① 透析袋怎麼用
透析已成為生物化學實驗室最簡便最常用的分離純化技術之一。在生物大分子的制備過程中,除鹽、除少量有機溶劑、除去生物小分子雜質和濃縮樣品等都要用到透析的技術。
透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜製成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內,將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內,而鹽和小分子物質不斷擴散透析到袋外,直到袋內外兩邊的濃度達到平衡為止。保留在透析袋內未透析出的樣品溶液稱為「保留液」,袋(膜)外的溶液稱為「滲出液」或「透析液」。
透析的動力是擴散壓,擴散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比於膜的厚度,正比於欲透析的小分子溶質在膜內外兩邊的濃度梯度,還正比於膜的面積和溫度,通常是4℃透析,升高溫度可加快透析速度。
透析膜可用動物膜和玻璃紙等,但用的最多的還是用纖維素(再生纖維素RC、纖維素酯CE、PVDF等)製成的透析膜,目前常用的是美國美國光譜醫學公司(spectrum,上海歐韋達儀器科技有限公司是中華區特約總經銷)和美國Union Carbide (聯合碳化物公司,上海歐韋達儀器科技有限公司是華東區特約經銷商)生產的各種尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋內的生物大分子的最小分子量,縮寫為MwCO)大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等種類,單位為道爾頓(D)。
商品透析袋製成管狀,其扁平寬度為8 mm~77 mm不等。為防乾裂,出廠時都用10%的甘油處理過,並含有極微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質,它們對蛋白質和其它生物活性物質有害,用前必須除去。
1.將透析管剪成適當長度(10-20cm)的小段,即成透析袋。
2.在大體積的2%(m/v)碳酸氫鈉和1mmol/LEDTA(PH=8)中將透析袋煮沸10min。
3.將透析袋用蒸餾水徹底漂洗。
4.將透析袋置1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min。
5.透析袋冷卻後存放於4度,應確保透析袋始終浸沒在液體中。
註:從此步起用透析袋時一定要戴手套操作。
6.在使用之前要用蒸餾水將透析袋裡外加以清洗。
註:也可以將透析袋放在廣口瓶中充滿水,松動瓶蓋,於20psi(1.40kg/cm2)高壓滅菌10min,代替第四步用1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min的操作。
使用後的透析袋洗凈後可存於4℃蒸餾水中,若長時間不用,可加少量NaN2,以防長菌。洗凈涼乾的透析袋彎折時易裂口,用時必須仔細檢查,不漏時方可重復使用。
新透析袋如不作如上的特殊處理,則可用沸水煮五至十分鍾,再用蒸餾水洗凈,即可使用。
美國美國光譜醫學公司生產的透析袋大部分是預處理過的,即用型,使用前只需用蒸餾水沖洗即可使用,spectra/por7系列和生物技術級的透析袋基本不含硫化物和重金屬離子。
使用時,一端用橡皮筋或線繩扎緊,也可以使用特製的透析袋夾夾緊,由另一端灌滿水,用手指稍加壓,檢查不漏,方可裝入待透析液,通常要留三分之一至一半的空間,以防透析過程中,透析的小分子量較大時,袋外的水和緩沖液過量進入袋內將袋漲破。含鹽量很高的蛋白質溶液透析過夜時,體積增加50%是正常的。為了加快透析速度,除多次更換透析液外,還可使用磁子攪拌。透析的容器要大一些,可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。小量體積溶液的透析,可在袋內放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液面以下。
檢查透析效果的方法是:用1% BaCl2檢查(NH4)2SO4,用1% AgNO3 檢查NaCl、KCl等。
為了提高透析效率,還可以使用各種透析裝置。使用者也可以自行設計與製作各種簡易的透析裝置。美國美國光譜醫學公司生產的各種型號的透析設備,由於使用對流透析的原理,使透析速度和效率大大提高。
選用透析袋需要知道目的物質的分子量,每次處理的樣品量,同一批次的平行試驗,是否需要保持目的物質的活性來選擇,目前國內使用的透析袋主要由上海歐韋達儀器科技有限公司提供,該公司能提供專業的技術指導。
② 採用透析法進行蛋白質脫鹽的原理
透析袋有一復定的截留分子制量,高於此分子量的大分子物質比如蛋白質不能通過,而一些小分子物質比如無機鹽、單糖可以通過半透膜,這樣可以使得蛋白質分子和小分子物質分開。
透析時把待純化的蛋白質溶液裝在半透膜的透析袋裡,放入透析液(蒸餾水或緩沖液)中進行的,透析液可以更換,直至透析袋內無機鹽等小分子物質逐漸降低到最小值為止。
③ 請問什麼是透析袋
透析是利用半透膜的選擇性在溶液里分離大分子和小分子的一種分離技術,常常用於除去蛋白或核酸樣品中的鹽、變性劑、還原劑之類的小分子雜質,有時也用於置換樣品緩沖液。樣品在膜的一邊,緩沖液在另一邊,小分子即向兩邊擴散直到平衡透析是利用半透膜的選擇性在溶液里分離大分子和小分子的一種分離技術,常常用於除去蛋白或核酸樣品中的鹽、變性劑、還原劑之類的小分子雜質,有時也用於置換樣品緩沖液。樣品在膜的一邊,緩沖液在另一邊,小分子即向兩邊擴散直到平衡,而大分子則由於半透膜的阻攔而留在一端,通過不斷更換緩沖液,即可將樣品中要除掉的小分子稀釋到足夠低的濃度。該技術自五十年代發展流行起來,主要使用半透膜製成的透析袋作為工具,一直存在透析時間長、樣品回收率不高、無法處理微量樣品的難題。如今Pierce公司推出三種不同的透析工具有效解決了部分問題.
這是專為10到100微升的微量樣品透析而設計的。把樣品加在平底的透析管(類似小量提質粒的離心純化柱Mini Spin,可以插入1.5毫升的離心管中,管底是半透膜)中,再插入特製的浮板(浮漂)中,置於緩沖液面10分鍾即完成透析。實驗表明,100微升pH2.8的IgG洗脫液在1升pH9.4的緩沖液中只需不到10分鍾即可平衡到pH9.4。如果在裝緩沖液的燒杯底加磁力棒攪拌則更能加速透析速度。這種方法有較高的回收率,能夠節約珍貴的樣品,並能節約時間,特別適合摸條件的預實驗。根據半透膜的孔徑和分子量截留值(分離范圍)可分為3種規格:3.5K MWCO、7K MWCO和10K MWCO。
④ 什麼叫鹽析透析和鹽析有什麼區別求解答
鹽析法和透析法:
鹽析法是在中葯水提液中,加入無機鹽至一定濃度,或達飽和狀態,可使某些成分在水中溶解度降低,從而與水溶性大的雜質分離。
膠體的鹽析是加鹽而使膠粒的溶解度降低,形成沉底析出的過程,是膠體的聚沉現象的一種。
透析法是利用小分子物質在溶液中可通過半透膜,而大分子物質不能通過半透膜的性質,達到分離的方法。
透析袋的原理:透析是指溶質從半透膜的一側透過膜至另一側的過程,任何天然的(如腹膜)或人造的半透膜,只要該膜含有使一定大小的溶質通過的孔徑,那麼這些溶質就可以通過彌散和對流從膜的一側移動到膜的另一側。人體內的毒物包括代謝產物,葯物,外源性毒物,只要其原子量或分子量大小合適,就能夠通過透析清除體外。其基本原理是彌散和對流。彌散就是半透膜兩側液體各自所含溶質濃度梯度及它所形成的不同滲透濃度,溶質從濃度高的一側通過半透膜向濃度低的一側移動。對流也稱超濾,是指溶質和溶劑因透析膜兩側的靜水壓和滲透壓梯度的不同而跨膜轉運的過程。
透析袋的使用方法
使用前處理:
1. 把透析袋剪成適當長度(10-20cm)的小段。
2. 在大體積的2%(W/V)碳酸氫鈉和 10mmol/L EDTA(pH8.0)中將透析袋煮沸10分鍾。
3. 用蒸餾水徹底清洗透析袋。
4. 放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將之煮沸10分鍾。
5.冷卻後,存放於4度,必須確保透析袋始終浸沒在溶液內。從此時起取用透析袋是必須戴手套。
6. 用前在透析袋內裝滿水然後排出,將之清洗干凈。
鹽析操作注意事項
1. 鹽析的成敗決定於溶液的pH值與離子強度,溶液pH值越接近蛋白的等電點,蛋白質越容易沉澱。
2. 鹽析一般用的硫酸銨,容易吸潮,因而在使用前,一般先磨碎,平鋪放入烤箱內60攝氏度烘乾後再稱量,這樣更准確。
3. 在加入鹽時應該緩慢均勻,攪拌也要緩慢,越到後來速度應該更注意緩慢,如果出現一些未溶解的鹽,應該等其完全溶解後再加鹽,以免引起局部的鹽濃度過高,導致酶失活。
4. 鹽析後最好攪拌40分鍾到一個小時而且再在冰浴中放置一段時間。3.5為了避免鹽對酶的影響,一般脫鹽處理後再測酶活性。
5. 鹽析後的蛋白質最好盡快脫鹽處理,以免變性,透析較慢,一般可用超濾或者G-25,G-50 處理。
6. 一般粗提物蛋白完全沉澱是在硫酸銨濃度在70%左右。
⑤ 透析袋的介紹
透析袋通常是由半透膜製成的袋狀容器。在生物大分子的制備過程中,除去鹽、少量有機溶劑、生物小分子雜質和濃縮樣品時都要用到透析的技術-透析袋。
⑥ 簡述蛋白質透析的原理,及如何確定透析結束
透析袋就是一種半透膜
小分子能夠自由出入,蛋白質這種大分子則保留在裡面
一般透析袋會標明透析的截留分子量
一般來說,磁力攪拌情況下3個小時左右可以透析完全
不攪拌就靜置過夜好了
另外看你透析換液次數,換的越勤就越快點
⑦ 透析袋的外面的水分子能進入袋內嗎"
透析是指溶質通過半透膜,從高濃度溶液向低濃度方向運動。血液透析包括溶質的移動和水的移動,即血液和透析液在透析器(人工腎)內借半透膜接觸和濃度梯度進行物質交換,使血液中的代謝廢物和過多的電解質向透析液移動,透析液中的鈣離子、鹼基等向血液中移動。如果把白蛋白和尿素的混合液放入透析器中,管外用水浸泡,這時透析器管內的尿素就會通過人工腎膜孔移向管外的水中,白蛋白分子較大,不能通過膜孔。這種小分子物質能通過而大分子物質不能通過半透膜的物質移動現象稱為彌散。臨床上用彌散現象來分離純化血液使之達到凈化目的的方法即為血液透析的基本原理。
血液透析所使用的半透膜厚度為10-20微米,膜上的孔徑平均為3納米,所以只允許分子量為1.5萬以下的小分子和部分中分子物質通過,而分子量大於3.5萬的大分子物質不能通過。因此,蛋白質、致熱原、病毒、細菌以及血細胞等都是不可透出的;尿的成分中大部分是水,要想用人工腎替代腎臟就必須從血液中排出大量的水分,人工腎只能利用滲透壓和超濾壓來達到清除過多的水分之目的。現在所使用的人工腎即血液透析裝置都具備上述這些功能,從而對血液的質和量進行調節,使之近於生理狀態。
血液濾過技術是通過機器(泵)或病人自身的血壓,使血液流經體外迴路中的一個濾器,在濾過壓的作用下濾出大量液體和溶質,即超濾液,同時,補充與血漿液體成分相似的電解質溶液,即置換液,以達到血液凈化的目的。整個過程模擬腎小球的濾過功能,但並未模仿腎小管的重吸收及排泌功能,而是通過補充置換液來完成腎小管的部分功能。血液濾過與血液透析的原理上不同。前者通過對流作用及跨膜壓清除溶液及部分溶質,其溶質清除率取決於超濾量及濾過膜的篩漏系數;而後者則是通過彌散作用清除溶質,其溶質清除率與溶質的當量成正比。因此血液透析比血液濾過有更高的小分子物質清除率,而血液濾過對中分子物質清除率高於血液透析。
透析,透掉了什麼
透析療法是根據半透膜的「膜平衡」原理,使用一定濃度的電解質和葡萄糖組成的透析液和血液中積累的代謝產物,水及電解質進行滲透交換,通過血液透析:
1.移除蛋白質代謝的產物:如血尿素氮(BUN)、肌肝 (Creatine)、尿酸。
2.維持血中電解質在一安全濃度內。
3.移除代謝過程中所產生的酸。
4.移除堆積在體內過多的水分。
從而達到可以及時將這些毒素排出體外,起到快速的緩解作用,對酸中毒、心力衰竭等症狀起到較快的調節。透析後改變腎功能衰竭、尿毒症患者體內積累的高毒素狀態。
希望此回答能夠符合你的要求。
⑧ 鹽析法和透析法的區別在哪裡
鹽析法和透析法:
鹽析法是在中葯水提液中,加入無機鹽至一定濃度,或達飽和狀態,可使某些成分在水中溶解度降低,從而與水溶性大的雜質分離。
膠體的鹽析是加鹽而使膠粒的溶解度降低,形成沉底析出的過程,是膠體的聚沉現象的一種。
透析法是利用小分子物質在溶液中可通過半透膜,而大分子物質不能通過半透膜的性質,達到分離的方法。
透析袋的原理:透析是指溶質從半透膜的一側透過膜至另一側的過程,任何天然的(如腹膜)或人造的半透膜,只要該膜含有使一定大小的溶質通過的孔徑,那麼這些溶質就可以通過彌散和對流從膜的一側移動到膜的另一側。人體內的毒物包括代謝產物,葯物,外源性毒物,只要其原子量或分子量大小合適,就能夠通過透析清除體外。其基本原理是彌散和對流。彌散就是半透膜兩側液體各自所含溶質濃度梯度及它所形成的不同滲透濃度,溶質從濃度高的一側通過半透膜向濃度低的一側移動。對流也稱超濾,是指溶質和溶劑因透析膜兩側的靜水壓和滲透壓梯度的不同而跨膜轉運的過程。
透析袋的使用方法
使用前處理:
1. 把透析袋剪成適當長度(10-20cm)的小段。
2. 在大體積的2%(W/V)碳酸氫鈉和 10mmol/L EDTA(pH8.0)中將透析袋煮沸10分鍾。
3. 用蒸餾水徹底清洗透析袋。
4. 放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將之煮沸10分鍾。
5.冷卻後,存放於4度,必須確保透析袋始終浸沒在溶液內。從此時起取用透析袋是必須戴手套。
6. 用前在透析袋內裝滿水然後排出,將之清洗干凈。
鹽析操作注意事項
1. 鹽析的成敗決定於溶液的pH值與離子強度,溶液pH值越接近蛋白的等電點,蛋白質越容易沉澱。
2. 鹽析一般用的硫酸銨,容易吸潮,因而在使用前,一般先磨碎,平鋪放入烤箱內60攝氏度烘乾後再稱量,這樣更准確。
3. 在加入鹽時應該緩慢均勻,攪拌也要緩慢,越到後來速度應該更注意緩慢,如果出現一些未溶解的鹽,應該等其完全溶解後再加鹽,以免引起局部的鹽濃度過高,導致酶失活。
4. 鹽析後最好攪拌40分鍾到一個小時而且再在冰浴中放置一段時間。3.5為了避免鹽對酶的影響,一般脫鹽處理後再測酶活性。
5. 鹽析後的蛋白質最好盡快脫鹽處理,以免變性,透析較慢,一般可用超濾或者G-25,G-50 處理。
6. 一般粗提物蛋白完全沉澱是在硫酸銨濃度在70%左右。
⑨ 希望能夠詳細解釋蛋白質透析的原理,例如:透析袋兩邊的滲透壓和濃度對透析結果的影響謝謝
透析膜是半透膜,蛋白質是大分子物質,它不能透過透析膜,而版小分子物質(無機權鹽、單糖等)可以自由通過透析膜與周圍的緩沖溶液進行溶質交換,進入到透析液中。在實驗室分離純化蛋白質的過程中,常利用透析的方法除去蛋白質溶液中的小分子物質。 ……………………
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更多具體材料請參考:
蛋白質透析 http://proct.bio1000.com/100161/
⑩ 透析袋和超濾膜有什麼不同
透析是生物化學實驗室最簡便最常用的分離純化技術之一。在生物大分子的制備過程中,除鹽、除少量有機溶劑、除去生物小分子雜質和濃縮樣品等都要用到透析的技術。
透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜製成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內,將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內,而鹽和小分子物質不斷擴散透析到袋外,直到袋內外兩邊的濃度達到平衡為止。保留在透析袋內未透析出的樣品溶液稱為「保留液」,袋(膜)外的溶液稱為「滲出液」或「透析液」。
透析膜可用動物膜和玻璃紙等,但用的最多的還是用纖維素製成的透析膜, 商品透析袋製成管狀,其扁平寬度為23 mm~50 mm不等。為防乾裂,出廠時都用10%的甘油處理過,並含有極微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質,它們對蛋白質和其它生物活性物質有害,用前必須除去。洗凈涼乾的透析袋彎折時易裂口,用時必須仔細檢查,不漏時方可重復使用。
超濾是介於微濾和納濾之間的一種膜過程,膜孔徑在0.05um至1000分子量之間。超濾是一種能夠將溶液進行凈化、分離、濃縮的膜分離技術,超濾過程通常可以理解成與膜孔徑大小相關的篩分過程。以膜兩側的壓力差為驅動力,以超濾膜為過濾介質。在一定的壓力下,當水流過膜表面時,只允許水及比膜孔徑小的小分子物質通過,達到溶液的凈化、分離、與濃縮的目的。
超濾膜一般分為板框式(板式)、中空纖維、管式、卷式等多種結構。