1. 溶液配製:蒸餾水含250mmol.L-1蔗糖,1mol.L-1 EDTA,1mmol.L-1 EGTA,10 mmol.L-1 HEPES和1%BSA
加濃NaOH後就可以溶解了,因為EDTA是乙二胺四乙酸,要用強鹼來調pH,要是提前就加NaOH,很快就會溶解,效果很好
2. 朋友您好:氫氧化鈉用軟水配製可以嗎請給與支持答復!謝謝
氫氧化鈉溶液就是要用軟水配製,一般就用蒸餾水配,不能用硬水配製。
硬水中鈣、鎂離子含量較多,與氫氧化鈉會發生化學反應,生成沉澱。
3. 做BSA定量試劑時要注意的問題
首先,所用天平要精確,使用的水最好是超純水,還有就是所用的槍要精確、EP管要干凈!
4. BCA蛋白濃度檢測的實驗試劑
Bicinchoninic acid (BCA )法是在世界上常用的蛋白濃度檢驗方法之一BCA法基礎上改進而成。其原理與Lowery法蛋白定量相似,即在鹼性環境下游閉裂蛋白質與Cu 2+ 絡合並將Cu 2+ 還原成Cu + 。兩分子BCA與一個Cu + 螯合形成穩定的紫藍色復合物,在562 nm處有高的光吸收值並與蛋白質濃度成正比,據此可測定蛋白質濃度。
組成與儲存:
組分名稱 規格 保存
BCA Reagent 100ml 2-8℃
Cu Reagent 3.0ml 2-8℃
BSA標准液5 mg/神閉ml 1ml -20ºC凍存
可進態迅行500T微板(microplate)測定或50T2ml比色杯測定。
5. 求封閉液中1%的BSA是怎麼配製
取1g BSA,加蒸餾水,定容到100ml就行了。
最常用的封閉劑是0.05%-0.5%的BSA,封閉是否必要,取決於ELISA的模式及具體的實驗條件。並非所有的ELISA 固相均需封閉,封閉不當反而會使陰性本底增高。
一般說來,雙抗體夾心法,只要酶標記物是高活性的,操作時洗滌徹底,不經封閉也可得到滿意的結果。
特別是用單抗腹水直接包被,因其中大量非抗體蛋白在包被時同樣也吸附在固相表面,業已起到了類似封閉劑的作用。但在間接法測定中,封閉一般是不可少的。
(5)bsa可不可以用蒸餾水配製擴展閱讀:
判斷封閉條件,要考慮在此條件下是否能達到試驗要求,即棋盤滴定要滿足:陽性樣品OD=0.8、陰性樣品OD<=0.1,而不是看你待測樣品OD變化趨勢;
過低封閉濃度勢必造成本底過高,但過高又會使靈敏度降低,因此只要選擇能夠滿足你試驗要求的最低BSA濃度就可以了。
另外提醒,洗滌一定要徹底,很重要的。
包被後封閉前一般要洗滌一遍,以便於洗掉結合不牢固的包被物,防止在實驗中影響實驗結果;封閉後一定不要洗滌,封閉的目的就是要靠蛋白填補未被包被物佔領的空間,另外封閉液一般也具有保護作用。
如果不是用biotin-avidin系統的話,用5%脫脂奶粉做封閉液就可以了,廉價,效果也很好。
封閉液一般是用5%的BSA或者是用5%的脫脂奶粉,溶劑一般使用TBST。做實驗的時候,我一直強調這樣的一個原理,那就是在了解原理的基礎之上,我們完全可以不拘泥於書本,進行創造。就拿這個封閉液來講,要是單純的一種封閉效果仍然不好的話,我們完全可以兩種合用,我就試過1%的BSA和5%的脫脂奶粉合用進行封閉的事例。所以,搞科學研究是需要我們進行再創造的。
D、BSA交聯抗原注射到兔子體內得到一抗,我們Elisa的二抗用的是羊抗兔HRP標記的二抗。請問,在封閉時,用什麼樣的封閉液比較好呢?是無蛋白封閉液,還是羊的免疫前血清?
6. 稀釋分裝重組細胞因子用的BSA(0.1%)用什麼液體配製PBS還是Hanks液細胞因子的稀釋要求用去離子水。
BSA其實直接用蒸餾水稀釋即可。細胞培養時可用細胞培養的響應緩沖液稀釋,對BSA影響都不大。