樹脂切片經驗

㈠ 撈取切片，有3種方法，該如何選擇合適的撈片方法

切樹脂切片，切片比較大，用perfectloop撈片，非常方便；

當切割金屬樣品或其它無機固體材料等樣品，往往切片較小，建議用銅網從水面上直接撈片，注意銅網盡量要保持與水面平行，平行向下撈取切片，否則切片可能會堆積到銅網一側，而切片小，如用perfectloop撈片圈撈片，小切片可能會跑到邊上去；但是如果切片樣品是樹脂包埋的顆粒物，如果顆粒物質比較重，則可能會發生切片中樹脂部分被銅網撈起，而顆粒物沒被撈起並沉到水槽中的情況；

因此有時使用銅網從水面下直接撈片，但使用該方法銅網必須要親水化。親水化使用鍍膜儀當中的glow-discharge功能即可。將銅網親水化，不論是上撈取，還是下撈取方法，切片在銅網上都表現為更平整

㈡ 怎樣用中性樹脂封片

晾乾後滴在上面兩滴中性樹脂然後放蓋玻片，輕壓蓋玻片讓液滴充滿整個玻片，然後晾乾，最好晾一個星期再看，不然容易脫落。當然不用油鏡的話應該就不用晾那麼久了。

㈢ 超薄切片技術操作過程是什麼

觀察病毒在細胞組織內的狀態，可採取超薄切片技術，將標本用固定液固定後，經過脫水滲透包埋聚合切片等過程，切成薄片然後染色檢鏡。

（1）固定。

常用的固定液主要有鋨酸固定液、醛固定液、高錳酸鹽固定液等。

①鋨酸固定液：這是最常用的固定液，作用迅速，新鮮的鋨酸呈淺黃色，其蒸氣極毒，使用時應在強通風櫃中把裝有鋨酸的安瓿瓶在緩沖液內敲碎。

②醛固定液：植物材料具有厚壁，鋨酸固定液不能很好滲透，有時固定得不好。而醛固定液往往可獲得較好效果，同時還不會破壞酶的活性，可以在切片上進行組織化學測定。常用的有甲醛固定液和戊二醛固定液。

③高錳酸鹽固定液：此種固定液可保持膜的結構，但破壞核糖體並失去酶的活性，對維持TMV粒子在細胞內的排列比戊二醛及鋨酸固定液好。

緩沖液可用1%液體鋨酸和1%過錳酸鉀，也可用磷酸鹽巴比妥-醋酸和二甲胂酸鹽緩沖液。固定可在0～5℃或室溫下進行，供試材料盡可能使用幼嫩的植株，小的根可整個固定，葉片需剪成1～2cm的小塊。葉中的空氣會阻止固定液與大部分細胞接觸，可在真空下把空氣除去。

組織固定後必須徹底沖洗，在進行鋨酸固定前要把多餘的醛用緩沖液沖洗徹底。固定後的組織一定要進行脫水，特別是採取不溶於水的樹脂包埋時，在室溫低於4℃時，丙酮或乙醇脫水效果都很好。

（2）包埋。

包埋用的樹脂可分為四類，即甲基丙烯酸酯、環氧樹脂、聚酯樹脂和各種水溶性化合物。

甲基丙烯酸酯在聚合過程中可能引起組織損傷，在電子束轟擊下，這種介質有升華的趨向，引起細微組織結構的破壞。但甲基丙烯酸酯也有優點，它比環氧樹脂能切出較大的切塊切面，切片也容易染色。

環氧樹脂和聚酯樹脂是保存細胞細微結構的最好包埋材料，目前最常用的環氧樹脂是Epon和Araldite，用它包埋的標本可避免聚合損傷，樹脂切片在電鏡下不升華，可使標本連續觀察，並保存細微結構。

水溶性樹脂劑對一些不希望用有機溶劑脫水，或利用組織切片做酶外處理試驗特別有用，其缺點是不能很好地保持細胞的細微結構。

組織需在包埋介質中充分滲透，常用的有兩種方法：

①環氧樹脂包埋組織的滲透。將丙醇脫水的組織轉到裝有6ml由等量丙酮和環氧樹脂的標本管中，將標本管放在烤箱內由傾斜45°角的馬達帶動的輪上，使其不斷轉動，丙酮由開口的管中蒸發，當丙酮味消失後，將組織在擦鏡紙上吸干，浸入新鮮的樹脂中，再於同一溫度下放4h，再一次吸干組織後，移到裝有新鮮樹脂的膠囊內，將Epon塊放在40℃下，直至完全變硬，並繼續在60℃下凝固12h。

②水溶性樹脂包埋組織的滲透。將組織在戊二醛中固定，在緩沖劑中沖洗1～12h，然後在80%GMA單體和20%的水中脫水20min，再於97%GMA單體和3%的水中繼續脫水20min後，在制備的聚合混合物中滲透過夜。將組織放在烘爐內的明膠膠囊中，注滿聚合混合物除去所有空氣泡，蓋好使其不使與空氣接觸，把膠囊用金屬絲垂直吊起，用長波長的紫外光聚合1～3d即可。

（3）切片。

切片前切去埋塊四周的樹脂，留下高2～3mm的標本正方柱，裝入切片機，使埋塊面的平行邊與刀口平行，把刀慢慢向標本推進，通過切片機上的目鏡系統，把刀推到看不到有間隙之處，每次推進0.5～1.0μm，直到切下切片。切片厚度以能達到浮於液面的切片呈灰色為最好。切片可用醋酸雙氧鈾和檸檬酸鉛進行染色。染色後的切片在0.1N氫氧化鈉中沖洗，然後用水沖洗。

㈣ 聚酯切片的生產方法

PTA法連續工藝主要有德國吉瑪(Zimmer）公司、美國杜邦公司、瑞士伊文達（Inventa）公司和日本鍾紡（Konebo）公司等幾家技術。其中吉瑪、伊文達、鍾紡技術為5釜流程，杜邦則開發了3釜流程（目前正在開發2釜流程），兩者縮聚工藝基本相似，區別在於酯化工藝。如5釜流程採用較低溫度及壓力酯化，而3釜流程則採用高乙二醇（EG)/PTA摩爾比和較高的酯化溫度，以強化反應條件，加快反應速度，縮短反應時間。總的反應時間為5釜流程10小時，3釜流程3.5小時。當今世界大型聚酯公司都採用集散型（DCS）控制系統進行生產控制和管理，並對全流程或單釜流程進行模擬計算。
2003年初，伊文達-費希爾（Inventa-Fisher)(I-F）公司公布了其聚酯生產流程和能耗。該工藝從PTA或DMT與乙二醇（EG）反應生產樹脂級或紡織級聚酯。採用4釜（4R）工藝，由PTA和EG或熔融DMT和EG組成的漿液，進入第一酯化/酯交換反應器，反應在較高壓力和溫度（200～270℃）下進行，生成的低聚物進入第二串級攪拌式反應器，在較低壓力和較高溫度下進行反應，反應轉化率大於97%。然後在低於常壓和較高溫度下，藉第3台串級反應器預聚合，縮聚程度大於20，經第4台DISCAGE精製器後，使最終縮聚物的特性粘度（i.V.）提高到0.9。能耗為：電力55.0 kwh/t，燃料油61.0kg/t，氮氣0.8m3/t，空氣9.0m3/t。採用該工藝已建有50多套裝置，其中13條生產線能力為100～700噸/天。現已有單系列700噸/天生產線投運。