① 超濾管能用於強鹼或強酸溶液的超濾嗎
1、選擇合適的超濾管,主要考慮MWCO和濃縮體積,最常見的是Ultra-15(10kD)。
通常應截留分子量版不應大於目的蛋白分子量的權1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。
若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。
認真閱讀使用說明書,注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同,表格中有。
2、新買來的超濾是乾燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。
然後將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為准。
操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。
質量和重心二者都要達到平衡。
注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。
注意,一定要等離心機達到目的轉速之後,方可離開
離心機,否則離心機出問題時,無法第一時間處理,後果不可預測。
膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。
在實際使用中,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。
② 想問一下超濾離心管怎麼使用啊還有它能不能重復使用
可以的,先用超聲波洗干凈,再用高壓滅菌鍋滅菌後,備用即可
③ 大家用過的超濾管怎麼保存
超濾膜組件的維護(四川禹華環保)要點:
一、短期停機的情況下:停機2-3天以內,請內在膜組件內部充水容的狀態下停機;如果達一周左右時,請注入濃度為50mg/L的次氯酸鈉溶液;
二、 長期停機的情況下:膜組件要先經過次氯酸鈉葯洗後,再注入濃度為1.5%的亞硫酸氫鈉溶液。
三、置於陰涼處,不能脫水存放;低於零度時要加甘油防凍;
④ 超濾膜的清洗保存
超濾膜清洗的方法主要有兩點要注意:一是必須事先弄清楚污染物的組成及污染性質。二是如能用清水沖洗,應盡量用清水沖洗。只有當清水沖洗達不到理想效果時,才考慮用化學清洗方法。為此超濾膜的清洗,又可分為物理清洗法和化學清洗法兩種。
1、物理清洗法:在這方面用的最多最普遍的就是水力沖洗法。它又可因水力沖洗方向的不同,分為逆向沖洗、反沖洗和正洗沖洗。
(1)逆向沖洗:用原水沖洗膜內和進水端面的雜質。
(2)反沖洗:用超濾水從膜塊表面的污染物沖鬆散、剝落,分別從進水口和濃縮口排出(可加酸、鹼或次氯酸鈉等葯品加強清洗效果)。
(3)正洗沖洗:用原水沖洗膜內和端面的雜質,按運行狀態將超濾膜清洗干凈。
2、化學清洗法:
根據膜表面污染物質的種類,選擇適當的化學葯品與之進行溶解、氧化或其他化學反應達到去除的目的。常用的化學葯品的選擇必須根據膜材料的性質選擇,如酸類、鹼類、氧化劑、殺菌劑、表面活性劑以及加酶洗滌劑等。進行方法與正常超濾過程相同,清洗液自原液入口處進入,濃縮液及超濾液全部返回清洗液容器,循環後排放,以凈水洗凈即可。
超濾膜的保存
1、短期保存:超濾膜如暫停使用時(少於10天時間)應對超濾膜殺菌反沖洗一次,在反沖洗水中加入殺菌劑後再將超濾膜的進水閥、排放閥和調節閥關閉,保持超濾膜的密封和滅菌作用。
2、長期保存:超濾膜如長期停止使用時(超過10天),先對超濾膜進行殺菌反沖洗一次,然後在超濾膜內注入保護液後密封保存。
⑤ 求助:第一次使用超濾離心管應該怎麼處理
可能不同廠家的產品保存運輸條件不一樣。
如果有甘油等保護劑,那就一定要洗干凈再加樣品。版權
乾的超濾管也要先潤濕再用,否則可能不能完全利用膜面積。
最好,用樣品buffer潤洗下再加樣,最大程度保證蛋白活性。尤其是用過後保存在NaOH或乙醇中後。
一般還是離心機甩一下好,使膜充分浸潤。
降低吸附的辦法有:
1,蛋白濃度不要過低
2,盡量選用纖維素的低吸附超濾管
3,用前可以用Tween 80等去垢劑潤洗(不影響蛋白活性的前提下)
4,加入保護蛋白,如BSA(不影響蛋白後續使用的前提下)
用完保存在20% EtOH中,4C保存,防止長菌,依不同樣品可以重復使用不同的次數。
⑥ 如何正確的選擇pall的超濾管
你看你要截留那部抄分物質,就選擇比最小分子量小的,如果你要截留26KD的,你要的超濾管就要比26小。但兩者也要有一定的差距,比如,選擇20-25KD之間的就不合適,因為26的也可能會出去(這是由製造工藝決定的)。所以選擇20KD以下的超濾管比較合適。
⑦ 超濾組件長期不用為什麼要加保護液
超濾組件長期不用要加保護液的原因:
保證干凈區域不長細菌,一旦內有細菌產生就會出現大量繁殖的容現象。
使用超濾設備運用超濾膜組件應注意事項:
超濾組件一定要做到輕拿輕放,並且小心使用,注意保護使其避免發生有損傷害,由於超濾組件是精密儀器,所以在使用安裝時一定要小心。
組件如果在用完之後,要先用清水對其沖洗,待干凈以後再加入甲醛水溶液進行消毒滅菌,並且密封保存好。
⑧ 超濾離心管怎麼使用
蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管(MWCO10kD)。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選,視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管,主要考慮MWCO和濃縮體積,通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為准。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時,【取50ul國產Bradford溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mg/ml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測】,繼續加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱,導致堵管。若發生沉澱,要確定沉澱的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,後者的方法是換不同的Buffer,直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,輕輕加入新的Buffer(經0.22um超濾膜超濾),再濃縮至1ml左右,連續三次,最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定,一般不多於500ul,也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,三次達到1000倍以上,基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作,用黃槍頭(200ul)取,輕輕順著邊緣插入槍頭,輕輕吹打、混勻蛋白液,注意不要碰到超濾膜,然後吸取濃縮液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取,否則難度太大,有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中,沒過超濾膜,防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管,重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水,用milliQ水輕輕潤洗幾次,【若管底有可見的蛋白沉澱,可以先加入水,然後用槍頭吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉澱懸起,然後倒掉,不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液,室溫放置20min,期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液,將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時,不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗,內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯,加至接近滿的MilliQ水,50ml管也加滿MilliQ水,將管芯慢慢放入50ml
離心管,排出部分水,然後蓋上蓋子,放4度保存,直到下次使用。一般來說,按照上述步驟和注意事項,每根管用三四年不會壞。