① DEAE 層析原理是什麼
給你找了以前的文章，你可以看一下。如下。。
層析技術是以離子交換纖維素或以離子交換葡聚糖凝膠為固定相，以蛋白質等樣品為移動相，分離和提純蛋白質、核酸、酶、激素、多糖等的一項技術。
在纖維素與葡聚糖分子上結合有一定的離子基團，當結合陽離子基團時，可換出陰離子，則稱為陰離子交換劑。如二乙氨乙基(Dicthylaminoethyl，DEAE)纖維素。在纖維素上結合了DEAE，含有帶正電荷的陽離子纖維素—O—C6 H14N+H，它的反離子為陰離子(如Cl-等)，可與帶負電荷的蛋白質陰離子進行交換。當結合陰離子基團時，可置換陽離子，稱為陽離子交換劑，如羧甲基(Carboxymethy， CM)纖維素。纖維素分子上帶有負電荷的陰離子(纖維素－O－CH2－COO一)，其反離子為陽離子(如Na+等),可與帶正電荷蛋白質陽離子進行交換。
溶液的pH值與蛋白質等電點相同時，靜電荷為0，當溶液pH值大於蛋白質等電點時，則羧基游離，蛋白質帶負電荷。反之，溶液的pH值小於蛋白質等電點時，則氨基電離，蛋白質帶正電荷。溶液的pH值距蛋白質等電點越遠，蛋白質的電荷越多。反之則越少。血清蛋白質均帶負電荷，但各種蛋白質帶負電荷的程度有所差異，以白蛋白為最多，依次為 球蛋白， 球蛋白和 球蛋白。
在適當的鹽濃度下，溶液的pH值高於等電點時，蛋白質被陰離子交換劑所吸附；當溶液的pH值低於等電點時，蛋白質被陽離子交換劑所吸附。由於各種蛋白質所帶的電荷不同。它們與交換劑的結合程度也不同，只要溶液pH值發生改變，就會直接影響到蛋白質與交換劑的吸附，從而可能把不同的蛋白質逐個分離開來。
交換劑對膠體離子(如蛋白質)和無機鹽離子(如NaCl)都具有交換吸附的能力，當兩者同時存在於一個層析過程中，則產生競爭性的交換吸附。當Cl一的濃度大時，蛋白質不容易被吸附，吸附後也易於被洗脫，當Cl一濃度小時，蛋白質易被吸附，吸附後也不容易被洗脫。因此，在離子交換層析中，一般採用兩種方法達到分離蛋白質的目的。一種是增加洗脫液的離子強度，一種是改變洗脫液的pH值。pH值增高時，抑制蛋白質陽離子化，隨之對陽離子交換劑的吸附力減弱。pH值降低時，抑制蛋白質陰離子化，隨之降低了蛋白質對陰離子交換劑的吸附。當使用陰離子交換劑時，增加鹽離子，則降低pH值。當使用陽離子交換劑時，增加鹽離子濃度，則升高溶液pH值。
② 離子交換纖維素色譜法基本理論
離子交換纖維素色譜法是一種基於離子交換劑的層析技術。離子交換劑，如樹脂、纖維素、葡聚糖和醇脂糖等，其分子結構中含有可解離的基團，這些基團能在水溶液中與溶液中的其他陽離子或陰離子進行交換。盡管這種交換是平衡的，但在層析柱操作中，通過連續添加新的交換溶液，平衡偏向正向，直至所有離子被完全洗脫。同樣，當溶液通過交換柱時，離子被逐漸替換，直至吸附在樹脂上。
在混合物中，如果存在多種成分吸附在離子交換劑上，其洗脫能力取決於它們與離子交換劑的反應平衡常數。蛋白質的離子交換過程包括吸附和解吸附階段。通過調整pH值或增加離子強度，可以改變蛋白質的電荷狀態，使其與離子交換劑分離。不同蛋白質與離子交換劑的親和力不同，這使得通過選擇合適的洗脫條件，可以逐個分離純化混合物中的組分。
離子交換纖維素色譜法的優勢主要體現在以下幾個方面：首先，其開放性支持骨架允許大分子自由進入並快速擴散，因此吸附容量大。其次，由於其親水性，對大分子的吸附相對較弱，溫和的條件就能使吸附物洗脫，避免蛋白質變性或酶失活。最後，離子交換劑具有多孔性，表面積大，交換容量高，這提高了回收率，使其在分離和制備過程中表現出色。
Sober和Peterson於1956年首次將離子交換基團結合到纖維素上，製成了離子交換纖維素，成功地應用於蛋白質的分離。從此使生物大分子的分級分離方法取得了迅速的發展。離子交換基團不但可結合到纖維上，還可結合到交聯葡聚糖（S-ephadex）和瓊脂糖凝膠（Sepharose）上。近年來離子交換色譜技術已經廣泛應用於蛋白質、酶、核酸、肽、寡核苷酸、病毒、噬菌體和多糖的分離和純化。
③ 在使用離子交換色譜時,應該選擇什麼樣的離子交換劑選擇什麼樣的骨架
離子交換技術：
Sober 和 Peterson於1956年首次將離子交換基團結合到纖維素上，製成了離子交換纖維素，成功地應用於蛋白質的分離。從此使生物大分子的分級分離方法取得了迅速的發展。離子交換基團不但可結合到纖維上， 還可結合到交聯葡聚糖（S-ephadex）和瓊脂糖凝膠（Sepharose）上。 近年來離子交換色譜技術已經廣泛應用於蛋白質、酶、核酸、肽、寡核苷酸、病毒、噬菌體和多糖的分離和純化。它們的優點是:⑴具有開放性支持骨架，大分子可以自由進入和迅速擴散，故吸附容量大。⑵具有親水性，對大分子的吸附不大牢固，用溫和條件使可以洗脫，不致引起蛋白質變性或酶的失活。⑶多孔性，表面積大、交換容量大，回收率高，可用於分離和制備。
一、基本理論
離子交換劑通常是一種不溶性高分子化合物，如樹脂，纖維素，葡聚糖，醇脂糖等，它的分子中含有可解離的基團，這些基因在水溶液中能與溶液中的其它陽離子或陰離子起交換作用。雖然交換反應都是平衡反應，但在層析柱上進行時，由於連續添加新的交換溶液，平衡不斷按正方向進行，直至完全。因此可以把離子交換劑上的原子離子全部洗脫下來，同理，當一定量的溶液通過交換柱時，由於溶液中的離子不斷被交換而波度逐減少，因此也可以全部被交換並吸附在樹脂上。如果有兩種以上的成分被交換吸著在離子交換劑上，用洗脫液洗脫時，在被洗脫的能力則決定於各自洗反應的平衡常數。蛋白質的離子交換過程有兩個階段——吸附和解吸附。吸附在離子交換劑上的蛋白質可以通過改變pH使吸附的蛋白質失去電荷而達到解離但更多的是通過增加離子強度，使加入的離子與蛋白質競爭離子交換劑上的電荷位置，使吸附的蛋白質與離子交換劑解開。不同蛋白質與離子交換劑之間形成電鍵數目不同，即親和力大小有差異 ，因此只要選擇適當的洗脫條件便可將混合物中的組分逐個洗脫下來，達到分離純化的目的。
④ 需要pH4.5的葡聚糖凝膠層析洗脫液應該用哪種怎樣配製
1.凝膠的預處理
交聯葡聚糖凝膠的市售商品多為乾燥顆粒，使用前必須充分溶脹。方法是將欲使用的干凝膠緩慢地傾倒入5～10倍的去離子水中，參照相關資料中凝膠溶脹所需時間，進行充分浸泡，然後用傾倒法除去表面懸浮的小顆粒，並減壓抽氣排除凝膠懸液中的氣泡，准備裝柱。在許多情況下，也可採用加熱煮沸方法進行凝膠溶脹，此法不僅能加快溶脹速率，而且能除去凝膠中污染的細菌，同時排除氣泡。
2.裝柱
層析柱的選擇一般根據分離樣品的種類和樣品的數量而定。純化蛋白質時，柱床體積應為樣品體積的25～100倍。去除鹽及游離熒光素約為樣品體積的4～10倍。柱太短，影響分離效果。柱長一些，分離效果好，但柱太長，則延長分離時間，樣品也稀釋過度。層析柱的內徑也要選擇適當。內徑過細，會發生「器壁效應」，即靠近管壁的流速要大於中心的流速影響分離效果。所以層析柱的內徑和高度應有一定的比例。對於除鹽來說應為1︰5～1︰25；對於純化蛋白質來說應為1︰20～1︰100。
凝膠柱的裝填方法和要求，基本上與離子交換柱的制備相同。一根理想的凝膠柱要求柱中的填料(凝膠)密度均勻一致，沒有空隙和氣泡。通常新裝的凝膠柱用適當的緩沖溶液平衡後，將帶色的蘭葡聚糖–2000、細胞色素，或血紅蛋白等物質配製成質量濃度為2g/L的溶液過柱，觀察色帶是否均勻下移，以鑒定新裝柱的技術質量是否合格，否則，必須重新裝填。
3.加樣與洗脫
（1）加樣量：加樣量與測定方法和層析柱大小有關。如果檢測方法靈敏度高或柱床體積小，加樣量可小；否則，加樣量增大。例如利用凝膠層析分離蛋白質時，若採用28Onm波長測定吸光度，對一根2cm×6Ocm的柱來說，加樣量需5mg左右。一般來說，加樣量越少或加樣體積越小(樣品濃度高)，解析度越高。通常樣品液的加入量應掌握在凝膠床總體積的5％～10％。樣品體積過大，分離效果不好。
對高解析度的分子篩層析，樣品溶液的體積主要由內水體積(Vi)所決定，故高吸水量凝膠如Sephadex G-200，每mL總床體積可加0.3～0.5mg溶質，使用體積約為0.O2倍總體積；而低吸水量凝膠如Sephadex G–75，每mL總床體積加溶質質量為0.2mg，樣品體積為0.Ol倍總體積。
（2）加樣方法：如同離子交換柱層析一樣，凝膠床經平衡後，吸去上層液體，待平衡液下降至床表面時，關閉流出口，用滴管加入樣品液，打開流出口，使樣品液緩慢滲入凝膠床內。當樣品液面恰與凝膠床表面持平時，小心加入數mL洗脫液沖洗管壁。然後繼續用大量洗脫液洗脫。
（3）洗脫：加完樣品後，將層析床與洗脫液儲瓶、檢測儀、分部收集器及記錄儀相連，根據被分離物質的性質，預先估計好一個適宜的流速，定量地分部收集流出液，每組分一至數mL。各組分可用適當的方法進行定性或定量分析。
凝膠柱層析一般都以單一緩沖溶液或鹽溶液作為洗脫液，有時甚至可用蒸餾水。洗脫時用於流速控制的裝置最好的是恆流泵。若無此裝置，可用控制操作壓的辦法進行。樣品體積不宜過多，最好為床體積的1％～5%，最多不要超過10%。樣品濃度也不宜過大，濃度過大粘度大，分離效果差，一般不超過4%。
洗脫液應與膨脹一致，否則更換溶劑，凝膠體積會發生變化，影響分離效果。洗脫液要有一定的離子強度和pH值。分離血清蛋白常用0.02～0.1Mol/L pH 6.9～8.0的PBS液（0.14Mol/L NaCl）和0.1Mol/L pH8.0Tris-HCl緩沖鹽溶液（0.14Mol/L NaCl）。
凝膠再生和保存
凝膠層析的載體不會與被分離的物質發生任何作用，因此凝膠柱在層析分離後稍加平衡即可進行下一次的分離操作。但使用多次後，由於床體積變小，流動速率降低或雜質污染等原因，使分離效果受到影響。此時對凝膠柱需進行再生處理，其方法是:先用水反復進行逆向沖洗，再用緩沖溶液平衡，即可進行下一次分離。
對使用過的凝膠，若短時間保存，只要反復洗滌除去蛋白質等雜質，加入適量防腐劑即可；若長期保存，則需將凝膠從柱中取出，進行洗滌、脫水和乾燥等處理後，裝瓶保存。