反相色譜為什麼不能用純水

① 苯基鍵合硅膠色譜柱柱為什麼不能用純水沖洗

這個問題比較難回答。因為注意的東西比較多，比如：
首先是色譜柱的方向問題。大多數色譜柱會標明方向。這個傻子都知道，安裝的時候要順著方向安裝。不過也有一些色譜柱沒有方向，這些是雙相填料的色譜柱。第一次使用時的方向就是它的方向。不過所有的色譜柱都是，一旦開始使用，就不要轉換方向。這樣會損毀色譜柱。
第二個是柱壓問題。一般的色譜柱壓力最好不要超過20MPa，壓力過高會加速損毀色譜柱。
第三，柱溫。色譜柱溫度最好不要超過45℃。也是會加速損毀色譜柱。
還有pH值。色譜柱的pH值范圍是不同的。大多數色譜柱的pH值范圍是4-7左右。有些偏向酸性，有些偏向鹼性的，還有一些pH值廣泛的。這些按照說明書操作即可。

除此之外，色譜柱還有別的一些需要注意的事情。
首先，鍵合硅膠色譜柱分成幾種。比如C18、C8、苯基柱這些的使用方法都差不多。是反相色譜柱。它們的流動相中還有大量的水，還有無機鹽。這個時候需要注意，無機鹽是不能夠長時間留在色譜柱裡面的。色譜柱最好保存在純甲醇或者純乙腈裡面。但是無機鹽不能溶於純甲醇或者純乙腈。所以中間要過渡甲醇水或者乙腈水。
而有些色譜柱比較特殊，比如氨基柱、氰基柱。他們是可以用於正相，也可以用於反相。所以使用的時候注意區分。配置流動相的時候也避免使用大量的水相。

其他的暫時想不到。或者說你想問的問題可以提出來，大家討論討論。

② 何謂正相色譜和反相色譜在應用上有什麼特點

1、正相色譜基本上可以被看做是液固吸附色譜，其柱填料是吸附劑，其表面上分布有活性吸附位點，溶劑和溶質分子均能被吸附於活性位點上。由於相互作用力有大有小，溶劑分子與溶質分子、溶質分子相互之間又存在競爭吸附，從而造成了在柱內保留時間的差異，使不同物質得到分離。

應用特點：正相色譜一般用來分離中性化合物和離子(或可電離的)化合物，而且以中性樣品為主。適於分離樣品如下：

①對於反相色譜法很難分離的異構體，可以採用以硅膠為固定相的正相色譜分離分析；

②根據被分離樣品極性差別進行族類分離；

③易於水解樣品的分離分析；

④分離分析高脂溶性樣品，其在極性有機溶劑中溶解度很小；

⑤正相色譜也可以用於異構體分離(包括幾何異構體和光學異構體)。

2、流渣叢動相極性大於固定相極性的情況，稱為反相色譜。非極性鍵合相色譜可作反相色譜。在現代液相色譜中應用最廣泛，現代液相色譜分析工作的70%以上是在非極性鍵合固定相上進行的。反相介質性能穩定。分離效率高，可分離蛋白質、肽、氨基酸、核酸等含有非極性基團的各種物質。

應用特點：反相介質性能穩定。分離效率高，可分離蛋白質、肽、氨基酸、核酸、甾類、脂類、脂肪酸、糖類、植物鹼等含有非極性基團的各種物如遲櫻質。

(2)反相色譜為什麼不能用純水擴展閱讀

原理：

反相色譜(RPC)是指利用非極性的反相介質為固定相，極性有機溶劑的水溶液為流動相，根據溶質極性(疏水性)的差別進行溶質分離與純化的洗脫色譜法。

與HIC一樣，RPC中溶質也通過疏水性相互作用分配於固定相表面，但是，RPC固定相表面完全被非極性基團所覆蓋，表現出強烈的疏水性。因此，必須用極性有機溶劑(如甲醇、乙腈等)或其水溶液進行溶質的洗脫分離。

溶質在反相介質上的分配系數取決於溶質的疏水性，一般疏水性越大，分配系數越大。當固定相一定時，可以通過調節流動相的組成調整溶質的分配系數。

RPC主要應用於相對分子質量低於5000，特別是1000以下的非極性小分子物質的分析和純化，也可以用於蛋白質等生物大分子的分析和純化。

由於反相介質表面為強烈疏水性旦仔，並且流動相為低極性的有機溶劑，生物活性大分子在RPC分離過程中容易變性失活，所以，以回收生物活性蛋白質為目的時，應注意選用適宜的反相介質。

③ 求助求助，waters的柱子不小心用純水沖了

你問的應該是反相色譜柱，因為凝膠過濾用純水相是司空見慣的。
Agilent的Bonus系列內，Aichorm的Aqua系列，都是可以做純水容相的。
但你如果只是考慮梯度起點的高水相比例，那就不必了，普通的C18、C8都可以用純水相短時間沖洗，不超過10個柱體積，是沒什麼問題的。

④ 如何正確保存液相色譜柱

1.短期保存色譜柱

反相色譜柱每天實驗後的保養：

使用緩沖液或含緩沖鹽的流動相，實驗完成後應用20-30柱體積的甲醇或乙腈和水的50：50混合物進行沖洗。如需過夜保存，可將流速保持在 0.1 到 0.2 mL/min。注意：不能用純水沖洗柱子，應該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。

其他色譜柱的短期放置，同樣應先用溶劑沖洗好色譜柱(如凝膠柱則用蒸餾水來沖洗) ，再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。

2.長期保存色譜柱

如色譜柱要長時間保存，必須存於合適的溶劑下。對於反相柱可以儲存於純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存於嚴格脫水後的純正己烷中，離子交換柱可以儲存於水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，並將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。特殊類型色譜柱的儲存，需參考色譜柱說明書，使用廠商推薦的溶劑。

⑤ 如何反向沖洗液相色譜柱

轉載」《分析測試網路網》實用資料！色譜柱沖洗一點意見！！

主要針對的反向色譜柱而講！

1.色譜柱簡介

最常用的色譜柱填充劑為化學鍵合硅膠。反相色譜系統使用非極性添充劑，以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用，辛基硅烷鍵合硅膠和其他類型的硅烷鍵合硅膠(如氰基硅烷鍵合相和氨基硅烷鍵合相等)也有使用,正相色譜系統使用極性填充劑，常用的填充劑有硅膠等。離子交換填充劑用於離子交換色譜;凝膠或高分子多孔微球等填充劑用於分子排阻色譜;手性鍵合填充劑用於對映異構體的拆分分析。

填充劑的性能(如載體的形狀、粒徑、孔徑、表面積、鍵合基團的表面覆蓋度、含炭量和鍵合類型等)以及色譜柱的填充，直接影響待測物的保留行為和分離效果。孔徑在15nm(1nm=10埃)以下的填料適合於分析分子量小於 2000的化合物，分子量大於2000的化合物則應選擇孔徑在30nm以上的填料。以硅膠為載體的一般鍵合固定相填充劑適用PH2~8的流動相。當PH大於8時，可使載體硅膠溶解;當PH小於2時，與硅膠相連的化學鍵合相易水解脫落。當色譜系統中需使用PH大於8的流動相時，應選用耐鹼的填充劑，如採用高純硅膠為載體並具有高表面覆蓋度的鍵合硅膠、包裹聚合物填充劑、有機-無機雜化填充劑或非硅膠填充劑等;當需使用PH小於2的流動相時，應選用耐酸的填充劑，如具有大體積側鏈能產生空間位阻保護作用的二異丙基或二異丁基取代十八烷基硅烷鍵合硅膠、有機-無機雜化填充劑等。

2.色譜柱的沖洗體積確定

一般情況都是沖洗色譜柱10-20倍柱體積，具體可以這樣計算，根據柱內徑和柱長算出色譜柱內體積。短柱一般時間就是30分鍾、長柱一般沖洗60分鍾就可以了。舉例：內經為4.6mm、長250mm，其柱內體積=3.14*4.6*4.6/4*250=4.153毫升，流速是1.0毫升每分鍾，折中取15被柱內體積，則沖洗時間就出來了。

3.色譜柱沖洗

沖洗色譜柱最好在分析結束後，用流動相沖洗到基線平穩，然後用10%左右的有機溶劑沖洗色譜柱，主要是沖洗干凈流動相中的緩沖鹽。然後用100有機溶劑沖洗。最好是梯度變化沖洗。分析物可能為一些能溶解在水中，有些需要用純溶劑才能完全去除。如果分析時間緊迫一定要把鹽分沖洗干凈，一般情況不要用純水沖洗色譜柱，特別是反向柱的填料的鍵合集團容易折斷，對色譜柱造成損傷。色譜柱被使用在某種程度上就是開始被污染了，所以色譜柱的壽命和我們使用的情況有很大的關系。雖然被污染但是對我們分析目標物沒有造成影響我們也就是認為還能用。

4.色譜柱維護沖洗

常見故障篩板阻塞，解決辦法是：a、過濾流動相;b、過濾樣品;c、運用在線過濾或保護柱。

柱頭塌陷解決方法是：：a、避免使用PH>8的流動相(針對大部分硅膠的柱子);b、使用保護柱 ;c、使用預柱(飽和色譜柱)。

前面談到的不管用什麼溶劑一定要加入一定比例的用機溶劑，主要是考慮到一些疏水基團在有機溶劑裡面容易伸展利於沖洗其包藏的雜質等。當我們的色譜柱在壓力和柱效下降時，我可以拆開泵近端柱頭的螺絲取出篩板，清洗篩板以及觀察裡面的填料，如填料污染嚴重，就要進行挖取一部分被污染的填料然後用其他廢棄的柱子相同填料來填補，用新的篩板或清洗好的篩板擰好螺絲。然後沖洗觀察柱壓變化和測試柱效等。

5.特殊沖洗
強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積，對樣品中的化合物產生額外的保留行為，不僅引起峰形變寬、拖尾，使柱效下降，同時也會引起保留時間的變化，累積到一定程度時還會導致柱壓升高。由於強保留物質和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應，需要一定的時間才會體現出來，但對許多樣品特別是復雜樣品而言，很難判斷其是否含有強保留物質，因此要防止強保留物質的累積，需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙腈清洗色譜柱。

清洗方法：

1.未使用緩沖鹽：每天分析完成後，用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱60min。

2. 使用過緩沖鹽：分析完成後，先用上述方法除去緩沖鹽，然後再用純甲醇或乙腈反向沖洗色譜柱 60min。

3.補救方法：

水——乙腈——氯仿(或異丙醇)——乙腈——水

每一步以 1.0ml/min 流速反向沖洗色譜柱 60min。

希望大家提出更好的建議和辦法。

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⑥ C18反相柱怎樣才能沖得夠干凈

相C18色譜柱（即來憎水柱自子）如果用純水沖洗後，如果立即停泵則由於其憎水（疏水）的緣故使得柱子內的水因而流失掉，長時間停泵使得柱子幹掉（變干），會造成柱子內固定相填料表面鍵合的硅烷基結構塌陷（也說成是失去支撐倒下），柱子就這樣報廢了。

⑦ c8色譜柱用水沖了怎麼辦

不能。一般洞渣不能。HPLC多用C8,C18色譜柱，而這些柱子要求最少也要有5%的有機相，用純水相容易破壞固定性，從而使柱效下降。

日常使用當中多數情況下是念顫薯反相色譜柱，c18，c8，苯基柱等等！因為這些柱子鍵合相極性極小，所仔者以流動相的極性肯定比他。

⑧ 反相硅膠柱色譜為什麼不直接採用去離子水裝柱

出現殘留物。反相硅膠是在正相硅膠的基礎上進行化學反應把OH取代為OR的硅膠。反相硅膠柱色譜因在使用離子水柱時會出現殘留物，不直接採用去離子水裝柱。一般色譜柱的材質不允許長時間被純水沖洗。