葉綠體在蒸餾水中

⑴ 下列有關實驗課題與相應方法的敘述，錯誤的是

【答案】C
【答案解析】試題分析：哺乳動物的成熟紅細胞沒有細胞器膜，放在蒸餾水中吸水漲破，可制備細胞膜；不同細胞器的大小、質量不同，故可用差速離心法分離細胞器；葉綠體是體積較小的細胞器，在電子顯微鏡下才能觀察清楚；利用放射性同位素示蹤技術，研究分泌蛋白的合成與分泌，可清楚地觀察到泌蛋白的合成與分泌的過程；故C是錯誤的，ABD是正確的。
考點：本題考查的是有關實驗方法的知識。
點評：對於此類試題，學生應注意實驗中實驗方法的正確使用。

⑵ 葉綠體色素提取,分離及理化性質的鑒定實驗報告

實驗三 葉綠體色素的提取分離與理化性質鑒定
一、實驗目的
1、學會葉綠體色素提取和分離的方法。
2、了解葉綠體色素的熒光現象、皂化反應等理化性質。
二、實驗原理
葉綠體中含有綠色素（包括葉綠素a和葉綠素b）和黃色素（包括胡蘿卜素和葉黃素）兩大類，這兩類色素都不溶於水，而溶於有機溶劑，故可用乙醇或丙酮等有機溶劑提取。
提取液可用色層分析的原理加以分離。因吸附劑對不同物質的吸附力不同，當用適當的溶劑推動時，混合物中各成分在兩相（流動相和固定相）間具有不同的分配系數，所以它們的移動速度不同，經過一定時間層析後，便將混合色素分離。
葉綠素是一種二羧酸——葉綠酸與甲醇和葉綠醇形成的復雜酯，故可與鹼起皂化反應而生成醇（甲醇和葉綠醇）和葉綠酸的鹽，產生的鹽能溶於水中，可用此法將葉綠素與類胡蘿卜素分開；葉綠素與類胡蘿卜素都具有光學活性，葉綠素吸收光量子而轉變成激發態，激發態的葉綠素分子很不穩定，當它變回到基態時可發射出紅光量子，因而產生熒光。葉綠素中的鎂可以被H+所取代而成褐色的去鎂葉綠素，後者遇銅則成為綠色的銅代葉綠素，銅代葉綠素很穩定，在光下不易破壞，故常用此法製作綠色多汁植物的浸漬標本。
三、實驗器材
新鮮的植物葉片。
研缽；漏斗；100ml三角瓶；玻璃棒；剪刀；滴管；培養皿；定性濾紙條（5cm×1.5cm）。
毛細管；試管；試管架；石棉網；燒杯（100ml）；酒精燈；鐵三角架；刻度吸量管2ml、5ml各1支。
四、實驗試劑
1、95%乙醇；石英砂；碳酸鈣粉
2、推動劑：按石油醚：丙酮：苯（10：2：1）比例配製（體積比）
3、醋酸銅粉末；5%的稀鹽酸
4、甲醇、KOH
五、實驗步驟
1．葉綠體色素的提取
（1）取菠菜或其他植物新鮮葉片4~5片（2g左右），洗凈，擦乾，去掉中脈，剪碎，放入研缽中。
（2）研缽中加入少量石英砂及碳酸鈣粉，加2~3ml 95%乙醇，研磨至糊狀，再加10ml 95%乙醇，暗處放置3~5min，上清液過濾於三角瓶中，殘渣用10ml 95%乙醇沖洗，一同過濾於三角瓶中。
2. 葉綠體色素的分離
（1）取一塊預先乾燥處理過的定性濾紙，將它剪成長約10cm ，寬約1cm的濾紙條。
（2）用毛細管吸取色素提取液。在濾紙條的一端（約距這一端的1cm處）劃出一條濾液細線，等濾液乾燥後，再重復劃4～5次。
（3）將濾紙條的另一端（約距這一端1cm處）折成「V」字形，並將它掛在放有層析液的燒杯壁上（注意：色素線要略高於層析液面，且濾紙條下端最好不要碰到燒杯壁），蓋上培養皿。
3.葉綠體色素的性質鑒定
(1)熒光現象的觀察
取1支20ml刻度試管加入5ml葉綠體色素乙醇提取液，在直射光下觀察溶液的透射光與反射光顏色有何不同？解釋原因。
(2)皂化作用（綠色素與黃色素的分離）
在做過熒光現象觀察的葉綠體色素乙醇提取液試管中加入1.5ml 20%KOH-甲醇溶液，充分搖勻。片刻後，加入5ml苯，搖勻，再沿試管壁慢慢加入1～1.5ml蒸餾水，輕輕混勻（勿激烈搖盪），於試管架上靜置分層。若溶液不分層，則用滴管吸取蒸餾水，沿管壁滴加，邊滴加邊搖動，直到溶液開始分層時，靜置。可以看到溶液逐漸分為兩層，下層是稀的乙醇溶液，其中溶有皂化的葉綠素a和b（以及少量的葉黃素）；上層是苯溶液，其中溶有黃色的胡蘿卜素和葉黃素。
(3)H+和Cu++對葉綠素分子中Mg++的取代作用
取上述色素乙醇提取液少許於試管中，加入5%HCl數滴，搖勻，直至溶液出現褐綠色，當溶液變褐後，再加入少量醋酸銅粉末，微微加熱，觀察記載溶液顏色變化情況。
六、注意事項
1、為了避免葉綠素的光分解，操作應在弱光下進行。
2、研磨時間盡可能短些，以不超過兩分鍾為宜。
3、在低溫下發生皂化反應的葉綠體色素溶液，易乳化而出現白絮狀物，溶液渾濁，且不分層。可激烈搖勻，放在30～40℃的水浴中加熱，溶液很快分層，絮狀物消失，溶液變得清澈透明。
七、實驗報告
1、將紙層析法分離葉綠體色素的實驗結果貼在實驗報告紙上，並給予分析。
《你看著少抄點》

⑶ 如果將人的血細胞放入蒸餾水中，血細胞很快漲破，如果將洋蔥表皮細胞放入蒸餾水中，同樣的時間細胞卻沒有

⑷ 葉綠素提取實驗報告，有誰知道緊急！

實驗三：葉綠體色素提取分離與理化性質及含量測定

（一）實驗目的及意義
（二）實驗原理
（三）實驗步驟
（四）實驗報告

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實驗目的和意義

因此，測定葉綠素含量便成為研究光合作用與氮代謝必不可少的手段，在作物育種、科學施肥、看葉診斷中有著廣泛的應用

綠色植物的光合作用是在葉綠體中的葉綠體色素中進行的，了解葉綠體色素的組成、性質及測定對於理解光合作用的本質很有幫助。

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葉綠體在細胞中運動視頻

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葉綠體在細胞中的分布與結構

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類囊體膜的結構及功能

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實驗原理

植物葉綠體色素是吸收太陽光能，進行光合作用的重要物質。它一般由葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素和葉黃素組成。這些色素都不溶於水，而溶於有機溶劑，故可用乙醇、丙酮等有機溶劑提取。

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實驗原理

葉綠素是一種二羧酸——葉綠酸與甲醇和葉綠醇形成的復雜酯，故可與鹼起皂化反應而生成醇（甲醇和葉綠醇）和葉綠酸的鹽，產生的鹽能溶於水中，可用此法將葉綠素與類胡蘿卜素分開。

色素分離的方法有多種，紙層析是最簡便的一種。當溶劑（有機推動劑）不斷從紙上流過時，由於混合物（葉綠素提取液）中各種成分在固定相（濾紙纖維素所吸附的水分）和流動相（有機推動劑）間具有不同的分配系數，所以移動速度不同，經過一定時間後，可將各種色素分開。

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實驗原理

葉綠素中的鎂可以被氫離子所取代而成褐色的去鎂葉綠素。去鎂葉綠素遇銅則成為銅代葉綠素，銅代葉綠素很穩定，在光下不易破壞，故常用此法製作綠色多汁植物的浸漬標本。

葉綠素與類胡蘿卜素都具有光學活性，表現出一定的吸收光譜，可用分光光度計精確測定。葉綠素吸收光量子而轉變成激發態，激發態的葉綠素分子很不穩定，當它變回到基態時可發射出紅光量子，因而產生熒光。葉綠素的化學性質很不穩定，容易受強光的破壞，特別是當葉綠素與蛋白質分離以後，破壞更快，而類胡蘿卜素則較穩定。

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實驗步驟(1)

今欲測定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a、b和類胡蘿卜素的含量，只需測定該提取液在三個特定波長下的吸光度D，並根據葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長下的吸光系數即可求出其濃度。
Ca=12.7D663 –2.69 D645（3）
Cb=22.9 D645 –4.68D663（4）
Ck=4.7D440- 0.27Ca+b

根據朗伯一比爾定律，某有色溶液的吸光度D與其中溶液濃度C和液層厚度L成正比，即：
D＝KCL
D：吸光度，即吸收光的量，C：溶液濃度, K：為比吸收系數（吸光系數）， L：液層厚度，通常為1cm.
如果溶液中有數種吸光物質，則此混合液在某一波長下的總吸光度等於各組分在相應波長下吸光度的總和，這就是吸光度的加和性。

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實驗材料和器材

器材：721型分光光度計、電子天平、量筒、研缽、剪刀、漏斗、濾紙、移液管（1mL）、試管及試管架、洗耳球、酒精燈等。
試劑：丙酮、80%丙酮、醋酸酮、5%鹽酸、碳酸鈣、石英砂等

實驗材料
鹵地菊葉片

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實驗步驟(1)

分離：在大試管中加入推動劑，然後將濾紙固定於膠塞的小鉤上，插入試管中，使尖端浸入溶劑內（色點要高於葉面，濾紙條邊緣不可碰到試管壁），蓋緊膠塞，直立於陰暗處層析。
當推動劑前沿接近濾紙邊緣時，取出濾紙，風干，觀察色帶的分布。葉綠素a為藍綠色，葉綠素b為黃綠色，葉黃素為黃色，胡蘿卜素為橙黃色。用鉛筆標出各種色素的位置和名稱。

1.葉綠體色素的提取
（1）取植物新鮮葉片1克，洗凈，擦乾，去掉中脈剪碎，放人研缽中。
（2）研缽中加入少量石英砂及碳酸鈣粉，2-3 mL95%乙醇，研磨至糊狀，再加2-3 mL95％乙醇，過濾，即得色素提取液。
2.葉綠體色素的分離
點樣：取前端剪成三角形的濾紙條，用毛細管取葉綠素提取液，如圖點樣於「色點」處，注意每次所點溶液不可過多，點樣後晾乾，再重復操作數次。

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理化性質測定

2.氫和銅對葉綠素分子中鎂的取代作用
方法一；取兩支試管。第一支試管加葉綠體色素提取液2mL，作為對照。第二支試管加葉綠體色素提取液2 mL，再加入稀鹽酸1滴，搖勻，觀察溶液顏色變化。當溶液變竭後，再加入少量醋酸銅粉末，微微加熱，觀察記錄溶液顏色變化情況，並與對照試管相比較。解釋其顏色變化原因。

將上一個實驗中提取的葉綠體色素溶液適當稀釋後，進行以下實驗：
1.熒光現象的觀察。
取l支試管加入濃的葉綠體色素提取液，在直射光下觀察溶液的透射光與反射光顏色有何不同，可觀察到反射出暗紅色的熒光。

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理化性質測定

2.氫和銅對葉綠素分子中鎂的取代作用
方法一；取兩支試管。第一支試管加葉綠體色素提取液2mL，作為對照。第二支試管加葉綠體色素提取液2 mL，再加入稀鹽酸1滴，搖勻，觀察溶液顏色變化。當溶液變竭後，再加入少量醋酸銅粉末，微微加熱，觀察記錄溶液顏色變化情況，並與對照試管相比較。解釋其顏色變化原因。

將上一個實驗中提取的葉綠體色素溶液適當稀釋後，進行以下實驗：
1.熒光現象的觀察。
取l支試管加入濃的葉綠體色素提取液，在直射光下觀察溶液的透射光與反射光顏色有何不同，可觀察到反射出暗紅色的熒光。

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理化性質測定

4. 葉綠體色素吸收光譜曲線
將上述葉綠體色素提取液注入1cm比色杯中，另取95%乙醇作空白，於400-700nm之間，每間隔10nm讀取光密度值。根據測定結果，以波長為橫坐標繪制曲線，此即葉綠體色素的吸收光譜曲線。用同樣的方法測定皂化作用中分離出綠色素與黃色素的吸收光譜曲線，並對結果進行分析。

3.皂化作用（綠色素與黃色素的分離）
取葉綠體色素提取液2 mL於大試管中，加入4mL乙醚，搖勻，再沿試管壁慢慢加人3～6mL蒸餾水，輕輕混勻，靜置片刻，溶液即分為兩層，色素已全部轉入上層乙醚中。用滴管吸取上層綠色層溶液，放入另一試管中，再用蒸餾水沖洗一、二次。在色素乙醚溶液中加入30％KOH－甲醇溶液，充分搖勻，再加入蒸餾水約3 mL，搖勻靜置。可以看到溶液逐漸分為兩層，下層是水溶液，其中溶有皂化的葉綠素a和b，上層是乙醚溶液，其中溶有黃色的胡蘿卜素和葉黃素。將上下層放入兩試管中，可供觀察吸收光譜用。

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含量測定

(3）轉移到25mL棕色容量瓶中，用少量80％丙酮沖洗研缽、研棒及殘渣數次，最後連同殘渣一起倒入容量瓶中。最後用80％丙酮定容至25mL，搖勻。離心或過濾。

(4）將上述色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內。以80％丙酮為空白，在波長663nm、645nm、652nm和440nm下測定光密度。

（1）取新鮮植物葉片，擦凈組織表面污物，剪碎，混勻。
（2）稱取剪碎的新鮮樣品0.5g，放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及2～3mL80％丙酮，研成勻漿，再加80％丙酮5mL，繼續研磨至組織變白。

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四、實驗結果計算

將測得的光密度值代入公式，分別計算葉綠素a、b、a+b和類胡蘿卜素的濃度（mg／L）。
並按下式計算組織中單位鮮重或乾重的各色素的含量：
色素濃度（mg／L）×提取液總體積×稀釋倍數
色素在葉片中的含量（%）= ×100% 樣品重量（mg）×1000
稀釋倍數：若提取液未經稀釋，則取1

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實驗報告

1.試述葉綠體色素的吸收光譜特點及生理意義。
2.在皂化反應中加入乙醚有什麼作用？