A. 超濾離心管怎麼使用
蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管(MWCO10kD)。也有其它型號的、不同體積大小和超濾管可選,視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管,主要考慮MWCO和濃縮體積,通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為准。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時,【取50ul國產Bradford溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mg/ml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測】,繼續加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱,導致堵管。若發生沉澱,要確定沉澱的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,後者的方法是換不同的Buffer,直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,輕輕加入新的Buffer(經0.22um超濾膜超濾),再濃縮至1ml左右,連續三次,最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定,一般不多於500ul,也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,三次達到1000倍以上,基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作,用黃槍頭(200ul)取,輕輕順著邊緣插入槍頭,輕輕吹打、混勻蛋白液,注意不要碰到超濾膜,然後吸取濃縮液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取,否則難度太大,有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中,沒過超濾膜,防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管,重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水,用milliQ水輕輕潤洗幾次,【若管底有可見的蛋白沉澱,可以先加入水,然後用槍頭吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉澱懸起,然後倒掉,不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液,室溫放置20min,期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液,將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時,不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗,內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯,加至接近滿的MilliQ水,50ml管也加滿MilliQ水,將管芯慢慢放入50ml
離心管,排出部分水,然後蓋上蓋子,放4度保存,直到下次使用。一般來說,按照上述步驟和注意事項,每根管用三四年不會壞。
B. 超濾離心管怎麼使用
蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管(MWCO10kD)。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選,視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管,主要考慮MWCO和濃縮體積,通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為准。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時,【取50ul國產Bradford溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mg/ml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測】,繼續加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱,導致堵管。若發生沉澱,要確定沉澱的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,後者的方法是換不同的Buffer,直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,輕輕加入新的Buffer(經0.22um超濾膜超濾),再濃縮至1ml左右,連續三次,最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定,一般不多於500ul,也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,三次達到1000倍以上,基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作,用黃槍頭(200ul)取,輕輕順著邊緣插入槍頭,輕輕吹打、混勻蛋白液,注意不要碰到超濾膜,然後吸取濃縮液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取,否則難度太大,有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中,沒過超濾膜,防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管,重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水,用milliQ水輕輕潤洗幾次,【若管底有可見的蛋白沉澱,可以先加入水,然後用槍頭吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉澱懸起,然後倒掉,不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液,室溫放置20min,期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液,將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時,不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗,內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯,加至接近滿的MilliQ水,50ml管也加滿MilliQ水,將管芯慢慢放入50ml
離心管,排出部分水,然後蓋上蓋子,放4度保存,直到下次使用。一般來說,按照上述步驟和注意事項,每根管用三四年不會壞。
C. 超濾離心管可以滅菌嗎
1、可以用70%的酒精消毒
2、如果是高溫高壓滅菌,要注意滅完菌後,管裡面的超濾膜是處於濕潤的狀態,所以需要立即使用,因為膜濕潤後就不能幹
D. 超濾膜多久更換一次 如何判斷超濾膜壽命到期
超濾膜是飲用水處理中應用廣泛的高分子分離膜,能夠有效過濾懸浮廢物、膠狀體、藻類、病菌以及其他水生病毒。超濾膜使用壽命長,不需要經常更換濾芯,減少消費。一般情況下,如果進水水質達標,超濾膜3-5年的使用年限是沒有問題的。但是具體能用多久,還需要根據實際情況確定。
超濾膜沒有一個固定的更換時間,需要根據用戶使用的膜元件質量、進水條件、使用是否規范來進行判斷。通常超濾膜在使用3-5年就需要進行更換,如果沒有按照使用說明進行使用,可能用1年就需要更換,而有的對超濾膜維護、保養非常好的甚至能夠使用5年以上,其實能夠按照膜元件的使用說明進行使用,滿足膜元件的使用要求,基本上都能夠使用3年以上,如果出現超濾膜更換頻繁的情況,應檢查自己的設備是否滿足使用要求,如果能夠滿足那可能是超濾膜質量問題。
為了能夠有效的延長超濾膜的使用壽命,就要做好日常維護工作,比如定期的清洗,如果沒有清洗,就會影響超濾膜的使用性能與壽命,定時的清洗也能保持超濾膜具有良好的通透性,清洗的方法一般會根據超濾膜的性質與處理料液的性質來決定,不過大多數情況下是用清水來清洗,然後依據情況不同採用不同的化學制劑來清洗。
另外,超濾膜使用完之後放置於保護液中從保存起來,目的是防止超濾膜脫水後產生收縮,使膜結構遭到破壞,透水量下降。
超濾膜的使用壽命主要取決於進水水質。一般情況下,如果進水水質達標,3-5年的使用年限是沒有問題的,但並不意味著可以達到使用年限,或者有可能超過使用年限。它能用多久,還需要根據實際情況確定。
1、產水量變小,在相同的操作條件下,超濾膜產水量比原膜少很多,可能是超濾膜堵塞。此時,可對超濾膜進行清洗。如果堵塞不嚴重,可通過清洗回收一定量的水。但是,如果清洗後情況不理想,則超濾膜的使用壽命已過,需要更換超濾膜。當超濾膜接近使用壽命時,應更換超濾膜,以避免出水交叉污染。
2、排水質量差,超濾膜過濾的原水中雜質和細菌過多,造成嚴重污染和水質惡化。超濾膜中雜質和細菌的長期積累也導致自來水的二次污染。因此,如果水質惡化,應考慮採用新的超濾膜。
3、按時間計算超濾膜使用壽命的80%,我們都知道理想和現實之間存在差距。事實上,在水污染嚴重的地方,超濾膜不能長時間使用。如果水質良好,使用壽命會延長。但不建議等待超濾膜過期,一般當使用壽命達到理想壽命的80%左右時,應更換新膜。
將超濾膜(濾芯)從超濾凈水設備上拆卸,然後再換上新的超濾膜。具體的更換方法如下:
1、拆卸超濾膜
(1)先將壓力容器上的進出水端、濃水端的管道卸掉,把與之連接的配件也拿掉。
(2)卸下壓力容器兩端的端蓋。
(3)推動超濾膜膜元件,方向是進水端至濃水端。
(4)當超濾膜膜元件從濃水端出現後,慢慢將其取出來。
(5)成功將超濾膜膜元件從濃水端取出後,把該支膜的和別的膜元件的連相接部件取下。
(6)如果只需要取出一支即視為拆卸結束,需要拆卸多支請反復進行以上操作,直到將需要更換的超濾膜都拆下來。
2、更換超濾膜
(1)將密封包裝的超濾膜膜組件打開並拿出。
(2)將超濾膜膜組件進行清洗,去除保護液和表面的污垢。
(3)將超濾膜膜組件放到架子上。
(4)保證超濾系統的管路沒有雜質和污垢,把超濾膜膜組件連上管路。
(5)通水測試更換效果。
E. 大家用過的超濾管怎麼保存
超濾膜組件的維護(四川禹華環保)要點:
一、短期停機的情況下:停機2-3天以內,請內在膜組件內部充水容的狀態下停機;如果達一周左右時,請注入濃度為50mg/L的次氯酸鈉溶液;
二、 長期停機的情況下:膜組件要先經過次氯酸鈉葯洗後,再注入濃度為1.5%的亞硫酸氫鈉溶液。
三、置於陰涼處,不能脫水存放;低於零度時要加甘油防凍;
F. 如何用蛋白濃縮管
選擇合適的超濾管,主要考慮MWCO和濃縮體積,最常見的是Ultra-15(10kD)。
通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書,注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同。
新買來的超濾是乾燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為准。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
(6)新買來的超濾管如何保存擴展閱讀:
超濾濃縮離心管,最新推出專利產品Hydrosart膜2K型,具有極低的蛋白吸附特性,高流速、高通量,是免疫球蛋白濃縮和脫鹽的理想用膜。
備有四種材質的超濾膜:聚醚碸、三醋酸纖維素、再生纖維素和Hydrosart,可根據不同要求靈活選用;兩種回收濃縮液的方法:既可用吸管直接吸取並回收,又可將離心管放入離心機反甩,將濃縮液甩入回收帽中,加蓋保存。這兩種方法都可使濃縮液達到近乎完全回收;
G. 凈水器超濾膜能使用多長時間
凈水器超濾膜的使用時間是和水質量有關系,合理的使用能夠延長凈水器超濾膜的使專用時間,一般清洗周屬期在2-3月,更換周期3-5年。
超濾膜過濾精度為0.01微米——0.1微米之間,他主要是用於濾除水中的細菌,經過過濾之後就是一般的礦物質水,一般一到兩年更換一次。
H. 中空纖維超濾膜的使用壽命
超濾膜使用年限一般是多少?超濾膜壽命保質3年,正常維護壽命能到5年甚至8年膜的,使用壽命與膜在使用過程中的清洗維護有很大的關系,如果在日常生產中清洗維護得好的話,膜可以一直保持很好的通量,從而提高了生產效率,且使用壽命自然也會有所延長,減短膜更換的頻率。