1. 關於實驗室抽慮除菌的操作
問：最近要做一些培養基，有一些糖類需要過濾除菌，但不知道怎麼操作，還需要什麼輔助設備？
答：你只要有濾膜和配套的過濾器就可以了，一般在超凈工作台上進行。濾膜用0.22微米或0.45微米兩種規格，指的是濾膜的孔徑大小吧。一般0.22就夠了！
答：如果溶液的量比較大，超過500ml，可以採用已滅菌的抽濾瓶，預先墊好0.22um 的濾膜。抽濾瓶滅菌前要檢查封口用紗布或棉花堵牢，使用時，不用在無菌室中進行，只要保證收集瓶無菌狀態就可以。抽濾後，過濾好的溶液在無菌條件下倒進已滅菌的空試劑瓶中。
如果用小量的溶液過濾，無菌室內用一次性注射器和一次性0.22um濾膜（millipore或pall都有賣）就可以。
答：看過濾的量，如果量小，用注射器加濾器、0.22微米濾膜過濾，濾器加上濾膜後蓋緊，稍旋松，飯盒密封100度蒸餾水煮沸30分鍾滅菌，用來承接無菌糖水的瓶需高壓。用時在無菌操作台上操作，並先旋緊濾器，注意濾器外流下去的哪怕一滴也會造成染菌；過濾應該是費力的，如果感覺很輕松，則濾膜已破。0.45微米的濾膜一般用於兩次過濾的第一次，以防止0.22堵塞。注射器，若能高壓更好些。
如果量大，正壓可用蠕動泵接皮管接不銹鋼濾器大張濾膜，這些都是要高壓的。負壓可用抽濾。
2. 過濾除菌操作時，將菌液注入濾器過濾，時間不宜過長，壓力控制在多少為宜
1、滅菌方法
培養基的滅菌方法主要有兩種，高壓除菌及0.22um微孔濾膜過濾除菌。與過濾相比，高壓滅菌的工作強度小，成本較低，但易造成營養成分的流失，而且在多次加樣（無菌谷氨醯胺溶液，無菌碳酸氫鈉溶液等）過程中容易造成二次污染。大多數培養基採用0.1～0.2μm孔徑的微孔濾膜進行過濾滅菌，並且已成為培養基除菌的發展方向，它可低限度地減少培養基的營養損失。
1.1 高壓滅菌
某些培養基（如MEM）可進行高壓滅菌，例如清大天一的MEM培養基中的MD605、MD609等。這類培養基一般不含有L-谷氨醯胺和碳酸氫鈉，一般是在培養基高壓滅菌後加入L-谷氨醯胺和碳酸氫鈉的無菌的液體。另外可高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨醯-L-谷氨醯胺）可代替L-谷氨醯胺。
可高壓滅菌的培養基在121℃、15psi，15分鍾的條件下完全可達到滅菌效果及營養成分的最小損失，不需將滅菌時間延長。為保證高壓滅菌的效果，滅菌設備的驗證很關鍵。
1.2 過濾滅菌
可供過濾滅菌使用的濾膜很多，其材料多為polyethersulphone（PES）、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。一般情況下採取正壓過濾，正壓過濾較之負壓過濾具有流速高、過濾快、不易污染，可避免蛋白質產生大量氣泡等優點。一般使用過濾器可參照各供應商的產品說明書。
目前大多數實驗室和制葯企業採用微孔濾膜濾器（如Zeiss濾器）或立式微孔濾器（Millipore、Pall）除菌。微孔濾膜濾器為不銹鋼，中間可夾放0.22um濾膜。使用這種濾器最重要步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程。如在使用Zeiss濾器時，先要用培養用水將濾膜充分潤濕，在安裝濾膜時可在其上放置一層定性濾紙再固定。消毒時旋鈕不要扭太緊，凡與空氣接觸部位都要包好（可用牛皮紙、紗布、無紡布等）；高壓滅菌後，在無菌環境中立即將旋鈕扭緊。過濾除菌結束後，要打開濾器，檢查濾膜是否完整，如果濾膜破裂，需重新進行過濾除菌過程。立式微孔濾器可以選用不同的微孔濾柱體積，因為濾膜的折疊，膜面積顯著增大，液體處理量大，而且不容易發生堵塞現象。
3. 配備液體培養基時硫酸亞鐵為什麼要過濾除菌
硫酸亞鐵加熱過濾會分解。
FeSO4 =加熱= FeS + 2O2↑ 2. FeSO4 =加熱= FeO + SO2↑ 3. 2FeSO4 =加熱= Fe2O3 + SO2↑+ SO3↑
所以如果用加熱除菌的方法，那麼硫酸亞鐵就在培養基中起不到作用。因此採用過濾除菌的方法。用濾器把雜質和細菌清楚出去，保證無菌狀態，也沒有破壞硫酸亞鐵的成分。
硫酸亞鐵的實驗室製法：
1、可以用鐵粉與稀硫酸反應直接製得。Fe+H2SO4（稀）=H2↑+FeSO4
2、可以用硫酸銅溶液與鐵反應獲得，反應方程式為：CuSO4+Fe=FeSO4+Cu（此反應類型為置換反應）
4. 過濾法殺菌
過濾法殺菌
有些需要滅菌的材料不能受熱，例如許多維生素溶液。因此，許多液體可以用過濾法來滅菌。過濾法不是將微生物殺死，而是把它們排除出去。目前過濾除菌採用兩類器具，一類叫深層濾器，例如用燒結玻璃、不上釉的陶瓷顆粒或石棉壓成的濾板等：另一類是濾膜。深層濾器已經使用了100年以上，現在有逐漸被濾膜取代的趨勢，但因為大量沉澱物容易堵塞濾膜，所以一般先用深層濾器除去大的顆粒。
濾膜一般由醋酸纖維素、硝酸纖維素、多聚碳酸酯、聚偏氟乙烯等合成纖維材料製成。濾膜的孔徑一般為0.2微米，它可以濾除絕大多數微生物的營養細胞。過濾法的缺點是不能濾除病毒。
我們來看一下濾膜滅菌是如何工作的。如左圖所示，在一個漏斗形容器上部放置數片濾膜。右圖是整個過濾系統。待除菌的液體裝在三角瓶中（1），用蠕動泵（2）將液體抽到過濾器（3）內，濾過的液體進入事先滅菌的瓶子中。
固定濾膜的裝置
留存在尼龍和多聚碳酸酯濾膜上的桿菌
連接在注射器上的過濾除菌裝置
如果是滅菌少量液體，可以採用一種簡單的的濾器。
過濾法用途廣泛，除在飲料、葯物生產中使用外，空氣也常常用過濾法除菌。我們通常做微生物學實驗時滅過菌的容器一般用棉花塞堵在出口處，實際上就是過濾除去空氣中的微生物，使進入容器的空氣中沒有微生物污染。微生物學實驗室使用的超凈台也是用過濾法除菌。