菌檢薄膜過濾法濾膜

1. 薄膜過濾法，濾膜採用何種方式滅菌最好

用重物壓著，我都是在不銹鋼濾盤里安裝好濾膜才拿去一起滅菌的

2. 平板計數法和膜過濾法檢測細菌有什麼區別呢 哪個精確一些

膜過濾法更為精確一些。
膜過濾技術是成熟的技術，ISO標准、AOAC、美國的EPA等等。所有這些標准，最起碼ISO標準是可以拿過來用的。採用濾膜法進行微生物檢測是一種國際公認的微生物標准檢驗方法，其得到AOAC、美國、歐洲和日本等國家的葯典、FDA和EPA等組織的承認，廣泛應用於環境監測、食品及飲料工業、化妝品、制葯工業品質控制和電子工業等領域。賽多利斯公司的濾膜法微生物檢測產品成功地應用於濾膜法已有20多年的歷史，實用而且方便實用，它簡化了微生物檢測程序。 所以，1.有菌落總數檢測膜過濾法的標准。2.有可行性。
標准和技術是兩碼事，標準的制定主要是為了評價水平和保護安全。
2.關於平皿計數法檢不出，而濾膜法卻能檢測出，可想到以下兩點：1）平皿計數法，傾倒的培養基也要50度左右，而50度左右足矣使部分環境微生物不能生長了；2）在培養基內部的微生物比在表面的獲得更少的氧，應該也是會影響部分微生物的生長。膜過濾法是水質樣品的國際上公認的方法，有依據可查。主要起到一個富集的作用 畢竟水中的菌比較分散。
濾膜法微生物檢測： 將適當孔徑的濾膜放入濾器，過濾樣品，由於濾膜的作用而將微生物保留在膜的表面上。樣品中微生物生長抑制劑可在過濾後用無菌水沖洗濾器而除去。然後，將濾膜放在培養基上培養，營養物和代謝物通過濾膜的微孔進行交換，在濾膜表面上培養出的菌落可以計數，並和樣品量相關。
濾膜法的優點：
-與直接法比較，可以檢測大量的樣品
- 濃縮效應使微生物檢測的准確度提高
- 帶有菌落的濾膜，可作為檢測的永久記錄存檔
- 可見的菌落和樣品量直接對應，得出定量結果

3. 復方氨酚烷胺片的微生物限度檢查採用薄膜過濾法如何操作可以順利濾過

1. 設備、儀器
1.1 無菌室 微生物限度檢查應有單獨的無菌室，每個無菌室應有獨立的凈化空氣系統。
1.1.1 操作間 操作間應安裝空氣除菌過濾層流裝置。環境潔凈度不應低於10000級，局部潔凈度為100級（或放置同等級凈化工作台）。操作間或凈化工作台的潔凈空氣應保持對環境形成正壓，不低於4.9Pa。操作台上備有電子天平，乙醇燈，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳頭等。
1.1.2 緩沖間 緩沖間內應有洗手盆，無菌衣、帽、口罩、拖鞋等。緩沖間內不得放置培養箱和其他雜物。
1.1.3 在每次操作前、後，用75%乙醇溶液或其他消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。然後啟動層流凈化裝置，同時用紫外殺菌燈照射30min。
1.1.4 無菌室操作台消毒擦拭後，先啟動層流凈化裝置30min，將備妥的營養瓊脂平板3個（經30～350C預培養48h，證明無菌落生長），以無菌方式移入操作間，置凈化台左、中、右各1個，開蓋，暴露30min後將蓋蓋上。在30～350C培養箱內倒置培養48h，取出檢查。3個平板生長的平均菌落數不超過1個。
1.2 儀器
1.2.1 恆溫培養箱（30～350C）、生化培養箱（23～280C）、電冰箱、蒸汽滅菌器。
1.2.2 玻璃器皿 燒杯、培養皿、量筒、試管及塞、吸管。玻璃器皿用前應洗滌干凈，吸管、量筒不掛水滴，無殘留抗菌物質。玻璃器皿均應用牛皮紙（或雙層報紙）嚴密包裹置蒸汽滅菌器高壓蒸汽121℃滅菌30min，烘乾。或於160℃乾熱滅菌2h，備用。
2 培養基及其制備方法
2.1 營養瓊脂培養基：取營養瓊脂培養基34g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，121℃高壓滅菌15分鍾。
2.2 玫瑰紅鈉瓊脂培養基：取玫瑰紅鈉瓊脂培養基30.5g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，121℃高壓滅菌15分鍾。
2.3 膽鹽乳糖培養基：取膽鹽乳糖培養基36g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，121℃高壓滅菌15分鍾。
3 稀釋劑
3.1 0.9%無菌氯化鈉溶液：取氯化鈉9.0g，加水溶解使成1000ml，121℃滅菌20分鍾。
3.2 PH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液：取磷酸二氫鉀3.56g，磷酸氫二鈉7.23g，氯化鈉4.30g，蛋白腖1.0g，加水1000ml，微溫溶解，分裝，過濾，滅菌。
4 供試液的制備
4.1 取供試品10g，加經乾熱滅菌的5%吐溫-80 0.2ml，加PH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液稀釋至100ml，邊加邊振搖使成混懸液，靜止5分鍾使分層，傾取上清液置離心機中500r/min離心5分鍾，取上清液作為供試品溶液。
5 檢查方法
採用薄膜過濾法，濾膜孔徑為0.45um，直徑為50mm。濾膜及濾器在使用前採用121℃高壓滅菌30鍾。試驗過程中，應保持濾膜前後的完整性。將制備好的供試液過濾，然後用100mlPH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液（注意保持供試品溶液覆蓋整個濾膜表面）。沖洗後，用鑷子取出濾膜，菌面朝上貼於營養瓊脂培養基或玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板上培養。細菌於30～35℃培養48小時，黴菌於23～28℃培養72小時。

4. 純化水微生物限度檢查用薄膜過濾法怎麼做

准備工作：

用純化水浸泡濾膜，浸泡完全後放入濾杯中，包好濾杯，連同回量筒、培養基、平皿、答取膜器、三角燒瓶等一起121℃滅菌30min。

滅菌後的物品一並傳入潔凈室中，微生物限度過濾器上連好已經滅好的濾杯，用緩沖液先潤濕濾膜，抽掉緩沖液，然後倒入供試液（10倍稀釋），濾過，再用緩沖液沖洗濾膜。

過濾結束後取下濾膜平貼於R2A瓊脂培養基平板上，32℃倒置培養5天。菌落計數（平皿上長幾個菌結果就報幾個菌）

(4)菌檢薄膜過濾法濾膜擴展閱讀：

薄膜過濾系統主要用於去除小顆粒及溶解鹽，一般可分為微濾、超濾、納濾和薄膜過濾反滲透。

微濾又稱微孔過濾，它屬於精密過濾，截留溶液中的砂礫、淤泥、黏土等顆粒和賈第蟲、隱抱子蟲、藻類和一些細菌等，而大量溶劑、小分子及少量大分子溶質都能透過膜的分離過程。

超濾是一種加壓膜分離技術，即在一定的壓力下，使小分子溶質和溶劑穿過一定孔徑的特製的薄膜，而使大分子溶質不能透過，留在膜的一邊，從而使大分子物質得到了部分的純化

納濾 ( NF，Nanofiltration)是一種介於反滲透和超濾之間的壓力驅動膜分離過程，納濾膜的孔徑范圍在幾個納米左右。

參考資料來源：網路-薄膜過濾

5. 水質檢測時，我們用薄膜過濾法。但是我有幾個問題向老師請教.

1 生物酶並沒來有你想像的多 不會影響細自菌生長 而且薄膜過濾後會被濾掉只剩下微生物
2 營養瓊脂和玫瑰紅鈉都不是選擇培養基 有時候會有都長的情況 營養瓊脂培養基建議加TTC讓細菌更容易觀察 也可以通過其他方式來判斷~比如細菌菌落大小不一 一般比較小 邊緣光滑 味道臭 真菌酵母菌菌落大 有的會長毛 有酒香或霉味。更准確的方法是用選擇培養基進一步培養 或顯微鏡觀察 最好是增加陽性對照試驗

6. 薄膜過濾法檢驗純化水為什麼要截留菌面朝上

准備工作：
用純化水浸泡濾膜，浸泡完全後放入濾杯中，包好濾杯，連同量筒專、培養基、平屬皿、取膜器、三角燒瓶等一起121℃滅菌30min。
滅菌後的物品一並傳入潔凈室中，微生物限度過濾器上連好已經滅好的濾杯，用緩沖液先潤濕濾膜，抽掉緩沖液，然後倒入供試液（10倍稀釋），濾過，再用緩沖液沖洗濾膜。
過濾結束後取下濾膜平貼於R2A瓊脂培養基平板上，32℃倒置培養5天。
菌落計數（平皿上長幾個菌結果就報幾個菌）

7. 薄膜過濾法，濾膜採用何種方式滅菌最好

最好採用一次性過濾器。如果用多次使用的過濾器，則濾膜用濕熱滅菌比較好，因為乾熱滅菌後，濾膜較脆，試驗時不容易保證濾膜完整。

8. 醫用刀片如何採用薄膜過濾法過濾進行無菌檢查

1、滅菌
培養基滅菌主要兩種高壓除菌及0.22um微孔濾膜濾除菌與濾相比高壓滅菌工作強度本較低易造營養流失且加（菌谷氨醯胺溶液菌碳酸氫鈉溶液等）程容易造二污染數培養基採用0.1～0.2μm孔徑微孔濾膜進行濾滅菌並且已培養基除菌發展向低限度減少培養基營養損失
1.1 高壓滅菌

某些培養基（MEM）進行高壓滅菌例清MEM培養基MD605、MD609等類培養基般含L-谷氨醯胺碳酸氫鈉般培養基高壓滅菌加入L-谷氨醯胺碳酸氫鈉菌液體另外高壓谷氨酸鹽（L-丙氨醯-L-谷氨醯胺）代替L-谷氨醯胺
高壓滅菌培養基121℃、15psi15鍾條件完全達滅菌效及營養損失需滅菌間延保證高壓滅菌效滅菌設備驗證關鍵
1.2 濾滅菌
供濾滅菌使用濾膜其材料polyethersulphone（PES）、尼龍、聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等般情況採取壓濾壓濾較負壓濾具流速高、濾快、易污染避免蛋白質產量氣泡等優點般使用濾器參照各供應商產品說明書
目前數實驗室制採用微孔濾膜濾器（Zeiss濾器）或立式微孔濾器（Millipore、Pall）除菌微孔濾膜濾器銹鋼間夾放0.22um濾膜使用種濾器重要步驟安裝濾膜及菌濾程使用Zeiss濾器先要用培養用水濾膜充潤濕安裝濾膜其放置層定性濾紙再固定消毒旋鈕要扭太緊凡與空氣接觸部位都要包（用牛皮紙、紗布、紡布等）；高壓滅菌菌環境立即旋鈕扭緊濾除菌結束要打濾器檢查濾膜否完整濾膜破裂需重新進行濾除菌程立式微孔濾器選用同微孔濾柱體積濾膜折疊膜面積顯著增液體處理量且容易發堵塞現象

9. 微生物薄膜過濾法，夾膜技巧

（1）驗證試驗方法：試驗原理同前述薄膜過濾法。驗證供試品對薄膜過濾法有抑細菌和抑真菌特性時，與實際的無菌檢查相同，在同一型號的每個過濾器或過濾筒內過濾規定定量的供試品（容器數及每容器的過濾體積），用淋洗液淋洗濾膜至少3次，每次淋洗液體積為100ml，在最後一次淋洗液中，接入驗證用菌種（接種量為10—100CFU）；另取一過濾器或濾筒，不過濾供試品，重復以上淋洗操作，作為陽性對照。根據具體情況，可將整張濾膜或半張濾膜轉移至100ml的指定驗證用培養基內，或將培養基加入到裝有濾膜的濾筒內。分別對表中所列菌種及相應的培養基逐一進行驗證，並將容器置於適當的溫度下培養，培養時間不超過14d。如果使用新的濾膜或濾過器（包括不同廠家或批號、型號），則要按上述薄膜過濾法的要求做 , 組試驗，即樣品試驗組、蛋白腖對照組和陽性對照組重新進行驗證確認。
（2）驗證結果評價：如果供試品培養基容器內的培養基內明顯可見微生物生長（混濁），並且與陽性對照容器內的培養結果相似，則在無菌檢查試驗中必須要過濾與驗證試驗相等量的供試品、淋洗液，淋洗相同次數及使用同量的培養基。如果與陽性對照容器內的培養結果相比，供試品容器內微生物生長現象不明顯，則說明該檢驗量在此檢驗條件下有抑菌作用。應增加淋洗次數，重復以上實驗。也可通過更換過濾膜並使用中和劑來消除產品的抑菌作用。USP規定，如果已淋洗了5次，並且每次淋洗液體積達到500ml，仍無法中和膜上的殘余抑菌性物質，那麼在無菌檢查試驗中就採用此淋洗次數與淋洗量作為最終淋洗方法。