離子交換樹脂可以在異丙醇

A. 異丙醚的制備

工業上，可從丙烯硫酸水合制異丙醇的副產品中回收。丙烯與硫酸反應生成異丙基氫硫酸酯，然後水解為異丙醇。反應過程中，異丙基氫硫酸酯與丙烯繼續反應亦生成二異丙基硫酸酯，後者與異丙醇反應生成異丙基氫硫酸酯和二異丙醚。當硫酸水合反應後的物料在解吸塔用蒸汽汽提，使異丙醇與二異丙醚從酸液中釋出後，通過蒸餾，從塔頂首先獲得二異丙醚。在實驗室中，異丙醚可由異丙醇用硫酸脫水得到，也可由異丙醇與丙酮加氫反應來製取。還可由異丙醇與丙烯催化縮合而成。離子交換樹脂法也可製取二異丙醚。

B. 細菌基因組的提取原理

一、實驗原理

真核生物的一切有核細胞（包括培養細胞）都能用來制備基因組 DNA。真核生物的DNA是以染色體的形式存在於細胞核內，因此，制備DNA的原則是既要將DNA與蛋白質、脂類和糖類等分離，又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般過程是將分散好的組織細胞在含SDS（十二烷基硫酸鈉）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白質，再用酚和氯仿/異戊醇抽提分離蛋白質，得到的DNA溶液經乙醇沉澱使DNA從溶液中析出。

蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二鈉）存在下保持很高的活性。在勻漿後提取DNA的反應體系中，SDS可破壞細胞膜、核膜，並使組織蛋白與DNA分離，EDTA則抑制細胞中Dnase的 活性；而蛋白酶K可將 蛋白質降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分離出來。

二、儀器及試劑

1. 儀器：

恆溫水浴鍋、台式離心機、紫外分光光度計（GeneQuant）、移液器、玻璃勻漿器、離心管（滅菌）、吸頭（滅菌）

2. 試劑：

（1）細胞裂解緩沖液：

Tris (pH8.0) 100 mmol/L

EDTA (pH 8.0) 500 mmol/L

NaCL 20 mmol/L

SDS 10%

胰RNA酶 20ug/ml

（2） 蛋白酶K： 稱取20mg蛋白酶k溶於1ml滅菌的雙蒸水中，?C20℃備用。

（3）TE緩沖液（pH 8.0）：高壓滅菌，室溫貯存。

（4）酚?氯仿?異戊醇（25:24:1）、

（5）異丙醇、冷無水乙醇、70%乙醇、滅菌水。

三、操作步驟

1. 取新鮮或冰凍動物組織塊0.1g（0.5cm3），盡量剪碎。置於玻璃勻漿器中，加入1ml的細胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊，轉入1.5ml 離心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μl，混勻。在65℃恆溫水浴鍋中水浴30min，也可轉入37℃水浴12～24h，間歇振盪離心管數次。於台式離心機以12000 rpm離心5min，取上清液入另一離心管中。

2.加2倍體積異丙醇，倒轉混勻後，可以看見絲狀物，用100ul 吸頭挑出，涼干，用200ul TE 重新溶解。（可進行PCR反應等，需要進一步純化的按下列步驟進行）

3.加等量的酚?氯仿?異戊醇振盪混勻，離心12000 rpm，5min。

4.取上層溶液至另一管，加入等體積的氯仿?異戊醇，振盪混勻，離心12000 rpm，5min。

5. 取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/L乙酸氨加入2倍體積的無水乙醇，混勻後室溫沉澱2min ，離心12000 rpm ,10min。

6.小心倒掉上清液，將離心管倒置於吸水紙上，將附於管壁的殘余液滴除掉。

7.用1ml 70%乙醇洗滌沉澱物1次，離心12000 rpm ， 5min。

8.小心倒掉上清液，將離心管倒置於吸水紙上，將附於管壁的殘余液滴除掉，室溫乾燥。

9.加200ul TE重新溶解沉澱物，然後置於4℃或?C20℃保存備用。

10.吸取適量樣品於GeneQuant上檢測濃度和純度。

四、常見問題

1.選擇的實驗材料要新鮮，處理時間不易過長。

2.在加入細胞裂解緩沖液前，細胞必須均勻分散，以減少DNA團塊形成。

3. 提取的DNA不易溶解：不純，含雜質較多；加溶解液太少使濃度過大。沉澱物太乾燥，也將使溶解變得很困難。

4. 電泳檢測時DNA成塗布狀：操作不慎；污染核酸酶等。

5.分光光度分析DNA的A280/A260小於1.8；不純，含有蛋白質等雜質。在這種情況下，應加入SDS至終濃度為0.5%，並重復步驟2～8。

6.酚/氯仿/異戊醇抽提後，其上清液太黏不易吸取：含高濃度的DNA，可加大抽提前緩沖液的量或減少所取組織的量。
基因組DNA提取方法2008-10-23 18:43制備基因組DNA是進行基因結構和功能研究的重要步驟，通常要求得到的片段的長度不小於100-200kb。在DNA提取過程中應盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素，以保證DNA的完整性，為後續的實驗打下基礎。主要是CTAB方法，其他的方法還有1物理方式:玻璃珠法超聲波法研磨法凍融法。2化學方式：異硫氰酸胍法鹼裂解法3生物方式:酶法。根據核酸分離純化方式的不同有:硅質材料、陰離子交換樹脂等

試驗步驟：

1、貼壁細胞用胰酶消化，離心收集。

2、細胞重懸於冰冷的PBS漂洗一次，離心收集。試驗步驟2再重新作一邊。

3、加入5mlDNA提取緩沖液，(10mmol/LTris-cl0.1mol/LEDTAo.5%SDS)混勻。

4、加入25ul蛋白酶K使終濃度達到100ug/ml混勻，50℃水浴3h

5、用等體積的酚抽提一次，2500rpm離心收集水相，用等體積的（酚，氯仿，異戊醇）混合物抽提一次，2500r/min離心收集水相

6、用等體積的氯仿，異戊醇抽提一次。加入等體積的5mol/L的LiCL混勻，冰浴，10min.。

7、2500rpm離心10min.轉上清於一離心管中。加入等體積的異丙醇。室溫10min。

2500rpm離心10min。棄上清。

8、加入0.1倍體積3mol/L乙酸鈉(PH5.2)與2倍體積-20℃預冷無水乙醇。-20℃20min。

9、12000r/min室溫離心5min。棄上清。將DNA溶於適量TE中。

外周血DNA提取技術

分離外周血白細胞提取方法：

試驗步驟：

1、取人肘靜脈血5ml，EDTA抗凝，2500rpm離心10min。

2、小心吸取上層血漿，分裝到3個0.5ml離心管中。

3、在血細胞中加入3倍體積的溶血液，搖勻，冰浴15min。

4、2500rpm離心10min，棄上清。

5、加入10ml溶血液，搖勻，冰浴15min。

6、3000rpm離心10min，棄上清。

7、倒置離心管，去掉殘液。

8、得白細胞，－80?C凍存。

試驗要求：

血至分離白細胞之間隔時間在室溫下放置不超過2h，4℃放置不超過5h，以防白細胞自溶。

C. 口腔拭子DNA提取的方法

采樣步驟說明】
1、操作前確定一次性宮頸采樣拭子是獨立包裝完整無破損，檢查細胞保存管是否有破損或漏液現象。
2、取出一次性宮頸采樣拭子，調整至取樣刷的圓盤處在卡口A和B之間，取樣刷刷頭在套管中不露出；
3、操作者握住套管的防滑紋處，將拭子（此時取樣刷刷桿的圓盤處在卡口A和B之間）自陰道緩慢插入，至宮頸外口處為止（此時應該略有阻力，但不感到疼痛）；
4、單手固定住套管，將取樣刷按圖示方向輕推，使取樣刷桿的圓盤穿過套管內部的卡口A，表明取樣刷刷頭已露出套管，然後再繼續往裡輕推約1厘米，使刷頭完全露出套管並接觸到宮頸外口；抵住刷柄，將取樣刷以同一方向緩慢轉動4-5圈，以採集到足夠的宮頸細胞（注意用力要適中，太輕不能取到足夠的細胞，太重可能損傷宮頸引起出血）；
5、採集完細胞後，單手固定住套管，另一隻手握住刷柄按圖示方向稍用力往外拉，使取樣刷刷桿的圓盤退回到套管內部的卡口A與卡口B之間。
將套管和取樣刷一起緩慢退出陰道
（將刷頭推出套管）
6、單手固定套管，另一手按圖示方向推動刷柄，使取樣刷桿的圓盤穿過卡口A,暴露刷頭於套管外直至露出刷頭端的凹槽處（注意刷頭不要接觸到其他物體）；
（產品性能為收集病毒標本）
7、打開與取樣器配套的細胞保存管（裝有2ml易揮發細胞保存液），將刷頭浸入液面，固定瓶身，充分攪動10次以上，以使採集的標本完全釋放在細胞保存液中（如不慎沾液，用清水沖凈即可）；
（折斷刷頭）
8、單手固定細胞保存管，按圖所示，從刷頭端的凹槽處折斷自取樣刷，保留刷頭在細胞保存液內，擰緊細胞保存管的管蓋，丟棄刷柄及套管部分。

D. 哪些合成樹脂溶於異丙醇

各種氨基樹脂、部分丙烯酸樹脂能溶於異丙醇

E. 二異丙醚的合成方法

1、工業上，可從丙烯硫酸水合制異丙醇的副產品中回收。丙烯與硫酸反應生成異丙基氫硫酸酯，然後水解為異丙醇。反應過程中，異丙基氫硫酸酯與丙烯繼續反應亦生成二異丙基硫酸酯，後者與異丙醇反應生成異丙基氫硫酸酯和二異丙醚。當硫酸水合反應後的物料在解吸塔用蒸汽汽提，使異丙醇與二異丙醚從酸液中釋出後，通過蒸餾，從塔頂首先獲得二異丙醚。在實驗室中，異丙醚可由異丙醇用硫酸脫水得到，也可由異丙醇與丙酮加氫反應來製取。還可由異丙醇與丙烯催化縮合而成。離子交換樹脂法也可製取二異丙醚。
2、將異丙醇和濃硫酸混合，加熱使之迴流，邊迴流邊分出反應生成的水，當水不再生成時，反應結束：
降溫後， 將反應液倒入冷水， 靜置分層，棄去水層。油層先經水洗除去未反應的醇， 然後加入高錳酸鉀溶液， 除去烯烴並水洗， 用硫酸亞鐵水溶液除去過氧化物後水洗， 再用氫氧化鈉溶液中和所含的酸後用水洗至中性， 靜置分層， 棄去水層， 醚層用無水氯化鈣乾燥脫水， 濾去固體乾燥劑後， 常壓蒸餾， 收集67～69℃的餾份， 即為成品異丙醚。高純異丙醇可採用含70%異丙醇的廢水溶液， 先與苯共沸蒸餾， 除去水分， 冷卻後經孔徑為0.8μm、0.45μm和0.2μm的三層聚四氟乙烯膜過濾所得。產品中含99.9%的異丙醇、 0.1%的水、0.4×10-6 Ca和0.01～0.09×10-6的其他陽離子雜質（ 如 K、Mg、Cr 、Fe和Na） 。

F. 異丙醇能做油漆稀釋劑用嗎，對樹脂有沒有溶

下午好，IPA可以做油漆的稀釋劑但是種類很有限，它只適合稀釋含有羥基或內者醇溶性樹脂，可以溶容解的樹脂有一部份羥基丙烯酸樹脂、PVB、硝基、醛酮樹脂和環氧樹脂如E44、E51等等，不能稀釋PU（發生化學反應使PU單體報廢）、PA、醇酸和幾乎全部石油樹脂比如松香甘油酯、C5C9、萜烯和古馬隆（而且上面的硝基和環氧中，它也不是良溶劑之一，只能有限比例開稀，有最大使用量）。相比甲醇和乙醇，IPA對油脂的溶解性增強，但仍不及常見的酯、醚、酮和芳香烴，它對非極性高聚物的溶解力十分有限，而且有一定吸水性，請酌情參考。