3.品紅-亞硫酸溶液
稱取0.lg
研細的鹼性品紅,分次加水(80℃)共60ml,邊加水邊研磨使其溶解,待其充分溶解後濾於100ml容量瓶中,冷卻後加10ml(10%)亞硫酸鈉溶液,ml鹽酸,再加水至刻度,充分混勻,放置過夜。如溶液有顏色,可加少量活性炭攪拌後過濾,貯於棕色瓶中,置暗處保存。溶液呈紅色時應棄去重新
4. 甲醇標准溶液
准確稱取1.000g甲醇(相當於1.27ml)置於預先裝有少量蒸餾水的100ml容量瓶中,加水稀釋至刻度,混勻。此溶液友信每毫升相當於10mg甲醇,置低溫保存。
5.甲醇標淮應用液
吸取10.0ml甲醇標准溶液置於100ml容量瓶中,加水稀釋至刻度,混勻。此溶液每毫升相當於1mg甲醇。
6. 無甲醇無甲醛的乙醇制備
取300ml無水乙醇,加高錳酸鉀少許,振搖後放置24小時,蒸餾,最初和最後的1/10
蒸餾液棄去,收集中間的蒸餾部分即可。
7. 10%亞硫酸鈉溶液
四、儀器
分光光度計
五、操作方法
甲醇標准曲線制備與樣品測定管號(25ml比色管)
0 1 2 3 4 5 樣
11
樣
12
甲醇標准液
ml
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 - -
56度酒樣ml 0.6 0.6
56度無甲醇乙醇
ml 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 - -
去離子水ml 4.4 4.2 4.0 3.8 3.6 3.4 4.4 4.4
高錳酸鉀磷酸ml 2 2 2 2 2 2 2 2
混勻靜置
10min
草酸硫酸溶液
ml 2 2 2 2 2 2 2 2
混勻靜置燃廳使褪色冷卻
品紅亞硫酸溶液
5 5 5 5 5 5 5 5
混勻在20至30攝氏度靜置30min 以0管為調零點,於590nm波長處測吸光度
六測定結果
管號 0 1 2 3 4 5
樣11 樣12
甲醇標准液ml
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 - -
酒樣ml - - - - - - 0.6 0.6
甲醇含量mg
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
吸光度值
七、計算
1、繪制標准曲線,計算回歸方程,計算樣品管中甲醇的含量(mg)
2、計算樣品中甲醇的含量(g/100ml)
X=*100*1000mv
式中:
X——樣品中甲醇的含量,
g/1000ml
M——測定樣品中所含甲醇相當於標準的毫克數,mg V——樣品取樣體積,ml
G. 分光光度計如何測量樣品急急急急急急
分光光度計要測量的樣品必須是均一的溶液,不能有沉澱,如果有沉澱的話就要搖勻。之於為什麼這樣做和可以做哪些測量、如何測量,下面詳述:
分光光度計就是利用分光光度法對物質進行定量定性分析的儀器。
而分光光度法則是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度,對該物質進行定性和定量分析。 常用的波長范圍為:(1)200~400nm的紫外光區,(2)400~760nm的可見光區,(3)2.5~25μm(按波數計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和准確度,所有儀器應按照國家計量檢定規程或本附錄規定,定期進行校正檢定。 單色光輻射穿過被測物質溶液時,被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,其關系如下式: 1 A=log — =ECL T 式中 A 為吸收度; T 為透光率; E 為吸收系數,採用的表示方法是(E1% 1cm),即吸收度換算成溶液濃度為1%(g/ml),液層厚度為1cm的數值; C 為100ml溶液中所含被測物質的重量,g(按乾燥品或無水物計算); L 為液層厚度 ,cm。 物質對光的選擇性吸收波長,以輪雀弊及相應的吸收系數是該物質的物理常數。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數後,可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區,除某些物質對光有吸收外,很多物質本身並沒有吸收,但可在一定條件下加入顯色試劑或經過處理使其顯色後再測定,故又稱比色分析。由於顯色時影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應用標准品或對照品同時操作。
分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用於核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。
分光光度計的簡單原理
分光光度計計採用一個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光源透過測試的樣品後,部分光源被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣臘族品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
核酸的定量
核酸的定量是分光光度計使用頻率最高的功能。可以定量溶於緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應的系數。如:1OD 的吸光值分別相當於50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。測試後的吸光值經過上述系數的換算,從而得出相應的樣品濃度。測試前,選擇正確的程序,輸入原液和稀釋液的體積,爾後測試空白液和樣品液。然而,實驗並非一帆風順。讀數不穩定可能是實驗者最頭痛的問題。靈敏度越高的儀器,表現出的吸光值漂移越大。
事實上,分光光度計的設計原理和工作原理,允許吸光值在一定范圍內變化,即儀器有一定的准確度和精確度。如Eppendorf Biophotometer的准確度≤1.0%(1A)。這樣多次測試的結果在均值1.0%左右之間變動,都是正常的。另外,還需考慮核酸本身物化性質和溶解核酸的緩沖液的pH值,離子濃度等:在測試時,離子濃度太高,也會導致讀數漂移,因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液,如TE,可大大穩定讀數。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素:由於樣品中不可避免存在一些細小的顆粒,尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干歲團擾測試效果。為了最大程度減少顆粒對測試結果的影響,要求核酸吸光值至少大於0.1A,吸光值最好在0.1-1.5A。在此范圍內,顆粒的干擾相對較小,結果穩定。從而意味著樣品的濃度不能過低,或者過高(超過光度計的測試范圍)。最後是操作因素,如混合要充分,否則吸光值太低,甚至出現負值;混合液不能存在氣泡,空白液無懸浮物,否則讀數漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,否則濃度差異太大;換算系數和樣品濃度單位選擇一致;不能採用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達到比色杯要求的最小體積等多個操作事項。
除了核酸濃度,分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度,如A260/A280的比值,用於評估樣品的純度,因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品,比值大於1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低於1.8 或者2.0,表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,較純凈的核酸A260/A230的比值大於2.0。A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品,A320一般是0。
蛋白質的直接定量(UV法)
這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。選擇Warburg 公式,光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應的換算方法,將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質測定過程非常簡單,先測試空白液,然後直接測試蛋白質。由於緩沖液中存在一些雜質,一般要消除320nm 的「背景」信息,設定此功能「開」。與測試核酸類似,要求A280的吸光值至少大於0.1A,最佳的線性范圍在1.0-1.5 之間。實驗中選擇Warburg 公式顯示樣品濃度時,發現讀數「漂移」。這是一個正常的現象。事實上,只要觀察A280的吸光值的變化范圍不超過1%,表明結果非常穩定。漂移的原因是因為Warburg 公式吸光值換算成濃度,乘以一定的系數,只要吸光值有少許改變,濃度就會被放大,從而顯得結果很不穩定。蛋白質直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。紫外直接定量法相對於比色法來說,速度快,操作簡單;但是容易受到平行物質的干擾,如DNA的干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。
比色法蛋白質定量
蛋白質通常是多種蛋白質的化合物,比色法測定的基礎是蛋白質構成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應,產生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數目直接相關,從而反應蛋白質濃度。
比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry 等幾種方法。
Lowry 法:以最早期的Biuret 反應為基礎,並有所改進。蛋白質與Cu2 反應,產生藍色的反應物。但是與Biuret 相比,Lowry 法敏感性更高。缺點是需要順序加入幾種不同的反應試劑;反應需要的時間較長;容易受到非蛋白物質的影響;含EDTA,Triton x-100,ammonia sulfate 等物質的蛋白不適合此種方法。
BCA(Bicinchoninine acid assay)法:這是一種較新的、更敏感的蛋白測試法。要分析的蛋白在鹼性溶液里與Cu2 反應產生Cu ,後者與BCA形成螯合物,形成紫色化合物,吸收峰在562nm波長。此化合物與蛋白濃度的線性關系極強,反應後形成的化合物非常穩定。相對於Lowry法,操作簡單,敏感度高。但是與Lowry法相似的是容易受到蛋白質之間以及去污劑的干擾。
Bradford 法:這種方法的原理是蛋白質與考馬斯亮蘭結合反應,產生的有色化合物吸收峰595nm。其最大的特點是,敏感度好,是Lowry 和BCA 兩種測試方法的2 倍;操作更簡單,速度更快;只需要一種反應試劑;化合物可以穩定1小時,方便結果;而且與一系列干擾Lowry,BCA 反應的還原劑(如DTT,巰基乙醇)相容。但是對於去污劑依然是敏感的。最主要的缺點是不同的標准品會導致同一樣品的結果差異較大,無可比性。
某些初次接觸比色法測定的研究者可能為各種比色法測出的結果並不一致,感到迷惑,究竟該相信哪種方法?由於各種方法反應的基團以及顯色基團不一,所以同時使用幾種方法對同一樣品得出的樣品濃度無可比性。例如:Keller等測試人奶中的蛋白,結果Lowry,BCA 測出的濃度明顯高於Bradford,差異顯著。即使是測定同一樣品,同一種比色法選擇的標准樣品不一致,測試後的濃度也不一致。如用Lowry測試細胞勻漿中的蛋白質,以BSA作標准品,濃度1.34mg/ml,以a球蛋白作標准品,濃度2.64mg/ml。因此,在選擇比色法之前,最好是參照要測試的樣本的化學構成,尋找化學構成類似的標准蛋白作標准品。另外,比色法定量蛋白質,經常出現的問題是樣品的吸光值太低,導致測出的樣品濃度與實際的濃度差距較大。關鍵問題是,反應後1011分光光度計的重要配件—— 比色杯的顏色是有一定的半衰期,所以每種比色法都列出了反應測試時間,所有的樣品(包括標准樣品),都必須在此時間內測試。時間過長,得到的吸光值變小,換算的濃度值降低。除此,反應溫度、溶液PH值等都是影響實驗的重要原因。此外,非常重要的是,最好是用塑料的比色法。避免使用石英或者玻璃材質的比色杯,因為反應後的顏色會讓石英或者玻璃著色,導致樣品吸光值不準確。
細菌細胞密度(OD 600)
實驗室確定細菌生長密度和生長期,多根據經驗和目測推斷細菌的生長密度。在遇到要求較高的實驗,需要採用分光光度計准確測定細菌細胞密度。OD600是追蹤液體培養物中微生物生長的標准方法。以未加菌液的培養液作為空白液,之後定量培養後的含菌培養液。為了保證正確操作,必須針對每種微生物和每台儀器用顯微鏡進行細胞計數,做出校正曲線。實驗中偶爾會出現菌液的OD值出現負值,原因是採用了顯色的培養基,即細菌培養一段時間後,與培養基反應,發生變色反應。另外,需要注意的是,測試的樣品不能離心,保持細菌懸浮狀態。
分光光度計的重要配件—— 比色杯
比色杯按照材質大致分為石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根據不同的測量體積,有比色杯和毛細比色杯等。一般測試核酸和紫外定量蛋白,均採用石英杯或者玻璃杯,但是不適合比色法測定。因為反應中的染料(如考馬斯亮蘭)能讓石英和玻璃著色,所以必須採用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不適合用於在紫外范圍內測試樣品。
由於另外測試的樣品量不同,所以一般分光光度計廠家提供不同容積的比色杯以滿足用戶不同的需求。目前市場已經存在一種既可用於核酸、紫外蛋白質定量,亦可用於蛋白比色法測定的塑料杯,樣品用量僅需50μl,比色杯單個無菌包裝,可以回收樣品。如Eppendorf UVette®塑料比色杯,是目前比色杯市場上一個革新。隨著生命科學以及相關學科發展,對此類科學的實驗研究提出更高的要求,分光光度計將是分子生物學實驗室不可缺少的儀器,也成為微生物、食品、制葯等相關實驗室的必備設備之一。
隨著科技的發展,現在比色杯已經不是使用分光光度計時的必備物品。目前國外Nanodrop公司(現已被Thermo Fisher公司收購)生產的ND1000分光光度計與舊式分光光度計相比,已經可以做到無需稀釋樣品,無需使用比色杯,每次測量僅需1-2μl樣品即可完成測量。
H. 有沒有一種方法是用721分光光度計來驗證蒸餾水是否純潔
水裡
成分
復雜,有機物、鉀鈉鈣鎂鐵
金屬離子
、
氯離子
等都可能存在。對於
721分光光度計
,只能把這些物質形成特徵可見顏色,才能驗證,否則得不到結論。例如,用
純凈水
做參比,測得的水
吸光度
值大於零,可以證明「蒸餾水不是純潔」的,但是如果吸光度值等於零,還不能說「蒸餾水是否純潔」。因為,很多
離子
是無色的。
所以721分光光度計不能作為來驗證蒸餾水是否純潔的
儀器
。
實際上驗證水的
純度
採用
電導
率儀。電導越小,水越純。
I. 紫外可見分光光度計如何使用
1、機器開關在機器的右側,按一下就會打開,有個小的屏幕,可升神團以按數字鍵來操作選項,測吸光值操作。
J. 分光光度計是測什麼的
分光光度計是測食品廠、飲用水廠辦理QS、HACCP認證的必備檢驗設備。
分光光度計採用可產生多種波長的光源。通過一系列分光裝置,產生特定波長的光燃稿源。光線穿過被皮咐孝測樣品後,部分光線被吸收。計算樣品的吸光度值並轉換成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
當單色光輻射通過被測物質溶液時,被測物質吸收的量與物質濃度和液層厚度(光路長度)成正比。在可見光區,除了一些吸收光的物質外,許多物質本身並不吸收,但可以通過加入顯色劑或加工使其在一定條件下顯色來測定,簡余因此也稱為比色分析。由於顯色時影響色深的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應使用標准品或參比品同時操作。