半微量定氮蒸餾時間

1. 請問半微量凱式定氮法的詳細步驟，謝謝！！順便問下全量半微量和微量的區別是什麼呢

(一) 方法原理

樣品與硫酸一同加熱消化, 分解有機質, 釋放出的NH3 與硫酸結合成硫酸銨留在溶液中。在定氮消化瓶中,用氫氧化鈉中和硫酸銨生成氫氧化銨,加熱又分解NH3 ,用硼酸吸收, 用標定過的鹽酸或硫酸滴定, 從而計算出總氮量, 換算為蛋白質量。
(二) 儀器、設備

1. 儀器
分析天平: 感量0.0001克；實驗用粉碎機；半微量凱氏蒸餾裝置；半微量滴定管, 容積10毫升；硬質凱氏燒瓶: 容積25毫升, 50毫升；錐形瓶: 容積150毫升；電爐: 600瓦。

2. 試劑
(1) 鹽酸: 分析純, 0.02mol/L, 0.05mol/L標准溶液(鄰苯二甲酸氫鉀法標定)；
(2) 氫氧化鈉: 工業用或化學純, 40%溶液(W/V)；
(3) 硼酸: 分析純, 2%溶液(W/V)；
(4) 硼酸混合指示劑: 溴甲酚綠0.1克, 甲基紅0.1克分別溶於95%乙醇中,混合後稀至100毫升, 將混合指示劑與2%硼酸溶液按 1:100比例混合, 用稀酸或稀鹼調節PH值為4.5, 使呈灰紫色, 此溶液放置時間不宜過長, 需在1個月之內使用；
(5) 加速劑: 五水合硫酸銅(分析純)10克, 硫酸鉀(分析純)100克在研缽中研磨, 仔細混勻, 過40目篩；
(6) 濃硫酸: 比重1.84, 無氮；雙氧水: 分析純,30%；蔗糖: 分析純；
(7) 雙氧水硫酸混合液(簡稱混液): 雙氧水、硫酸、水的比例為3:2:1, 即在100毫升蒸餾水中,慢慢加入200毫升濃硫酸, 待冷卻後, 將其加入300毫升30%雙氧水, 混勻, 此混液可一次配製500～1000毫升貯藏於試劑瓶中備用, 夏天最好放入冰箱或陰涼處貯藏, 室溫(20℃)上下時不必冷藏, 貯藏進間不超過1個月 。

(三) 操作步驟

1. 樣品的選取和制備 選取有代表性的種子(帶殼種子需脫殼)挑揀干凈, 按四分法縮減取樣, 取樣量不得少於20克。將種子放於60～65℃烘箱中乾燥8小時以上, 用粉碎機磨碎, 95%通過40目篩, 裝入磨口瓶備用。
2. 稱樣 稱取0.1克試樣兩份(含氮1～7毫克), 精確至0.0001克, 同時測定試樣的水分含量。
3. 消煮1 將試樣置開25毫升凱氏瓶中, 加入加速劑粉末。除水稻為1克外, 其它均為2克。然後加3毫升硫酸, 輕輕搖動凱氏瓶, 使試樣被硫酸濕潤, 將凱氏瓶傾斜置於電爐上加熱, 開始小火, 待泡沫停止後加大火力, 保持凱氏瓶中的液體連續沸騰, 沸酸在瓶頸中部冷凝迴流。待溶液消煮到無微小的碳粒並呈透明的藍綠色時, 谷類繼續消煮30分鍾,豆類繼續消煮60分鍾。
4. 消煮2 將試樣置於50毫升凱氏瓶中, 加入0.5克加速劑和3毫升混液,在凱氏瓶上放一曲頸小漏斗, 傾斜在電爐上加熱, 開始小火(用調壓器將電壓控制在175伏左右), 保持凱氏瓶中液體呈微沸狀態。5分鍾後加大火力(將電壓控制在200伏左右)。保持凱氏瓶中液體連續沸騰, 消煮總時間, 水稻、高粱為30分鍾, 其它均為45分鍾。
注: 消煮中列入兩種消煮條件, 經與國際穀物化學協會標准法(ICC)比較, t值測驗均不顯著, 准確度與精密度也基本一致,在具體工作中可根據實際情況取其一種。
5. 蒸餾 消煮液稍冷卻後加少量蒸餾水, 輕輕搖勻。移入半微量蒸餾裝置的反應室中,用適量蒸餾水沖洗凱氏瓶4～5次。蒸餾時將冷凝管末端插到盛有10毫升硼酸指示劑混合液的錐形瓶中, 向反應室中加入40%氫氧化鈉溶液15毫升(如採用消煮2的條件, 加10毫升即可)。然後通氣蒸餾, 當餾出液體積約達50毫升時,降下錐形瓶。使冷凝管末端離開液面, 繼續蒸餾1～2分鍾, 用蒸餾水沖洗冷凝管末端,洗液均需流入錐形瓶中。
6. 滴定 谷類以0.02mol/L, 豆類以0.05mol/L標准鹽酸或硫酸滴定至錐形瓶中的溶液由藍綠色變成灰紫色為終點。空白用0.1克蔗糖代替樣品作空白測定。消耗標准酸溶液的體積不得超過0.3毫升。

(四) 結果計算

式中:
V2 滴定試樣時消耗標准酸的體積(毫升)
V1 滴定空白時消耗標准酸的體積(毫升)
N標准酸溶液的濃度(mol/L)
K 氮換算成粗蛋白質的系數
W 試樣重量(克)
X 試樣水分含量
0.0140每毫摩爾氮的克數
平行測定的結果用算術平均值表示,保留小數後二位。
兩份試樣粗蛋白質的平行測定結果為15%以下時, 其相對相差不得大於3%；15%～30%進為2%；30%以上為1%。

凱氏定氮法中的常量，微量，和半微量區別：
區別在於檢測用樣品量，你可以按標准進行操作，沒有必要拘泥於某一方法
主要看你樣品量是否足夠
1、常量由於可以把全部消化液一同蒸餾測定，故較適合蛋白質含量低的樣品。
2、微量、半微量差別在裝置上，二者皆屬於水蒸汽蒸餾操作，只是前者把蒸汽直接導入反應室內，後者把蒸汽導入反應室外加熱，由於二者皆取消化液的一部份操作，可平行蒸餾操作，但檢測限要較常量法高。
3、純粹從回收率的角度看，半微量要稍好。

2. 化驗飼料中真蛋白含量使用的氫氧化鈉溶液的配製與標定

一、原理 蛋白質在一定鹼性條件下能與重金屬鹽類發生鹽析作用而析出沉澱．此沉澱物不溶於熱水。而非蛋白氮類物質易溶於水。用熱水洗滌沉澱．將水溶性含氮物質洗去，剩下的沉澱物質再用凱氏定氮法測定即可得出飼料真蛋白質的含量。 二、測定所需的材料 1．儀器和設備 實驗室用台式粉碎機、分樣篩(20目)、分析天平(感量0．1mg)、燒杯(250m1)、玻璃棒、玻璃漏斗、中速定量濾紙(直徑15cm)、表面皿(直徑10cm)、乾燥箱(可控溫度65～70℃)、凱氏燒瓶(100m1)、燒煮爐或電爐、半微量定氮蒸餾器、容量瓶(100m1)、錐形瓶(250m1)、酸式滴定管(50m1)。 2．試劑與試液 硫酸AR、10％ 硫酸銅水溶液、硫酸鉀或無水硫酸鈉AR、氫氧化鈉AR、40％ 氫氧化鈉水溶液、2．5％氫氧化鈉水溶液、2％ 硼酸水溶液、0．05％mo]／]鹽酸標准溶液、氯化鋇試液、5％氯化鋇水溶液、0．1％ 甲基紅乙醇溶液、0．5％ 溴甲酚綠乙醇溶液。 三、樣品的選取與制備 取有代表性的樣品約lkg。用四分法分為兩份。一份裝瓶加封作為留用樣品。另一份粉碎過20目。裝於廣口瓶中貼標簽待測。 四、測定步驟 1．試樣的前處理 准確稱取試樣1～2g(精確到0．1mg)於250ml燒杯中，加蒸餾水50ml煮沸．依次加入10％硫酸銅水溶液20ml和25％氫氧化鈉溶液20rnl，邊加邊攪拌，加完後繼續攪拌幾分鍾。放置2小時或靜置過夜，沉澱物以中速定量濾紙過濾。用70℃以上熱水18ml反復洗滌沉澱．直至濾液無沉澱為止(取氯化鋇試液滴於表面皿中。加2mol／l鹽酸溶液1滴．滴人濾液．在黑色背景下觀察應無白色沉澱)。然後，將濾紙和沉澱物包好，放人烘箱中在65～70℃下乾燥2小時。 2．試樣的消化 將烘乾的試樣連同濾紙一起放人凱氏燒瓶中．依次加入硫酸鉀或無水硫酸鈉9 硫酸銅1 濃硫酸25ml，搖勻，爾後置於電爐上先低溫(100～200~C)加熱，注意防止泡沫浮起，待泡沫消失後再提高加熱溫度(約410~C)至沸騰，消化至溶液澄清無黑點並呈藍綠色，再繼續加熱30分鍾，然後將凱氏燒瓶移出電爐放冷。 3．定容 將冷卻後的消化液加蒸餾水約10～20ml，』搖勻後轉入100ml容量瓶中，再加10～20ml蒸餾水洗滌凱氏燒瓶。溶液並入容量瓶中，如此反復洗滌，直至消化液全部轉入容量瓶中。待冷卻至室溫後，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。即為試樣分解液。 4．蒸餾 採用半微量凱氏定氮蒸餾法。先將水蒸汽發生器與半微量凱氏定氮蒸餾器連接好。在水蒸汽發生器的水中加入甲基紅指示劑3滴與硫酸數滴，使水溶液保持橙紅色，否則應補加少許硫酸。取20ml2％硼酸水溶液於250ml錐形瓶中，加0．1％甲基紅乙醇溶液5～6滴，0．5％溴甲酚綠乙醇溶液2～3滴，搖勻。然後將錐形瓶置於半微量凱氏定氮蒸餾器的末端．使冷凝管末端浸入此吸收液面下2／3處。准確移取試樣分解液10～15ml注入半微量定氮蒸餾器中，用少量蒸餾水沖洗進樣口，爾後緩慢加入40％氫氧化鈉水溶液20ml。用少量蒸餾水沖洗進樣口，用玻璃塞塞好進樣口。再加適量蒸餾水封住進樣口以防止漏氣。蒸餾3～5分鍾以後待冷凝管末端管口之餾出液呈中性(紅色石蕊試紙不變色)時將冷凝管末端離開吸收液面並沖洗冷凝管末端管口，洗液並入吸收液。再蒸餾1～2分鍾後用蒸餾水沖洗冷凝管末端管口，洗液並入吸收液。然後將錐形瓶移出，准備滴定。此時應夾斷氣源。排出廢液，准備下一個樣品的測定。 5．滴定 吸收氨後的吸收液立即用0．05tool／1的鹽酸標准溶液滴定使溶液顏色由藍綠色變為灰紅色即為滴定終點。同時記錄鹽酸標准溶液的耗用量。 6．空白 在進行樣品測定的同時進行空白測定。空白測定除不加試樣外其他操作步驟與試樣相同。空白試驗消耗的鹽酸標准溶液的體積不得超過0．5ml。 7．結果計算 五、注意事項 1．在試樣的前處理過程中，「煮沸」要求是加熱至沸並保持30分鍾，目的是使試樣中的非蛋白氮類物質充分溶解於水中。加10％硫酸銅溶液和25％氫氧化鈉溶液時最好採用移液管移取，然後沿著燒杯內壁緩慢滴加，一方面防止局部氫氧化鈉太濃將溶解部分蛋白質，這樣會導致最終結果偏低；另一方面是為了使試樣中的真蛋白質充分鹽析：放置2小時或靜置過夜也是這個道理。沉澱物宜以雙層中速定量濾紙過濾，雙層濾紙可以加快過濾速度，同時又不致於將沉澱物過濾掉。濾液無SO+2表明了已充分洗滌沉澱物，因為如果濾液中仍有SO+2 。則表明沉澱物中間仍可能夾雜有部分可溶性非蛋白氮類物質(如NH )，若不繼續洗滌則將導致最終結果偏高。將濾紙和殘渣(沉澱物)包好放入烘箱中於65～70cc下乾燥2小時是為了使沉澱物充分乾燥。一方面是為了避免沉澱物中仍夾雜有一些氨類物質(盡管這種情況一般不會發生。因為濾液已經過了氯化鋇試液的檢驗，但仍不能排除因人眼觀察的局限性使其中間仍夾雜有部分熱烘乾的過程中揮發掉)；另一方面也是為了下一步試樣消化的順利進行。因為如果試樣潮濕，炭化升溫過快，氣體驟然膨脹不易從凱氏燒瓶中散發出去，很容易使試樣與氣體一同沖出凱氏燒瓶從而導致消化失敗。 2．消化時應經常轉動凱氏燒瓶以便使消化進行得迅速而完全。在炭化時如有黑色碳粒濺在瓶壁上應將凱氏燒瓶移出。待冷卻後加少量蒸餾水沖洗之。爾後再繼續消化 3．對膠體物質或脂肪含量較高的樣品。消化時應防止泡沫溢出瓶口．如發現有泡沫溢至瓶頸時應立即移開火源，並加1～2滴蒸餾水再繼續消化。 4．蒸餾過程中要注意氣體通路。即管夾要有一個打開，以免燙傷。在加試樣分解液或鹼液於反應室時要快。應先檢查氣源是否夾斷。廢液流出口是否暢通。開始蒸餾時應先通蒸汽後夾斷廢液排出口。否則所加液迴流排出。 核心提示：飼料特別是植物性飼料中含量較多的非蛋白氮化合物如氨化物不能或不能完全被單胃動物(如豬、禽等)利用，只有真蛋白質才能被單胃動物消化、吸收與利用。因此飼料真蛋白質含量比飼料粗蛋白含量更能反映出飼料的營養價值。

3. 亞甲基藍光度法

方法提要

沉積物試樣中的硫化物同鹽酸反應，生成的硫化氫隨水蒸氣進入乙酸鋅溶液中被吸收，生成硫化鋅。吸收液中的硫離子在酸性條件和三價鐵離子存在下，與對氨基二甲基苯胺二鹽酸鹽反應生成亞甲基藍，在波長650nm處測定其吸光度。

方法適用海洋、河流沉積物中硫化物的測定。檢出限w(S)為0.3×10^-6。

儀器

硫化氫發生-吸收裝置(圖76.1)。

半微量定氮蒸餾器(圖76.2)，冷凝器下端附有可以取下的連接管。

分光光度計。

圖76.1 硫化氫發生-吸收裝置

圖76.2 半微量定氮蒸餾器(凱氏)

試劑

乙酸鋅溶液(100g/L)稱取50g乙酸鋅［Zn(Ac)₂·2H₂O］加水溶解並稀釋至500mL，搖勻。

碘酸鉀標准溶液c(1/6KIO₃)=0.0100mol/L稱取0.3567g預先在120℃烘乾2h並在乾燥器中冷卻的碘酸鉀(KIO₃)，加水溶解後移入1000mL容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，用前配製。

碘溶液c(1/2I₂)=0.0100mol/L稱取10g碘化鉀(KI)溶於50mL水中，加入1.27g碘片(I₂)，溶解後，移入1000mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。

無水碳酸鈉。

乙酸。

澱粉溶液(5g/L)稱取1g可溶性澱粉(化學純)，用少量水調成糊狀，加入100mL沸水，攪勻。繼續煮至透明。冷卻後，加入1mL乙酸，稀釋至200mL，盛於試劑瓶中。

硫代硫酸鈉標准溶液c(Na₂S₂O₃)≈0.01mol/L稱取25g硫代硫酸鈉(Na₂S₂O₃·5H₂O)，用新煮沸並冷卻的水溶解，加入2gNa₂CO₃，溶解後轉入棕色試劑瓶中，加水至10L，混勻。置於陰涼處，8～10天後標定其濃度。

標定移取15.00mL碘酸鉀標准溶液［c(1/6KIO₃)=0.0100mol/L］，沿壁注入100mL碘量瓶中，用少許水淋洗瓶壁，加入0.5gKI，用刻度移准管沿瓶壁注放1mL(1+3)H₂SO₄，塞好瓶塞，輕搖混勻，用少許水封口，在暗處放置2min，半開瓶塞，沿瓶壁加50mL水，在不斷搖動下，用硫代硫酸鈉標准溶液滴定至溶液呈淺黃色，加入1mL澱粉溶液，繼續滴定至藍色剛剛消失為止。計算硫代酸鈉溶液的濃度(mol/L)。

硫化物標准儲備溶液的制備及標定使用硫化氫發生裝置(見圖76.1)，向200mL10g/LNa₂S溶液中緩緩地滴加5.0mL(1+2)HCl，產生的硫化氫氣體被氮氣帶出，用500mL乙酸鋅溶液［Zn(Ac)₂·2H₂O，1g/L］吸收生成的硫化鋅。將吸收液用中速定量濾紙過濾，混勻。此過程應在通風櫃中進行。

標定移取20.00mL硫標准儲備溶液於250mL碘量瓶中，依次加40mL水、20.00mL碘溶液、10mL(1+9)HCl，混勻。於暗處放置5min，用硫代硫酸鈉標准溶液滴定至溶液呈淺黃色。加入1mL澱粉溶液，繼續滴定至藍色剛剛消失。

同時移取20.0mL水，按上法進行空白滴定。

按下式計算硫化物標准儲備溶液的濃度:

岩石礦物分析第四分冊資源與環境調查分析技術

式中:ρ_(S2-)為硫的質量濃度，μg/mL;V₂為滴定空白溶液消耗的硫代硫酸鈉標准溶液的體積，mL;V₁為滴定硫化物標准溶液消耗的硫代硫酸鈉標准溶液的體積，mL;c為硫代硫酸鈉標准溶液的濃度，mol/L;V為硫化物標准儲備溶液的體積，mL。

硫化物標准溶液ρ(S^2-)=10.0μg/mL移取一定體積的硫化物標准儲備溶液，按下式計算，將其質量濃度調整為10.0μg/mL。

岩石礦物分析第四分冊資源與環境調查分析技術

式中:V₄為應量取的硫化物標准儲備溶液的體積，mL;V₃為欲配製的硫化物標准使用溶液的體積，mL;ρ₃為硫化物標准溶液的濃度，μg/mL;ρ₄為硫化物標准儲備溶液的濃度，μg/mL。

硫酸鐵銨溶液(125g/L)稱取25g硫酸鐵銨［Fe(NH₄)(SO₄)₂·12H₂O］於250mL燒杯中，加100mL水，5mLH₂SO₄，稍加熱使溶解，加水至200mL，混勻。如渾濁則應過濾。

對氨基二甲基苯胺二鹽酸鹽溶液(1g/L)稱取1g對氨基二甲基苯胺二鹽酸［NH₂C₆H₄N(CH₃)₂·2HCl，化學純］溶於700mL水中，在不斷攪拌下，緩緩地加入200mLH₂SO₄，冷卻後用水稀釋至1000mL，混勻，貯存於棕色試劑瓶中，置於冰箱中保存。

校準曲線

移取0.00mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL、3.00mL硫化物標准溶液(10.0μg/mL)，置於50mL容量瓶中，加10mL乙酸鋅溶液，混勻。加入5mL對氨基二甲基苯胺二鹽酸鹽溶液、1mL硫酸鐵銨溶液，水稀釋至刻度，充分混勻。校準系列的濃度(以S^2-計)分別為0.00μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.15μg/mL、0.20μg/mL、0.25μg/mL、0.30μg/mL。靜置10min，將溶液移入1cm比色皿中，用水作參比，於波長650nm處測量吸光度。繪制校準曲線。

分析步驟

稱取3g(精確至0.01g)混勻的濕試樣，置於50mL燒杯中，加5mL水、2～3mL乙酸鋅溶液，用少許水全量轉入定氮裝置中。

移取10mL乙酸鋅溶液於100mL刻度試管中，將冷凝器下端的玻璃連接管插入刻度試管至接近其底部，通水蒸氣蒸餾(見圖76.2)。打開冷凝器的冷卻水，當定氮裝置中的試樣被蒸氣充分攪動並加熱近沸時，迅速加入15mL(1+2)HCl，並立即蓋緊蓋子，繼續通水蒸氣。當刻度試管中的吸收液達到50～60mL時，將連接管和刻度試管一並取下，停止通水蒸氣，用少量水沖洗連接管，沖洗液並入吸收管中。加入5mL對氨基二甲基苯胺二鹽酸鹽溶液、1mL硫酸鐵銨溶液，用水稀釋至刻度，混勻。靜置10min，以下測定步驟同校準曲線。

按下式計算硫的含量:

岩石礦物分析第四分冊資源與環境調查分析技術

式中:w(S^2-)為試樣中硫化物硫的質量分數，10^-6;ρ(S^2-)為從校準曲線上查得的硫的濃度，μg/mL;V為吸收液定容的體積，mL;m為稱取試樣的質量，g;w(H₂O^-)為濕水樣中吸附水的質量分數。

注意事項

硫化物標准溶液應在使用前臨時配製。

氮氣中如有微量氧，可安裝洗氣瓶(內裝亞硫酸鈉飽和溶液)予以除去。

4. 為什麼半微量定氮法進行肉質的揮發性鹽基氮實驗，沒有冷凝液體流出，裝置不漏氣啊，

揮發性鹽基氮是樣品水浸液在弱鹼下與水蒸汽一起蒸餾出來的總氮量， 是富含蛋白質類物質腐敗變質的產物， 它也是鑒定食物腐敗變質程度的一個指標。發性鹽基氮受發酵時間、溫度等因素影響，按照國家標准食品衛生理化檢驗GB ／ T 5009.44-2003，對發酵食品可採用半微量定量法， 完成揮發性鹽基氮指標的檢測。半微量法具有科學性、合理性的玻璃儀器操作, 減少污染, 准確度高, 適合於所有的樣品檢測, 因此一直沿用至今。但存在消化時間太長( 不同材料通常1 到幾小時) 及放出有毒有害氣體, 必須在通風櫥中進行的弊端。
而用全自動凱氏定氮法是測定食品中蛋白質含量，否能對樣品中揮發性鹽基氮等項目進行檢測,有待對其功能做進一步探討。

5. 請教揮發性鹽基氮的檢測問題

最好是用離心機過濾。。盡量減少過濾的時間。。。 VBN的檢測反映的是魚粉的腐敗過程所產生的氨以及胺類等鹼性含氮物質，因此，離心後的樣液應馬上檢測。作者以粗蛋白含量為65%的進口秘魯魚粉為例，對比時間對VBN的影響（見表1）。 表1 時間對VBN的影響 時間 VBN（mg/100g） 2h 175 1h 158 0.5h 133 10min 112 5min 106 3min 105 以上表明，試液應在5min以內進行測定。

6. 凱式定氮法的操作步驟

1. 樣品的選取和制備 選取有代表性的種子(帶殼種子需脫殼)挑揀干凈, 按四分法縮減取樣,
取樣量不得少於20克。將種子放於60～65℃烘箱中乾燥8小時以上, 用粉碎機磨碎, 95%通過40目篩, 裝入磨口瓶備用。
2. 稱樣
稱取0.1克試樣兩份(含氮1～7毫克), 精確至0.0001克, 同時測定試樣的水分含量。
3. 消煮1 將試樣置開25毫升凱氏瓶中,
加入加速劑粉末。除水稻為1克外, 其它均為2克。然後加3毫升硫酸, 輕輕搖動凱氏瓶, 使試樣被硫酸濕潤, 將凱氏瓶傾斜置於電爐上加熱, 開始小火,
待泡沫停止後加大火力, 保持凱氏瓶中的液體連續沸騰, 沸酸在瓶頸中部冷凝迴流。待溶液消煮到無微小的碳粒並呈透明的藍綠色時,
谷類繼續消煮30分鍾,豆類繼續消煮60分鍾。
4. 消煮2 將試樣置於50毫升凱氏瓶中,
加入0.5克加速劑和3毫升混液,在凱氏瓶上放一曲頸小漏斗, 傾斜在電爐上加熱, 開始小火(用調壓器將電壓控制在175伏左右),
保持凱氏瓶中液體呈微沸狀態。5分鍾後加大火力(將電壓控制在200伏左右)。保持凱氏瓶中液體連續沸騰, 消煮總時間, 水稻、高粱為30分鍾,
其它均為45分鍾。
注: 消煮中列入兩種消煮條件, 經與國際穀物化學協會標准法(ICC)比較, t值測驗均不顯著,
准確度與精密度也基本一致,在具體工作中可根據實際情況取其一種。
5. 蒸餾 消煮液稍冷卻後加少量蒸餾水,
輕輕搖勻。移入半微量蒸餾裝置的反應室中,用適量蒸餾水沖洗凱氏瓶4～5次。蒸餾時將冷凝管末端插到盛有10毫升硼酸指示劑混合液的錐形瓶中,
向反應室中加入40%氫氧化鈉溶液15毫升(如採用消煮2的條件, 加10毫升即可)。然後通氣蒸餾, 當餾出液體積約達50毫升時,降下錐形瓶。使冷凝管末端離開液面,
繼續蒸餾1～2分鍾, 用蒸餾水沖洗冷凝管末端,洗液均需流入錐形瓶中。
6. 滴定 谷類以0.02mol/L,
豆類以0.05mol/L標准鹽酸或硫酸滴定至錐形瓶中的溶液由藍綠色變成灰紫色為終點。空白用0.1克蔗糖代替樣品作空白測定。消耗標准酸溶液的體積不得超過0.3毫升。

看完了採納我哦~~

7. 有誰知道凱氏定氮的具體步驟，注意事項，！！

1、消化:精密稱取大豆樣品1.0g左右，放入乾燥的250 ml消化管中，加入0.4g CuSO4 7g K2SO4 10ml H2SO4先200'C炭化，待泡沫停止後提高溫度到450'C，加熱至液體沸騰，待瓶內液體呈藍綠色透明後，再繼續加熱0.5h。

冷卻後加入20ml水，移入100ml容量瓶中，用少量水洗滌消化管2~3次，洗液合並於容量瓶中定容。

2、蒸餾:連接凱氏定氮裝置，於水蒸氣發生瓶內裝水至2/3處，加甲基紅指示劑數滴及數ml硫酸，保持水呈酸性。加入數粒玻璃珠以防暴沸，調節火力加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。

3、向吸收瓶內加入20g/L硼酸溶液20ml及混合指示劑2滴，並使冷凝管下端插入液面以下，吸取10ml樣品消化稀釋液由進樣口進入反應室，並以10ml水洗滌進樣口使其流入反應室內，將400g/L NaOH溶液10ml倒入進樣口，立即夾緊螺旋夾，並加入少量蒸餾水，密封進樣口。

當蒸汽通入反應室時，准確計時，反應產生的氨氣通過冷凝管進入吸收瓶，蒸餾5min，移動吸收瓶，使冷凝管下端離開液面，再蒸餾Imin，然後用少量水沖洗冷凝管下端外部，取下吸收瓶。

停止加熱，使反應室內的液體進入汽水分離器，打開進樣口的螺旋夾，將汽水分離器的液體放出。再向反應室內加入蒸餾水，夾緊螺旋夾，再次進行加熱至水蒸汽放出，停止加熱，使反應室內的水進入汽水分離器，進行洗滌。

4、滴定:用0.025mol/L硫酸標准溶液滴定吸收液至灰色。

5、計算:X= 2cVX 14X5.71/m

X為樣品中蛋白質的含量，%；c為硫酸標准溶液的濃度，molL；V為樣品消化液消耗硫酸標准溶液的體積，ml；m為樣品的質量，g。

注意事項

(1) 樣品應是均勻的。固體樣品應預先研細混勻，液體樣品應振搖或攪拌均勻。

(2) 樣品放入定氮瓶內時，不要沾附頸上。萬-沾附可用少量水沖下，以免被檢樣消化不完全，結果偏低。

(3) 消化時如不容易呈透明溶液，可將定氮瓶放冷後，慢慢加入30%過氧化氫(H2O2)2-3ml，促使氧化。

(4) 在整個消化過程中，不要用強火。保持和緩的沸騰，使火力集中在凱氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白質在無硫酸存在的情況下，使氮有損失。

(5)如硫酸缺少， 過多的硫酸鉀會引起氨的損失，這樣會形成硫酸氫鉀，而不與氨作用。因此，當硫酸過多的被消耗或樣品中脂肪含量過高時，要增加硫酸的量。

(6)加入硫酸鉀的作用為增加溶液的沸點，硫酸銅為催化劑，硫酸銅在蒸餾時作鹼性反應的指示劑。

(7)混合指示劑在鹼性溶液中呈綠色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈紅色。如果沒有溴甲酚綠，可單獨使用0.1%甲基紅乙醇溶液。

(8) 氨是否完全蒸餾出來，可用PH試紙試餾出液是否為鹼性。

(7)半微量定氮蒸餾時間擴展閱讀：

凱氏定氮法原理

凱氏定氮法首先將含氮有機物與濃硫酸共熱，經一系列的分解、碳化和氧化還原反應等復雜過程，最後有機氮轉變為無機氮硫酸銨，這一過程 稱為有機物的消化。

為了加速和完全有機物質的分解，縮短消化時間，在消化時通常加入硫酸鉀、硫酸銅、氧化汞、過氧化氫等試劑，加入硫酸鉀可以提高消化液的沸點而加快有機物分解，除硫酸鉀外，也可以加入硫酸鈉、氯化鉀等鹽類類提高沸點，但效果不如硫酸鉀。

硫酸銅起催化劑的作用。凱氏定氮法中可用的催化劑種類很多，除硫酸銅外，還有氧化汞、汞、硒粉、鉬酸鈉等，但考慮到效果、價格及環境污染等多種因素，應用最廣泛的是硫酸銅。