1. 正相色譜柱和反相色譜柱的適用范圍
通常所說的正相柱和反相柱的區分其實不是很規范，最開始的時版候正相和反相是通過流動相和權色譜填料的極性去區分。而現在很多的時候大家都把正相柱和反相柱定義為硅膠基質的鍵合柱，如反相是指C18 C8等、而正相是SI 、氨基柱、氰基柱等等。而其實很多別的類型的柱子都是在這個范圍之類的， 比如手性柱有正相的手性柱、反相的手性柱，所以就單獨拿出來叫手性柱，而不用正相和反相去區別。
2. 什麼是反相色譜柱
固定相為非極性的色譜柱。在反相鍵合相色譜中，溶劑的極性越弱洗脫能力越強，即弱極性溶劑的洗脫強度更大
3. 反相鍵合相色譜柱
在使用反相色譜柱時，應該是極性較強的組分先出來。苯的極性大於甲苯（雖然可能有點出乎意料），所以應該是苯先流出色譜柱。
4. 反相色譜中，為什麼要平衡色譜柱
如果你用的來是一般的液相色譜儀，自需要很長的時間平衡柱子和系統，因為離子交換柱對流動相中的離子很敏感，一般的液相色譜儀內壁是金屬的，多會產生離子或靜電荷，對分析造成干擾。推薦用離子色譜儀，或氨基酸分析儀，不過也要平衡一定的時間
5. 請問C18柱是正相還是反相色譜柱CN柱呢
一般來說正相與反相是相對於使用的流動相與柱子的極性比來說的，這樣更為科學，但一般內情況下，用C18柱，它畢容竟是非極性色譜柱基本上用於反相色譜，也以說可以認為是反相柱，而CN柱一般可用於正相與可用於反相，說是正相或反相不太科學了。
6. 怎麼看某一物質用正相色譜柱還是反相色譜柱
本質上是填料(固定相)的不同,正相色譜柱填料極性強,洗脫順序由弱到強；反相色譜柱填料極性弱內，容洗脫順序由強到弱。以下是詳細說明：
1、正相色譜
正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）以及其他具有極性官能團胺基團，如（NH2，APS）和氰基團（CN，CPS）的鍵合相填料。
由於硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他極性基團極性較強，因此，分離的次序是依據樣品中各組分的極性大小，即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene
Chloride）等。
2、反向色譜
反向色譜用的填料常是以硅膠為基質，表面鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。反向色譜所使用的流動相極性較強，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組分最先被沖洗出，而極性弱的組分會在色譜柱上有更強的保留。
常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
7. 請問C18柱是正相還是反相色譜柱CN柱呢
一般來說正相與反相是相對於使用的流動相與柱子的極性比來說的，專這樣更為科學，屬但一般情況下，用C18柱，它畢竟是非極性色譜柱基本上用於反相色譜，也以說可以認為是反相柱，而CN柱一般可用於正相與可用於反相，說是正相或反相不太科學了。
8. 正相色譜柱與反相色譜柱的區別
色譜柱的安裝：
1、首先應確認柱和儀器的接頭以及管路是否匹配。為減少死體積，進樣閥、柱子、檢測器之間的連接管路內徑盡可能使用內徑較小的管線，同時控制進樣器、色譜柱和檢測器之間連接管線的長度。安裝色譜柱之前，確認流路系統中的溶劑是否正常。對分析較復雜的樣品建議安裝保護柱。
2、為了使色譜柱與儀器系統達最佳的連接效果，應盡量使用與色譜柱介面相匹配的螺帽和錐形接頭，如原來的接頭長期匹配其他類型的色譜柱，建議在連接新色譜柱前應檢查匹配情況，避免造成色譜柱的損壞或因色譜柱不匹配造成的漏液。
3、使用PEEK 材料的通用接頭，只需用手擰緊不需要特定扳手，使用壓力為5000psi；使用溫度不得超過100℃。
流動相平衡：
1、在進行樣品檢測前，至少使用20倍柱體積流動相使色譜柱充分平衡。流動相一定要使用色譜級別的溶劑。如使用水相的緩沖液應當天配製以保持新鮮避免細菌產生。
2、流動相使用前需用微孔濾膜過濾,消除流動相中顆粒對色譜系統和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動相混合後應重新過濾避免溶解度變化造成產生新的沉澱。不應使用純水作為流動相沖洗C18色譜柱，以免柱性能損壞（添加5％的有機溶劑沖洗色譜柱，同時可以達到對緩沖鹽清洗的作用。還可以使色譜柱更容易平衡）。
3、流動相需脫氣後使用，可避免因氣泡導致的泵和檢測器的工作不正常。如果測試時使用的流動相與色譜柱保存使用的流動相有較大區別，應該使用過度分布的形式進行平衡。避免由於流動相的突然變化造成柱壓增加過大或流動相緩沖鹽結晶造成對色譜柱和儀器系統的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長的平衡時間。
樣品制備與操作：
1、樣品應當盡可能溶解在能與流動相相互溶的溶劑中。除特殊指明外，如使用強溶劑溶解樣品柱子的解析度將可能降低。
2、樣品溶液在進樣前應使用針頭式過濾器對樣品預先過濾。頻繁改變流動相組成，會加速降低柱效。
3、色譜柱由高壓勻漿法裝填，能承受較高壓力。為獲得最佳分離效果，使用時請不要超過200kgf，而且避免壓力突然上升或變化，否則會造成硅膠填料的破壞，減少色譜柱的使用壽命。除特殊要求外最高操作溫度不要超過60℃。
保存色譜柱：
1、如果流動相含有酸或無機鹽，應當先用去離子水（20倍柱體積）沖洗干凈。然後用用100％乙腈或甲醇保存色譜柱。最後用柱子的接頭密封，並放在穩定的環境中存放。
2、應避免色譜柱受到直接的機械沖擊或摔落，避免造成色譜柱性能的降低。
色譜柱的再生：
1、用相當於20倍柱體積的溶劑按下列順序沖洗柱子，建議按柱子的箭頭方向沖洗，盡可能不反沖：沖洗時使用的的參考溶劑順序是水、甲醇、氯仿、異丙醇、甲醇。
9. 反相鍵合相色譜柱
2，4-二硝基苯酚由於在2，4位置有吸電子基團會影響苯環中的共軛結構，使得整個分內子容凈偶極矩較大，分子極性較強。在反相色譜中，由於固定相極性弱於流動相，根據色譜保留原理，極性較大的物質先於極性較小的物質流出，因此出峰順序應為：2，4-二硝基苯酚>苯酚
10. 正相色譜柱與反向色譜柱是如何界定的各適合哪類物質的分離
這個也沒有特別嚴格的界定，一般而言，C18、C8、C4、C1等色譜柱是反相色譜柱。剩餘的極性的叫做正相色譜柱。「色譜世界」網站的產品中心，對這些都進行了分類，你自己去看看吧。