隨著人們對於生活質量提升的逐漸重視，人們在購買各種家用產品的時候也會重視對於生活質量提升有沒有幫助，凈水器是現在很多的家庭都會購買的一種設備，因為現在的水資源污染是比較嚴重的，即使是經過的凈化的水源，流通到人們家裡的時候還是會含有一定程度的雜質，因此人們就需要凈化水源，超濾機是凈水器的一種，今天我們就具體介紹超濾機。
超濾機是什麼
超濾(Ultra-filtration,UF)是一種能將溶液進行凈化和分離的膜分離技術。超濾膜系統是以超濾膜絲為過濾介質，膜兩側的壓力差為驅動力的溶液分離裝置。超濾膜只允許溶液中的溶劑(如水分子)、無機鹽及小分子有機物透過，而將溶液中的懸浮物、膠體、蛋白質和微生物等大分子物質截留，從而達到凈化或分離的目的。超濾技術在反滲透預處理、飲用水處理、中水回用等領域發揮著越來越重要的作用.超濾技術在酒類和飲料的除菌與除濁,葯品的除熱原以及食品及制葯物濃縮過程中均起到關鍵作用.
超濾機和反滲透機有什麼區別
過濾精度：反滲透技術和超濾膜技術最大的區別就在於過濾精度。反滲透是攜基指在膜的進水一側施加比溶液滲透壓高的外界壓力，只允許溶液中水和某些組分選擇性透過，其他物質不能透過而被截留在膜表面的過程，簡稱為RO，其過濾精度為0.0001微米。而超濾以壓力差為動力，分離分子量范圍為幾百至幾百萬，膜孔徑約0.001~0.2微米的物理篩分過程，簡稱為UF，其過濾精度為野或0.001微米。
功能上的不同：RO機可以將雜質、鐵銹、泥沙、膠體、細菌、病毒，以及對人體有害的放射性粒子、有機物、熒光物、農葯去除掉，還可以將水鹼和重金屬去除掉;但同時也會去除掉對人體有益的微量元素。而超濾機能夠過濾掉自來水中的雜質、鐵銹、部分細菌、病毒、膠體等，過濾後的水保留對人體有益的微量元素。
在今天的文章中，我們主要介紹的是和超濾機有關的內容，大家可以看出我們將超濾機的知識分為了兩個部分去進行展開，首先我們介紹了什麼是超濾機，雖然超濾機是凈水器的一種，但是辯脊謹依然有用戶朋友對於超濾機不是很了解，所以我們就簡單介紹了超濾機的基本信息，然後我們開始分析超濾機與反滲透機有什麼區別，這兩個方面的區別希望大家都可以仔細去閱讀。
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㈡ 做WB蛋白濃度低怎麼辦
提高SDS-PAGE的上樣量
將蛋白樣品超濾濃縮幾倍提高濃度
WB壓片時間稍微延長一點
㈢ 蛋白純化後濃度太低怎麼辦
蛋白純化後濃度太低怎麼辦
提高SDS-PAGE的上樣量 將蛋白樣品超濾濃縮幾倍提高濃度 WB壓片時間稍微延長一點
㈣ 如何從細菌中提取微量蛋白來做western
菌體破碎，離心，收集上清，電泳-WB
蛋白多沒關系，抗體和目的蛋白當然是特異性結合的，WB的靈敏度很高
如果表達量不高，可以把上清液用超濾離心管濃縮一下，再跑電泳，做WB就可以了
㈤ 外泌體提取策略
外泌體即細胞外囊泡（簡孫納卜稱EVs）是所有細胞主動分泌的納米級囊泡,活細胞釋放不同類型的細胞外囊泡進入細胞外環境進行細胞間交流,細胞外囊泡越來越多地被認為是有希望的液體活檢生物學標志物｡根據相似囊泡的直徑大小可將細胞外囊泡分為三類,直徑在50-150nm的外泌體,直徑在100-1000nm的微囊泡､外粒體和微顆粒,直徑在-100-5000nm的凋亡小體｡目前主要認為,外泌體產生的過程是細胞膜內陷形成內體,再形成多泡體,多泡體與質膜融合導致其管腔內囊泡釋放到細胞外,產生一種稱為外泌體的EV亞型｡
2 外泌體的提取純化方法
2.1 基於密度的分離方法
2.1.1 超速離心法
超速離心法是最常用的外泌體提取方法,首先,施加較低速度的離心力300g以從細胞培養液中去除細胞;然後,對上清液施加較大的離心力(10000-20000g),去除大的細胞碎片和破碎的細胞器;最後,再次進行高速(100000-150000g)離心從 上清液 中收集外泌體,所有離心在4℃下進行｡超速離心法獲得的外泌體不被分離試劑污染,且分離數量多,處理樣本小｡盡管超速離心法是提取外泌體最廣泛的「金標准」,但仍然有很多缺點,如所需的超高速離心儀器比較昂貴､樣品量大､耗時長､電鏡觀察外泌體時仍存在蛋白質污染｡
2.1.2 蔗糖密度梯度離心法
目前已發現,外泌體在蔗糖梯度為1.15-1.19g/mL密度中漂浮,所以根據這個特性,可以將樣品與蔗糖梯度溶液一起超速離心,外泌體沉降到不同的密度區域就可以將其區分出來｡蔗糖密度梯度離心法需要預先配好連續梯度濃度的蔗糖溶液,將蔗糖溶液鋪於離心管底部,再將樣本放於上部,4℃下100000g超速離心｡蔗糖密度梯度離心法獲得的外泌體純度較高,但是前期准備復雜,耗時長,又不能完全將外泌體與蛋白質分離開｡2013年10月ISEV會議一些研究人員表示,通過蔗糖密度梯度離心法分離囊泡時,細胞囊泡的生物功能喪失｡
2.2 沉澱法
2.2.1 聚乙二醇 (PEG)
PEG 是一種水溶性非離子化合物,具有極強的親水性,可以與疏水的脂質雙分子層結合,從而改變外泌體的溶解度而使外泌體沉澱｡RIDER等研究發現,PEG水平會影響外泌體的產率,且從外泌體中獲得的總蛋白和RNA在數量和質量上足以用於蛋白質組學和測序分析｡沉澱法操作簡單,不需要特殊設備,更經濟,外泌體產量高,但是會沉澱一些非外泌體的疏水性物質而導致外泌體純度不夠｡
2.2.2 試劑盒法
最近已經開發出基於聚合物共沉澱的試劑盒,如ExoQuick､TEI等,可用於提取多種體液中的外泌體｡聚合物沉澱劑ExoQuick與樣品4℃共孵育30min,然後室溫1500g離心30min,即可獲得外泌體沉澱｡與超速離心法比較,試劑盒法更簡便､耗時短,且能獲得更高的外泌體產量｡試劑盒法獲得外泌體沉澱含有的雜質較多,不同來源的樣本需要使用不同的試劑盒來進行提取,且試劑盒價格較貴｡
2.3 基於大小的分離方法
2.3.1 SEC SEC
主要根據外泌體的大小對外泌體進行分離和純化｡樣品中大分子物質不能進入凝膠孔而被流動相快速洗脫出來,尺寸小於孔徑的物質可進入多孔材料,需要較長時間被洗脫出來,即可通過不同的洗脫時間分離外泌體｡BING等證明了瓊脂糖凝膠可以從無血小板上清液中純化出外泌體,通過這種方法茄吵,外泌體很容易從蛋白質和高密度脂蛋白中分離出來｡HONG等通過改編和使用mini-SEC方法能夠有效分離出外泌體,與漫長而復雜的超速離心法不同,它可在30min內完成外泌體分離｡通過SEC分離的外泌體純度較高,分離出結構上完整且功能活躍的囊泡是基於微型SEC分離的重要優勢,但數量較少,而且需要特殊設備,故應用不廣泛｡
2.3.2超濾法
超濾法是根據外泌體的大小使用相應孔徑的濾膜,將樣品中小分子物質過濾到膜的另一側,而將大分子物質滯留在膜上來達到分離的目的｡超慮法簡單､省時､成本低｡LIU等改則穗良了簡單的超濾法,通過將不同孔徑的膜(200､100､80､50､30nm)串聯在一起,實現了不同大小外泌體的快速分離,且捕獲效率明顯高於超速離心法｡然而,過濾器很容易被囊泡和其他大分子物質堵塞,這種情況很容易導致膜壓力過大而破碎｡
2.4 基於表面成分親和力的分離法
2.4.1 蛋白質
外泌體表面含有豐富的蛋白質,所以基於其表面成分的親和力特別適合於分離外泌體｡CD63是外泌體中發現的最豐富的蛋白質之一,因此,常用抗CD63免疫吸附外泌體｡ZHAO等通過使用抗CD63包裹的磁珠與血液樣品不斷混合,將外泌體捕獲到磁珠上後,加 緩沖液 沖洗5min,然後引入3種不同熒光染料標記的抗體[抗CD24､抗上皮細胞黏附分子(抗EpCAM)､抗糖類抗原-125(抗CA-125)],通過觀察不同熒光強度可以量化卵巢癌中不同腫瘤標志物的表達水平｡
2.4.2 膜磷脂
雖然大部分基於表面成分的親和方法是基於外泌體表面的蛋白質,但是脂質雙層也是一種很好的檢測目標｡XU等利用外泌體膜上表達的磷脂醯 絲氨酸 (PS)可以被PS結合受體Tim4很好地結合,用Tim4固定化的磁珠與樣品反應進行外泌體捕獲,並且觀察到洗脫的外泌體保持著完整的形態,與商業外泌體提取試劑盒相比,表現出更高的捕獲率｡CHEN等利用外泌體將帶負電荷的PS暴露在膜上的特點,使用帶正電荷基團的離子交換樹脂的磁珠與血漿樣品反應,血漿中的外泌體就能與磁珠結合,通過這種方法分離的外泌體具有比超速離心法更高的回收率和更少的雜質蛋白｡
2.5 ACE分離法
ACE微陣列產生的介電泳(DEP)分離力是通過施加交流電場產生的,納米級的粒子和其他納米級實體物質被吸引到圓形微電極邊緣周圍的DEP高場區域,細胞和大的實體物質被吸引到DEP低場區域｡ IBS EN等的ACE裝置需要30-50μL血漿樣品就能夠在15min內將外泌體濃縮到微電極周圍的高場區域｡ACE設備流程明顯快於目前使用的方法,這個裝置簡化了外泌體提取和回收過程的能力,明顯減少了加工步驟和消耗時間｡CHEN等構建了具有交叉電極的DEP晶元,能在30min內從血漿樣品中分離出外泌體｡經過測試證明,DEP晶元具有高捕獲率和高回收率,需要的時間更短,並且不需要笨重和貴重的儀器｡
2.6 微流控晶元法
微流控晶元法是新開發出來的用於快速高效分離樣品中外泌體的方法｡WOO等使用2個納米過濾器(Exodisc)集成的實驗盤在30min內實現了20-600nm外泌體的全自動富集｡使用納米粒子跟蹤分析定量檢測證實了細胞培養上清液中外泌體的回收率大於95%｡與超速離心法相比,Exodisc提供了高出100倍的mRNA水平,更省時,所需樣本量更少｡FANG等開發了一種微流體晶元,將包裹了抗CD63的磁珠與血漿樣品通入晶元,在第1個腔室中捕獲到外泌體,通入一抗與磁珠-外泌體混合物結合,再通入熒游標記的二抗形成磁珠-外泌體-一抗-二抗混合物聚集在第2個腔室｡微流控晶元法操作簡單,捕獲率高,特別適合於生物學研究｡外泌體作為癌症診斷的有前景的生物學標志物,其在癌症的液體 活檢 中受到關注｡外泌體的生物學價值和臨床應用價值凸顯了開發有效提取和分離外泌體技術的重要性和必要性｡相信隨著技術的不斷進步和創新,外泌體提取將變得更加簡便經濟,純度越來越高,完整性越來越好｡
提取後往往需要進一步檢測，確定提取的是不是外泌體。有三種方法：1. 掃描電鏡觀察；2. NTA儀器粒徑檢測；3. WB檢測。如圖所示，在外泌體上往往存在許多標志物，這時候就可以選擇相應的抗體進行WB檢測。根據22 篇外泌體相關文獻的統計，排在前4 位的檢測指標為 CD63（13/22）、Tsg101(8/22)、CD9 和CD81並列第三位（6/22）；接著檢測較多的4 個指標為Alix （4/22）、HSP70(3/22)、flotillin (3/22)和Syntenin (2/22)；此外還有一些指標僅在1 篇文獻中出現過，例如HSP90、LAMP2B、LMP1、ADAM10、nicastrin、AChE、AQP2、RPL5、a-1AT。針對外泌體的定性檢測至少選擇兩個指標就能滿足文章發表需要了，比如檢測CD63 和Tsg101。