粗蛋白消化液蒸餾時為藍色

❶ 如何檢測家禽類飼料中的粗蛋白

凱氏法測定試樣中的含氮量，即在催化劑作用下，用硫酸破壞有機物，使含氮物轉化成硫酸銨。加入強鹼進行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收後，再用酸滴定，測出氮含量，將結果乘以換算系數6.25，計算出粗蛋白含量。
2、試劑
2.1 硫酸（GB 625）：化學純，含量為98％，無氮。
2.2 混合催化劑：0.4g硫酸銅，5個結晶水（GB 665），6g硫酸鉀（HG 3—920）或硫酸鈉（HG 3—908），均為化學純，磨碎混勻。 2.3 氫氧化鈉（GB 629）：化學純，40％水溶液（m/V）。 2.4 硼酸（GB 628）：化學純，2％水溶液（m/V）。
2.5 混合指示劑：甲基紅（HG 3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚綠（HG 3—1220）0.5％乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處保存期為三個月。
2.6 鹽酸標准溶液：鄰苯二甲酸氫鉀法標定，按GB 601制備。 2.6.1 鹽酸標准溶液：c（HCl）=0.1mol/L。8.3mL鹽酸（GB 622，分析純），注入 1 000mL蒸餾水中。
2.6.2 鹽酸標准溶液：c（HCl）=0.02mol/L。1.67mL鹽酸（GB 622，分析純），注入1 000mL蒸餾水中。 2.7 蔗糖（HG 3—1001）：分析純。 2.8 硫酸銨（GB 1396）：分析純，乾燥。
2.9 硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1 000mL，加入0.1％溴甲酚綠乙醇溶液10mL，0.1％甲基紅乙醇溶液7mL，4％氫氧化鈉水溶液0.5mL，混合，置陰涼處保存期為一個月（全自動程序用）。
3、 儀器設備

3.1 實驗室用樣品粉碎機或研缽。 3.2 分樣篩：孔徑0.45mm（40目）。 3.3 分析天平：感量0.0001g。 3.4 消煮爐或電爐。
3.5 滴定管：酸式，10、25mL。 3.6 凱氏燒瓶：250mL。
3.7 凱氏蒸餾裝置：半微量水蒸氣蒸餾式。 3.8 錐形瓶：150、250mL。 3.9 容量瓶：100mL。 3.10 消煮管：250mL。
3.11 定氮儀：以凱氏原理製造的各類型半自動。
4、 試樣的選取和制備
選取具有代表性的試樣用四分法縮減至200g，粉碎後全部通過40目篩，裝於密封容器中，防止試樣成分的變化。
5 分析步驟
5.1.1 試樣的消煮
稱取試樣0.5～1g（含氮量5～80mg）准確至0.0002g，放入凱氏燒瓶中，加入6.4g混合催化劑，與試樣混合均勻，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，將 凱氏燒瓶置於電爐上加熱，開始小火，待樣品焦化，泡沫消失後，再加強火力 （360～410℃）直至呈透明的藍綠色，然後再繼續加熱，至少2h。
5.1.2 氨的蒸餾：
將試樣消煮液冷卻，加入20mL蒸餾水，轉入100mL容量瓶中，冷卻後用水稀釋至刻度，搖勻，做為試樣分解液。將半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入裝有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示劑的錐形瓶內。蒸汽發生器 的水中應加入甲基紅指示劑數滴，硫酸數滴，在蒸餾過程中保持此液為橙紅色，否則需補加硫酸。准確移取試樣分解液10～20mL注入蒸餾裝置的反應室中，用少量蒸餾水沖洗進樣入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氫氧化鈉溶液，小心提起玻璃塞使之流入反應室，將玻璃塞塞好，且在入口處加水密封，防止漏氣。蒸餾4min降下錐形瓶使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1min，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均流入錐形瓶內，然後停止蒸餾。
5.1.2.3 蒸餾步驟的檢驗
精確稱取0.2g硫酸銨，代替試樣，按5.1.2步驟進行操作，測得硫酸銨含氮量為21.19±0.2％，否則應檢查加鹼、蒸餾和滴定各步驟是否正確。
5.1.3 滴定
用5.1.2.1或5.1.2.2法蒸餾後的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L（4.6.2）鹽酸標准溶液滴定，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。
6 、空白測定

稱取蔗糖0.5g，代替試樣，按第5章進行空白測定，消耗0.1mol/L鹽酸標准溶液的體積不得超過0.2mL。消耗0.02mol/L鹽酸標准溶液體積不得超過0.3mL。
7、 分析結果的表述
7.1 計算見下式：
粗蛋白質（％）=（V2-V1）·c×0.0140×6.25/（m×V＇/V） ×100 式中：V2── 滴定試樣時所需標准酸溶液體積，mL； V1── 滴定空白時所需標准酸溶液體積，mL； c── 鹽酸標准溶液濃度，mol/L； m── 試樣質量，g；
V── 試樣分解液總體積，mL； V── 試樣分解液蒸餾用體積，mL；
0.0140── 與1.00mL鹽酸標准溶液〔c（HCl）=1.000mol/L〕相當的、以克表示的氮的質量。
6.25── 氮換算成蛋白質的平均系數。
7.2 重復性
每個試樣取兩個平行樣進行測定，以其算術平均值為結果。 當粗蛋白質含量在25％以上時，允許相對偏差為1％。 當粗蛋白含量在10％～25％之間時，允許相對偏差為2％。 當粗蛋白質含量在10％以下時，允許相對偏差為3％。

❷ 國家標准檢測蛋白質含量測定方法

蛋白質含量測定方法就是檢測元素的含量，像三聚氰胺的問題，就是通過增加N的含量使「蛋白質」含量提高的。

國家標准檢測蛋白質含量的方法叫做凱氏定氮法，食物中的蛋白質在催化加熱條件下分解，導致氨和硫酸結合產生硫酸銨。 鹼蒸餾採用無硫，硼酸吸收，用硫酸或鹽酸標准滴定溶液滴定，根據酸耗計算氮含量，再乘以轉化系數，即蛋白質含量。

具體操作步驟如下：

1.樣品處理

精確稱量0.2-2.0g固體樣品或2-5g半固體樣品或吸收10-20ml液體樣品（約30-40mg氮當量）。將其轉移至乾燥的100毫升或500毫升氮氣固定瓶中，加入0.2克硫酸銅，6克硫酸鉀和20毫升硫酸，輕輕搖動，在瓶口放置一個小漏斗，將瓶子傾斜石棉網上有45度角，有小孔。

加熱小火後，內容物碳化，泡沫完全停止，加強火力，保持瓶內液體稍微沸騰，直至液體呈藍綠色澄清透明，然後繼續加熱0.5小時。取出並冷卻，小心加入20毫升水，冷卻，移入100毫升容量瓶中，用少量水洗凈氮氣瓶，洗凈液放入容量瓶中，然後用水沖洗至刻度，混勻備用。

取相同量的硫酸銅，硫酸鉀和濃硫酸作為試劑進行空白試驗。然而，這種方法很危險，很難在實驗室中證明。大多數實驗室都有一個消化器，可以一次處理16個以上的樣品和一個可以自行設定溫度的呼吸機。它更安全，更可操作。

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除了凱氏定氮法以外，標準的測量方法還有：

• 分光光度法

食品中的蛋白質在催化加熱條件下被分解，分解產生的氨與硫酸結合生成硫酸銨，在pH4.8的乙酸鈉-乙酸緩沖溶液中與乙醯丙酮和甲醛反應生成黃色的3,5-二乙醯-2,6-二甲基-1,4-二氫化吡啶化合物。在波長400nm 下測定吸光度值，與標准系列比較定量,結果乘以換算系數，即為蛋白質含量。

• 燃燒法

樣品在900~1200℃下燃燒。在燃燒過程中，產生混合氣體。 諸如碳，硫和鹽的干擾氣體被吸收管吸收，氮氧化物被還原成氮。 形成的氮氣流由熱導檢測器（TCD）檢測。

❸ 求花生粕和豆粕用定氮儀測定粗蛋白含量的方法

凱氏定氮法

用於測定有機物的含氮量,若蛋白質的含氮量已知時，則可用此法測定樣品中蛋白質的含量。當蛋白質與濃硫酸共熱時，其中的碳、氫兩元素被氧化成二氧化碳和水，而氮則轉變成氨，並進一步與硫酸作用生成硫酸銨。此過程通常稱為「消化」。但是，這個反應進行得比較緩慢，通常需要加入硫酸鉀或硫酸鈉以提高反應液的沸點，並加入硫酸銅作為催化劑，以促進反應的進行。消化完成後，在凱氏定氮儀中加入濃鹼，可使消化液中的硫酸銨分解，游離出氨，藉助水蒸汽蒸餾法，將產生的氨蒸餾到一定量、一定濃度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨後，氨與溶液中氫離子結合，使溶液中的氫離子濃度降低，指示劑顏色改變，然後用標准無機鹽酸滴定，直至恢復溶液中原來的氫離子濃度為止。根據所用標准鹽酸的量可計算出待測物中的總氮量。蛋白質的含氮量為16%，即1克蛋白質中的氮相當於6.25克蛋白質，用凱氏定氮法測出的含氮量乘以6.25,即得樣品中蛋白質的含量。

1實驗材料1.1器材1.2試劑2實驗步驟

實驗材料

器材

微量凱氏定氮儀1套；

50ml凱氏燒瓶4個；

移液管；錐形瓶；

試管；

小玻璃珠

試劑

濃硫酸；

30％氫氧化鈉溶液；

2％硼酸溶液；

標准鹽酸溶液(0.01mol／L)。

粉末硫酸鉀—硫酸銅混合物：K2SO4與CuSO4·5H2O以3：1配比研磨混合。

混合指示劑(田氏指示劑)：由50ml0.1％甲烯藍乙醇溶液與200ml0.1％甲基紅乙醇溶液混合配成，貯於棕色瓶中備用。

樣品溶液：配製3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作為樣品。

實驗步驟

安裝凱氏定氮儀。

消化：取4個50ml凱氏燒瓶並標號,各加1顆玻璃珠，在1號及2號瓶中各加樣品1ml，催化劑(K2SO4-CuSO4·5H2O)200mg，濃硫酸5ml。注意加樣品時應直接送入瓶底，而不要沾在瓶口和瓶頸上。在3號及4號瓶中各加1ml蒸餾水和與1、2號瓶相同量的催化劑和濃硫酸，作為對照。在通風櫥內進行消化。在消化開始時應控制火力，不要使液體沖到瓶頸。待硫酸開始分解並放出SO2白煙後，適當加強火力，繼續消化，直至消化液呈透明淡綠色為止。撤掉火力，冷卻至室溫。

蒸餾：

蒸餾器的洗滌：用水洗滌干凈微量凱氏定氮儀，在蒸汽發生器中加入用幾滴硫酸酸化的蒸餾水和幾滴甲基紅指示劑，用這樣的水蒸氣洗滌凱氏定氮儀。約15分鍾後，在冷凝器下端傾斜放好裝有硼酸-指示劑的錐形瓶，繼續蒸汽洗滌2分鍾，觀察錐形瓶內的溶液是否變色，如不變色則證明蒸餾裝置內部已洗滌干凈。移走錐形瓶，停止加熱，打開夾子。

蒸餾：取下棒狀玻塞，用吸管吸取消化液，細心地插到反應室小玻璃杯的下方，塞緊棒狀玻塞。將一個含有硼酸和指示劑的錐形瓶放在冷凝器下方，使冷凝器下端浸沒在液體內。取30％的氫氧化鈉溶液10ml放入小玻璃杯中，輕提棒狀玻璃塞使之流入反應室(為了防止冷凝管倒吸，液體流入反應室必須緩慢)。尚未完全流入時，將玻璃塞蓋緊，向玻璃杯中加入蒸餾水約5ml。再輕提玻璃塞，使一半蒸餾水慢慢流入反應室，一半留在玻璃杯中作水封。加熱水蒸汽發生器，沸騰後夾緊夾子，開始蒸餾。氨氣進入錐形瓶，瓶中的酸溶液由紫色變成綠色。變色時起記時，再蒸餾5分鍾。移動錐形瓶，使硼酸液面離開冷凝管約1厘米，並用少量蒸餾水洗滌冷凝管口外面，繼續蒸餾1分鍾，移開錐形瓶，用表面皿覆蓋錐形瓶。蒸餾完畢後，須將反應室洗滌干凈，再繼續下一個蒸餾操作。待樣品和對照均蒸餾完畢後，同時進行滴定。

滴定：用0.01mol／L的標准鹽酸溶液滴定各錐形瓶中收集的氨量，硼酸指示劑溶液由綠色變淡紫色為滴定終點。

結果計算：

其中：

A為滴定樣品用去的鹽酸溶液平均ml數；

B為滴定對照液用去的鹽酸溶液平均ml數；

C為所取樣品溶液的ml數。

現在的公司有現成的儀器可以使用，上面是教材中的原理，哈哈

可以參考下面的網址

❹ 試述蛋白質測定中，樣品消化過程中內容物顏色發生什麼變化為什麼

蛋白質測定是生物化學和分子生物學研究中最常告備用、最基本的分析方法之一。人體正常值一般是 60～80 g/L。消化前加硫酸是應將附著在瓶壁上的粉末仔細沖洗至瓶中，消化 過程中應注意轉動燒瓶，利用冷凝的酸液將附著在瓶壁上的炭粒沖下，以促_消化；

消化必須在通風櫥中_行，消化開始時文火加熱，以克液體竄出。消化時如果採用 直接火加熱，火焰丌能超過液面以上，否則可能引起燒瓶爆裂；

樣品消化液丌易 澄清透明時，可將燒瓶完全冷卻後加入30%過氧化氫2~3mol 後繼續消化，直至消化 液澄清透明呈藍綠色為止。

(4)粗蛋白消化液蒸餾時為藍色擴展閱讀：

准備4個50mL凱氏燒瓶並標號，想1、2號燒瓶中加入定量的蛋白質樣品，另外兩個燒瓶作為對照，在帆坦每個燒瓶中加入硫酸鉀-硫酸銅混合物。

再加入濃硫酸，將4個燒瓶放到消化架上進行消化，之後進行蒸餾，全部蒸餾完畢後用標准鹽酸滴定各燒瓶中收集的氨量，直至指示劑混合液由綠色變回淡紫紅色，即為滴定終點，結算出蛋白質含量。

雙縮脲法是第一個用比色法測定蛋白質濃度的方法，硫銨不幹擾顯色， Cu2+與蛋白質的肽鍵，以及酪氨酸殘基絡合，形成紫藍色絡合物，此物在540nm波長處有最大吸收。首先利用標准蛋白溶液和雙縮脲試劑繪制標准曲線。

將待測血清與硫酸鈉在待測試管中混合，並用只加入硫酸鈉不含血清的試管作為對照，將兩支試管加入等量的雙縮脲試劑。

充分混合後於37℃環境態友桐中放置10分鍾，在540nm波長進行比色，以對照管調零，讀取吸光度值，由標准曲線上直接查出蛋白質含量。雙縮脲法常用於0.5g/L～10g/L含量的蛋白質溶液測定。

❺ 硫酸四氨合銅與氫氧化鈉能發生反應嗎

能發生反應，蒸餾前若加鹼量不足，消化液呈藍色不生成氫氧化銅沉澱。

可以用作化學實驗。除了用做試劑以外，由於它有很強的吸水性和潮解性，還可用做鹼性乾燥劑。也可以吸收酸性氣體（如在硫在氧氣中燃燒的實驗中，氫氧化鈉溶液可裝入瓶中吸收有毒的二氧化硫）。

在空氣中硫酸四氨合銅會水解，放出氨氣，當黃銅及銅合金受到氨腐蝕時，會出現深藍色的四氨合銅絡合物，後續會產生材料的龜裂。此問題首次發現是因為彈殼儲存場所附近有量的動物糞便。

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氫氧化鈉儲存方法

固體氫氧化鈉裝入0.5毫米厚的鋼桶中嚴封，每桶凈重不超過100 公斤；塑料袋或二層牛皮紙袋外全開口或中開口鋼桶；螺紋口玻璃瓶、鐵蓋壓口玻璃瓶、塑料瓶或金屬桶（罐）外普通木箱；螺紋口玻璃瓶、塑料瓶或鍍錫薄鋼板桶（罐）外滿底板花格箱、纖維板箱或膠合板箱。

鍍錫薄鋼板桶（罐）、金屬桶（罐）、塑料瓶或金屬軟管外瓦楞紙箱。包裝容器要完整、密封，有明顯的「腐蝕性物品」標志。

❻ 為什麼凱氏定氮的消化液是藍色不是褐色

因為有硫酸銅所以顯藍色， 試劑: 所有試劑均用不含氨的蒸餾水配製。 2.1 硫酸銅。 2.2 硫酸鉀。 2.3 硫酸。 2.4 2%硼酸溶液。 2.5 混合指示液：1份0.1%甲基紅乙醇溶液與5份0.1%溴甲酚綠乙醇溶液臨用時混合。也可用2份0.1%甲基紅乙醇溶液與1份0.1%次甲基藍乙醇溶液臨用時混合。 2.6 40%氫氧化鈉溶液。 2.7 0.025mol/L硫酸標准溶液或0.05mol/L鹽酸標准溶液。

❼ 凱氏定氮法，為什麼蒸餾時，液體變成藍綠色透明後，還要繼續加熱

一、實驗原理
蛋白質是含氮的有機化合物。蛋白質與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然後鹼化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收後再以硫酸或鹽酸標准溶液 滴定，根據酸的消耗量乘以換算系數，蛋白質含量。含氮量*6.25=蛋白含量
1.有機物中的胺根在強熱和CuSO4，濃H2SO4 作用下，硝化生成（NH4）2SO4

凱氏定氮法
凱氏定氮法反應式為：
2NH2+H2SO4+2H=(NH4)2SO4 （其中CuSO4做催化劑）
2.在凱氏定氮器中與鹼作用，通過蒸餾釋放出NH3 ，收集於H3BO3 溶液中反應式為:
(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4

2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O

3. 用已知濃度的H2SO4（或HCI）標准溶液滴定，根據HCI消耗的量計算出氮的含量，然後乘以相應的換算因子，既得蛋白質的含量

反應式為：

(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3

(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3

二、操作
1、 樣品處理：精密稱取0.2-2.0g固體樣品或2-5g半固體樣品或吸取10-20ml液體樣品（約相當氮30-40mg），移入乾燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸銅，6g硫酸鉀及20毫升硫酸，稍搖勻後於瓶口放一小漏斗，將瓶以45度角斜支於有小孔的石棉網上，小火加熱，待內容物全部炭化，泡沫完全停止後，加強火力，並保持瓶內液體微沸，至液體呈藍綠色澄清透明後，再繼續加熱0.5小時。取下放冷，小心加20ml水，放冷後，移入100ml容量瓶中，並用少量水洗定氮瓶，洗液並入容量瓶中，再加水至刻度，混勻備用。取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、濃硫酸同一方法做試劑空白試驗。但是此法比較危險，不易在實驗室演示，現在大多數實驗室有消煮儀一次可以進行多個（一次可以消煮16個樣品）樣品處理，並有通風櫥進行通風，溫度可以自己設定，更加安全和可操作性，因此逐步成為主要的凱氏定氮法的首選處理方法。
一般消解溫度都設在240度及240度以上，如果想快速消解可以適當提高溫度甚至可以用最大溫度進行消解。
2、按圖裝好定氮裝置，於水蒸氣發生器內裝水約2/3處加甲基紅 指示劑數滴及數毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入數粒玻璃珠以防暴沸，用調壓器控制，加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。
3、向接收瓶內加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示劑1滴，並使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml樣品消化液由小玻璃杯流入反應室，並以10ml水洗滌小燒杯使流入反應室內，塞緊小玻璃杯的棒狀玻璃塞。將10ml 40%氫氧化鈉溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其緩慢流入反應室，不能立即將玻璃蓋塞緊，這樣易使玻璃塞粘在進樣口，應先用蒸餾水沖洗然後再蓋，並加水於小玻璃杯以防漏氣。夾緊螺旋夾，開始蒸餾，蒸氣通入反應室使氨通過冷凝管而進入接收瓶內，蒸餾5min。移動接收瓶，使冷凝管下端離開液皿，再蒸餾1min，然後用少量水沖洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.05N硫酸或0.05N鹽酸標准溶液定至灰色或藍紫色為終點。
同時吸取10.0ml試劑空白消化液按3操作。

三、計算
X =(（V1-V2）*N*0.014)/( m*（10/100）) *F*100%
X：樣品中蛋白質的百分含量，g；
V1：樣品消耗硫酸或鹽酸標准液的體積，ml；
V2：試劑空白消耗硫酸或鹽酸標准溶液的體積，ml；
N：硫酸或鹽酸標准溶液的當量濃度；
0.014：1N硫酸或鹽酸標准溶液1ml相當於氮克數；
m：樣品的質量（體積），g（ml）；
F：氮換算為蛋白質的系數 。蛋白質中的氮含量一般為15～17.6%，按16%計算乘以6.25即為蛋白質，乳製品為6.38，麵粉為5.70，玉米、高粱為6.24，花生為5.46，米為5.95，大豆及其製品為5.71，肉與肉製品為6.25，大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83，芝麻、向日葵為 5.30。

❽ 用凱氏定氮儀蒸餾測蛋白時，加入鹼之後為什麼不變黑而是變成深藍色求解！急需！

那是你加入的加速劑的和鹼反應生成的沉澱的，是正常的

❾ 粗蛋白檢測時加鹼不變黑

向消化液中加氫氧化鈉溶液時,會產生藍色溶液或黑色沉澱,這是由於消化液中的專銅離子屬與氨生成銅氨配離子,或與鹼生成氫氧化銅,氧化銅之故,這是正常現象.硫酸銅起催化劑和顯色劑作用反之若顏色不改變,則說明鹼加得不夠,要補加.影響沉澱顏色的因素還有好多,例如環境的光線,一些不反應的雜物間雜到氫氧化物裡面,產生的金屬絡合物等等.