Ⅰ 外泌體純化之切向流超強攻略
切向流過濾(TFF)是樣品分離的一種技術,通過膜過濾過程,利用壓力驅動樣品沿膜表面切向流動,實現根據分子大小分離。在這一過程中,小分子和緩沖液透過膜,大分子則被截留,隨後可被沖走。相比死端過濾,切向流過濾避免了濾膜堵塞,具有重復使用性,適合大規模樣品處理,降低成本。
切向流過濾支持中空纖維和盒式膜包介質。中空纖維結構簡單,適用於剪切力敏感、高固體、高粘度樣品,如Cytiva中空纖維膜柱,具有高強度和良好高溫穩定性。盒式膜包則處理速度快、通量高,但湍流效應可能對樣品造成更高剪切力。
選擇過濾介質時,需考慮是否希望得到透過端料液或收獲截留樣品,以及膜孔徑大小與目標分子量的關系。通常,澄清過濾哺乳動物細胞分泌表達上清選擇0.2 μm到0.65 μm微濾膜,大腸桿菌裂解液的澄清使用500 KD或750 KD超濾膜,而酵母分泌上清則可用750 KD超濾膜或0.1 μm微濾膜。
ÄKTA™ flux是一種多功能切向流過濾系統,適用於科學研究、過濾篩選、工藝開發和小規模生產。它能配合不同孔徑的中空纖維或膜包,進行微濾和超濾,用於樣品濃縮、洗濾、細胞收獲和澄清。通過控制參數如循環流速、跨膜壓,ÄKTA™ flux可實現自動化控制,包括警告和報警功能、自動化終點控制、數據記錄、恆定截留體積控制和透過流量控制。此外,其易於使用的操作界面簡化了實驗過程管理。
Ⅱ 切向流過濾生產放大中的產率優化
收率(%)
工藝最終迴流端或透過端所收獲的產品佔起始產品的百分比。
%Yield = 100*(VR*CR)/(Vo*Co)
收率損失可能包括透過端的損失、濾膜的吸附及不可回收的產品。
產品收率是生物制葯工藝中重要的參數。
以上圖為例,計算得出產品回收率為97.6%。
傳統單抗工藝每14天收獲一批細胞收獲液,年生產25批次,提升2%回收率,相當於額外收獲0.5批次產品。
影響產品回收的因素包括工藝性能、系統設計和產品回收策略。
超濾膜類型包括改良纖維素和聚醚碸,分別適用於含有有機溶劑的溶液、稀蛋白溶液和高收率要求應用。
選擇超濾膜孔徑需要考慮產品位置,產品在迴流端選擇約產品大小的1/3-1/5,產品在透過端選擇約5倍產品大小。
濾膜截留率影響產品收率,更開放的濾膜可能產生更高通量,但需評估截留效果。
系統設計需確保夾具分布均勻,以避免高濃度和低通量,同時考慮減少死體積、死角和優化混合效果。
最小工作體積定義為系統運行時可不引起明顯湍流或氣泡的最小體積,是系統設計的關鍵。
產品回收策略優化包括系統排放、系統吹掃、緩沖液沖洗、緩沖液頂洗和緩沖液循環,每種方法有其適用場景。
系統排放是最簡便的方法,需設計最低排放點以提高效率。系統吹掃利用氣壓回收,需有高點氣體介面。緩沖液沖洗需考慮稀釋問題。
緩沖液頂洗將緩沖液緩慢引入系統管路,作為「活塞」推動產品,減少稀釋風險。緩沖液循環需要較大的體積,同樣存在稀釋風險。
Ⅲ 切向流的應用領域
切向流超濾系統主要應用於生物製品的濃縮、提純、透析(脫鹽和脫醇等)、置換緩沖液、培養液和緩沖液除熱源等
切向流微濾系統主要應用於生物工程領域下游處理,如取代離心機從發酵液中收集細胞及去除細胞碎片等
Ⅳ 賽多利斯的經歷
2013年,賽多利斯中國及亞洲區總部在上海成立,並於次年正式啟用上海應用中心。2017年,中國驗證實驗室在上海投入使用。2019年一次性生物反應袋在北京工廠投產。
130多年以來,賽多利斯公司一直在不斷創新和改進稱量技術,始終走在稱量技術發展的前沿。發明了:第一台鋁制短臂分析天平(1870);第一台精度達一億分之一克的超微量天平,於1971年被載入《吉尼斯世界紀錄大全》,創造了世界最高精度的紀錄,並一直保持至今;應用40MHz高速微處理技術的電子天平(1990);超級單體感測器,在德國、美國和瑞士等國家都取得了專利(1998)。
目前,賽多利斯的產品遍布世界各地,獲得了很高的聲譽。從居里夫人實驗室到美國宇航局,從中國國家計量院的基準天平到北京大學國際奧林匹克化學競賽天平......無一不凝結著賽多利斯對高科技發展的貢獻。
產品及服務
一、實驗室產品與服務
賽多利斯的實驗室產品與服務專注服務於制葯和生物制葯企業以及各類科研機構的實驗室。我們為科學家和實驗室工作人員提供精密可靠的實驗器材、創新的解決方案,簡化和加快他們的研究和質控流程,提高實驗的成功率。
1、稱重
2、液體處理
3、實驗室純水
4、實驗室過濾和純化
5、微生物質量控制
6、細胞分析
二、生物工藝解決方案
賽多利斯的生物工藝解決方案致力於為生物制葯企業提供全套的解決方案。從最初的創意到上市投產,我們幫助全球的生物技術科學家和工程師開發和研製新葯,讓更多的人能夠獲得療效更好、價格更加實惠的葯物。
1、細胞培養基
2、生物反應器/發酵罐
3、流體管理
4、工藝過濾和純化
5、工藝控制和數據分析
賽多利斯是國際領先的生命科學研究和生物制葯行業合作夥伴。集團的實驗室產品及服務版塊為生物制葯企業以及各類科研機構提供創新的實驗室設備及產品,以滿足客戶開展高端科研實驗和嚴苛的質控需求。集團的生物工藝解決方案版塊提供全套的生物制葯設備,並專注於一次性解決方案,幫助客戶安全高效地生產生物葯品和疫苗。集團營業額保持著兩位數的年均增長率,並通過收購互補性技術不斷擴大我們的業務范圍。2019財年,集團營業額達18.3億歐元。目前集團擁有9,000多名員工,60多個生產和銷售基地,服務於全球用戶。
Ⅳ 切向流的介紹
切向流是指液體流抄動方向與過濾方向呈垂直方向的過濾形式。傳統的液體死端過濾(dead end),也叫垂直過濾,是大部分微孔過濾(MF,微濾),包括除菌過濾所採用的過濾形式,其液體的流動方向與過濾方向一致,隨著過濾的進行,過濾膜表面形成的濾餅層或凝膠層厚度逐漸增大,流速逐漸降低。當過濾介質為孔徑細小的超濾膜或微濾膜時料液中固形物含量很高時,採取死端過濾方式,流速將急速降低,因此死端過濾只能處理小體積的料液。
Ⅵ 何謂切向流過濾超濾時為什麼要採用切向流過濾
切向流過濾又叫做錯流過濾,是相對於死端過濾來講的。
死端過濾是指,水流的方向垂專直於膜的表屬面,這樣的話能夠最大限度的提高水通量,但是容易使污染物在膜表面富集,堵在膜孔裡面,且不易清洗,通量下降很快;
錯流過濾是指,水流的方向平行於膜的表面,這樣可以大量減少污染物在表面的富集,因為水流會將其帶走,同時也減少了堵孔的概率,使膜的通量能夠保持,同時,膜上面承受的壓力也更小,這樣就可以延長膜的使用壽命。