葯典中純化水微生物限度檢查

A. 2015版葯典和2010版葯典對微生物限度檢查的區別

2015版葯典對培養基系統、實驗方法、實驗環境規定等方面做出了重大修訂，方法內應用范圍增加了生物方法容；
還有一些細節的變化，例如陽性對照試驗，10版葯典採用金黃色葡萄桿菌，而2015版採用不同菌種；
總之2015版葯典是採用了先整合後優化、求大同存小異等整合原則。
我了解有限，以上僅供參考。

B. 2015版微生物限度檢查計數是指兩種培養基菌落數之和嗎

2015版葯典微生物學擬收載情況
檢查法
①無菌檢查法
②非無菌葯品微生物計數法
③非無菌葯品控制菌檢查法
④抑菌劑效力檢查法
⑤滅菌法
⑥生物指示劑抗性檢查法
⑦中葯飲片的微生物限度檢查法

標准
非無菌葯品微生物限度標准
指導原則
非無菌葯品微生物限度檢查指導原則
制劑通則中
制劑通則中有關制劑項下的無菌和微生物限度檢查要求的修訂

制劑通則中有關制劑項下的[無菌]和[微生物限度]檢查要求的修訂

(1)為保證用葯安全，眼用液體、半固體制劑仍應符合無菌檢查法的規定
(2)為保證用葯安全，對用於手術、創傷、燒傷的外用制劑如鼻用制劑、軟膏劑、乳膏劑、噴霧劑、氣霧劑、凝膠劑、散劑、塗劑、滴耳劑等仍應符合無菌檢查的規定。但在其通則無菌檢查項下增加：「除另有規定外」。給予有不按無菌檢查的原因
(3)在搽劑和酊劑通則項下的微生物限度檢查項下增加：「除另有規定外」 。給予有可能需要按無菌檢查的原因

品種正文中的無菌或微生物限度檢查及其標准要求

1、受熱不穩定、制劑不能進行最終滅菌的無菌工藝產品如：抗生素原料葯、抗生素粉針劑正文中無菌檢查的規定
2、經驗證後各論化品種檢查項下的：無菌…..或微生物限度……(有具體檢查的規定)
3、葯用敷料的無菌或微生物限度要求及標准
4、純化水、注射用水的微生物限度要求及標准
2015年版葯典的純化水、注射用水[微生物限度]價差方法在參考歐、美葯典只要用水微生物檢查要求的基礎上，由浙江所立課題考察、比對，在所用培養基和方法上將有較大的修訂與USP35版、EP7.0版、JP16版比較，2015年版中國葯典微生物學檢驗體系規劃收載的項目和內容已基本趨向一致，將使我國葯典的微生物學檢驗成為一個比較完備的標准體系，其意義在於：
1）全面與國際葯典標准接軌；
2）從對終產品的檢驗向過程式控制制轉變。

2015年版微生物學檢驗中的重大修訂及意義

1、實驗環境的重大修訂
①無菌檢查環境潔凈度規定
②微生物限度檢查環境潔凈度規定

2、培養系統的重大修訂
①無菌檢查中培養基的修訂
②微生物計數法中培養基的修訂
③控制菌檢查法中培養基的修訂
④控制菌檢查法中培養基的修訂
⑤抑菌效力測定法中培養基的修訂

3、對一、二、三部微生物學附錄的整合、修訂
與USP35版、EP7.0版、JP16版比較，2015年版中國葯典微生物學檢驗體系規劃收載的項目和內容已基本趨向一致，將使我國葯典的微生物學檢驗成為一個比較完備的標准體系，其意義在於：

1）全面與國際葯典標准接軌；

2）從對終產品的檢驗向過程式控制制轉變。

實驗環境的重大修訂

GMP2010年版對潔凈度的規定及確認標准
潔凈度級別
懸浮粒子最大允許數/立方米
浮游菌
cfu/m3
沉降菌（f）
cfu /4小時(2)
表面微生物
靜態
動態
接觸（f）
cfu /碟
5指手套
cfu /手套
≥0.5μm
≥5.0μm(2)
≥0.5μm
≥5.0μm
A級
3520
20
3520
20
1
1
1
1
B級
3520
29
352000
2900
10
5
5
5
C級
352000
2900
3520000
29000
100
50
25
－
D級
3520000
29000
不作規定
不作規定
200
100
50
－

按實驗性質修訂微生物學檢驗環境潔凈度

2010年版 2015年版
無菌檢查： 無菌檢查：
應在潔凈度10000級背景下的局部100級單向流空氣區域內或隔離系統中進行。
應在潔凈度B級背景下的局部A級單向流空氣區域內或隔離系統中進行。
微生物限度檢查： 微生物限度檢查：
應在潔凈度10000級背景下的局部100級單向流空氣區域內進行。 應在受控潔凈環境下（不低於D級）的局部不低於B級單向流空氣區域內進行。

培養基系統的重大修訂
修訂依據：
通過科研課題的建立及大量實驗，以國際品牌培養基為對照，考察了中國葯典微生物限度檢查法、無菌檢查法中所用國產培養基與USP/BP/JP中所規定的培養基的粗軍生長能力比較，得出大量的實驗數據，並經過可靠的統計分析名為整體微生物檢驗培養基的修訂提供了有利的技術支持。

修訂意義：
(1)糾正了我國在微生物檢驗系統中長期存在的對微生物分了培養的概念，提高污染微生物的檢查可能。
（2）與先進國家葯典所用培養基一致，為實現結果夫人打下重要基礎。

對一、二、三部微生物學附錄的整合、修訂
需進行整合、修訂的微生物學檢驗記錄：

①無菌檢查法
②微生物檢查法
③指導原則
微生物限度檢查法應用指導原則
葯品微生物實驗室規范指導原則

中國葯典2015年版微生物限度檢查法增、修訂

C. 問問大家,美國葯典中關於純化水和注射用水質量標准中是否有有關微生物限度檢測

現把國內、歐盟、FDA或日本葯典的情況說下：
1、無菌檢查GMP、歐盟沒有要求，FDA要求只有滅菌回純化水才需要無菌檢查答，貯罐
中的水只有微生物限度檢查
2、總有機碳 （TOC） 國內目前檢查限度還是和易氧化物選一項TOC和其他都一樣≤0.5mg/L (≤500 ppb 碳 )
3、細菌內毒菌 只有歐盟要求/ ≤0.25EU/ml（生產滲析液時）
4、微生物糾偏限度都是一樣 ≤100CFU/ml
希望能給你幫助！

D. 中國葯典微生物限度檢查法的概述

《中國葯典來》2010版一部、二部、三部源附錄的微生物限度檢查法內容無差別，故此文方法，以《中國葯典》2010版二部附錄ⅪJ為例。
微生物限度檢查應在環境潔凈度10000 級下的局部潔凈度100 級的單向流空氣區域內進行。檢驗全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止再污染。單向流空氣區域、工作檯面及環境應定期按《醫葯工業潔凈室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現行國家標准進行潔凈度驗證。
供試品檢查時，如果使用了表面活性劑、中和劑或滅活劑，應證明其有效性及對微生物無毒性。
除另有規定外，本檢查法中細菌及控制菌培養溫度為30℃～35℃；黴菌、酵母菌培養溫度為23℃～28℃。
檢驗結果以1g、1ml、10g、10ml、10c㎡ 為單位報告，特殊品種可以最小包裝單位報告。
註：《醫葯工業潔凈室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現行國家標准分為GB/T16292-2010 醫葯工業潔凈室(區)懸浮粒子的測試方法GB/T16293-2010 醫葯工業潔凈室(區)浮游菌的測試方法GB/T16294-2010 醫葯工業潔凈室(區)沉降菌的測試方法

E. 中國葯典微生物限度檢查法的微生物限度標准

非無菌葯品的微生物限度標準是基於葯品的給葯途徑及對患者健康潛在的危害而制訂的。葯品的生產、貯存、銷售過程中的檢驗，原料及輔料的檢驗，新葯標准制訂，進口葯品標准復核，考察葯品質量及仲裁等，除另有規定外，其微生物限度均以本標准為依據。 細菌數每1g不得過l000cfu。每lml不得過100cfu。
黴菌和酵母菌數每lg或lml不得過100cfu。
大腸埃希菌每1g或lml不得檢出. 3.1用於手術、燒傷及嚴重創傷的局部給葯制劑應符合無菌檢查法規定。
3.2耳、鼻及呼吸道吸入給葯制劑
細菌數每1g、lml或l0cm²，不得過100cfu。
黴菌和酵母菌數每1g、lml或l0cm²，不得過10cfu。
金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌每1g、lml或l0cm²不得檢出。
大腸埃希菌鼻及呼吸道給葯的制劑，每1g、lml或l0cm²，不得檢出。
3.3陰道、尿道給葯制劑
細菌數每1g、lml或l0cm²，不得過100cfu。
黴菌數和酵母菌數每1g、lml或l0cm²應小於10cfu。
金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌每1g、lml或l0cm²，不得檢出。
3 .4直腸給葯制劑
細菌數每1g不得過l000cfu。每lml不得過100cfu。
黴菌和酵母菌數每1g或lml不得過100cfu。
金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌每lg或lml不得檢出。
3.5其他局部給葯制劑
細菌數每1g、lml或l0cm²不得過100cfu。
黴菌和酵母菌數每1g、lml或l0cm²不得過100cfu。
金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌每1g、lml或l0cm²不得檢出。 參照相應制劑的微生物限度標准執行。
注1：本檢查法中白色念珠菌檢查所描述該菌在念珠菌顯色培養基上的菌落特徵，是指該菌在法國科瑪嘉公司提供的科瑪嘉念珠菌顯色培養基上生長的菌落特徵。給出這一信息是為了方便本方法的使用者，並不表示對該公司產品的認可．若其他等效產品具有相同的效果，那麼也可使用其他等效的產品。
以上文中方法中提到的「無菌檢查法（附錄XII A）」為《中國葯典》2010版二部附錄XII A無菌檢查法。

F. 2015中國葯典對無菌檢查與微生物限度檢查的環境分別有什麼要求

兩個都是在背景10000級潔凈度下，局部100級的單層空氣氣流下進行的

G. 按葯典做純化水微生物限度檢查，使用抽濾法的話，微孔濾膜要選擇水系膜還是有機膜為什麼

水系 因為你的溶液是水

H. 微生物限度檢查在中國葯典2015版附錄多少

《中國葯典》2015年版微生物限度檢查法修訂後將分為三個附錄：

1、非無菌葯品微生物限度檢查：微生物計數法

2、非無菌葯品微生物限度檢查：控制菌檢查法

3、非無菌葯品微生物限度標准。

修訂後的微生物限度檢查法暫不收載於《中國葯典》2010年版第二增補本而將直接收載《中國葯典》2015年版，在正式實施前的公示期內將進一步完善以保證方法的適應性和可操作性。

非無菌葯品微生物限度標準的整合、修訂

1、葯典委員會微生物專業委員會的修訂思路

2、修訂後限度標準的總體結構

3、修訂後限度標准各項具體規定

葯典委員會微生物專業委員會的修訂思路

修訂思路

(1) 2010版中國葯典一、二、三部微生物限度本中項目的對比、整合

整合：採用一部的項目作為合並後限度標準的基礎

(2)與美、歐、日葯典比較，修訂中國葯典的微生物限度標准

1、參照歐、美、日葯典一致的表示形式，採用較清晰直觀的表格形式列出各類葯品和原敷料的微生物限度標准

2、菌數計數結果以10n表示；

3、以「需氧菌總數」取代「細菌數」，以「耐膽鹽革蘭陰性菌」取代「大腸菌群」

2、修訂後限度標準的總體結構（共9項、4個表）

1、制劑通則、品種項下要求無菌的制劑及標示無菌的制劑和原輔料應符合無菌檢查法的規定

2、用於手術、燒傷或嚴重創傷的局部給葯制劑應符合無菌檢查法的規定

3、非無菌化學葯品及生物製品制劑的微生物限度標准

4、非無菌不含葯材原粉的中葯制劑微生物限度標准

5、非無菌含葯材原粉的中葯制劑微生物限度標准

6、非無菌的葯用原料及輔料微生物限度標准

7、中葯提取物及中葯飲片的微生物限度標准

8、有兼用途徑的制劑應符合各給葯途徑的標准

9、霉變、長蟎者以不合格論

2015版微生物限度標準的特點及展望

特點：

1、很好地分析、匯總了現一、二、三部的限度標準的項目

能考慮和前向性地制訂符合我國傳統中葯特點的微生物限度標准

2、化學葯、生物製品的限度標准（菌數及控制菌）已與美、歐、日葯典的限度標准一致或更嚴格

3、新設立的中葯提取物和中葯飲片的微生物限度標准（僅規定了控制菌），菌數計數限度等待調研數據

展望：

1、結合GMP管理的步伐，進一步合理制定含葯材原粉的中葯制劑的微生物限度標准

2、在開展課題積累數據、區分用法的基數上完善中葯提取物、中葯飲片、草葯的微生物限度標准

I. 中國葯典微生物限度檢查法的稀釋液和培養基制備方法

稀釋液配製後，應採用驗證合格的滅菌程序滅菌。
1 .pH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液
照無菌檢查法（附錄XII A）制備。
2.pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液、pH7.6無菌磷酸鹽緩沖液
按緩沖液（二部附錄XV D）配製後，過濾，分裝，滅菌。
如需要，可在上述稀釋液滅菌前或滅菌後加入表面活性劑或中和劑等。
3.0.9%無菌氯化鈉溶液
取氯化鈉9.0g，加水溶解使成1000ml，過濾，分裝，滅菌。 培養基可按以下處方制備，也可使用按該處方生產的符合要求的脫水培養基。配製後，應採用驗證合格的滅菌程序滅菌。
1.營養瓊脂培養基、營養肉湯培養基、硫乙醇酸鹽流體培養基、改良馬丁培養基及改良馬丁瓊脂培養基
照無菌檢查法（附錄XII A）制備。
2.玫瑰紅鈉瓊脂培養基
腖 5.0g
玫瑰紅鈉 0.0133g
葡萄糖 10.0g
瓊脂 14.0g
磷酸二氫鉀 1.0g
水 1000ml
硫酸鎂 0.5g
除葡萄糖、玫瑰紅鈉外，取上述成分，混合，微溫溶解，濾過，加入葡萄糖、玫瑰紅鈉，分裝．滅菌。
3.酵母浸出粉腖葡萄糖瓊脂培養基（YPD )
腖 10.0g
瓊脂 14.0g
酵母浸出粉 5.0g
水 1000ml
葡萄糖 20.0g
除葡萄糖外，取上述成分．混合，微溫溶解，濾過，加人葡萄糖，分裝．滅菌。
4．膽鹽乳糖培養基(BL )腖20.0g
磷酸二氫鉀 1.3g
乳糖 5.0g
牛膽鹽 2.0g
氯化鈉 5.0g
（或去氧膽酸鈉） ( 0.5g)
磷酸氫二鉀 4.0g
水 1000ml
除乳糖、牛膽鹽或去氧膽酸鈉外，取上述成分，混合，微溫溶解，調節pH值使滅菌後為7.4 ±0.2，煮沸，濾清，加人乳糖、牛膽鹽或去氧膽酸鈉，分裝，滅菌。
5.乳糖膽鹽發酵培養基
腖 20.0g
0.04%溴甲酚紫指示液 25ml
乳糖 10.0g
水 l000ml
牛膽鹽 5.0g
除0.04%溴甲酚紫指示液外，取上述成分，混合，微溫溶解，調節pH值使滅菌後為7.4 ±0.2，加人0.04%溴甲酚紫指示液，根據要求的用量分裝於含倒管的試管中。滅菌。所用倒管的規格應保證產氣結果的觀察。
6．曙紅亞甲藍瓊脂培養基（EMB )
營養瓊脂培養基 100ml
曙紅鈉指示液 2ml
20%乳糖溶液 5ml
亞甲藍指示液 1.3～1.6ml
取營養瓊脂培養基，加熱溶化後，冷至60℃，按無菌操作加入滅菌的其他3種溶液，搖勻，傾注平皿。
7.麥康凱瓊脂培養基（MacC）腖20.0g
1%中性紅指示液 3ml
乳糖 10.0g
瓊脂 14.0g
牛膽鹽 5.0g
水 l000ml
氯化鈉 5.0g
除乳糖、1%中性紅指示液、牛膽鹽及瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調節pH值使滅菌後為7.2 ±0.2，加入瓊脂，加熱溶化後，再加入其餘各成分，搖勻，分裝，滅菌，冷至約60℃，傾注平皿。
8.4 -甲基傘形酮葡糖昔酸（4-methylumbelliferyl-β-D-glucuionide，MUG）培養基
腖 10.0g
磷酸二氫鉀（無水） 0.9g
硫酸錳 0.5mg
磷酸氫二鈉（無水） 6.2g
硫酸鋅 0.5mg
亞硫酸鈉 40mg
硫酸鎂 0.1g
去氧膽酸鈉 1.0g
氯化鈉 5.0g
MUG 75mg
氯化鈣 50mg
水 l000ml
除MUG外，取上述成分，混合，微溫溶解，調節pH值使滅菌後為7.3±0.1，加人MUG，溶解，每管分裝5ml，滅菌。
9.三糖鐵瓊脂培養基（TSI )
腖 20.0g
牛肉浸出粉 5.0g
乳糖 10.0g
蔗糖 10.0g
葡萄糖 1.0g
氯化鈉 5.0g
硫酸亞鐵 0.2g
硫代硫酸鈉 0.2g
0.2%酚磺酞指示液 12.5ml
瓊脂 12.0g
水 1000ml
除三種糖、0.2%酚磺酞指示液、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調節pH值使滅菌後為7.3±0.1,加入瓊脂，加熱溶化後，再加入其餘各成分，搖勻，分裝，滅菌，製成高底層（2～75px）短斜面。
10．四硫磺酸鈉亮綠培養基（TTB）
腖 5.0g
硫代硫酸鈉 30.0g
牛膽鹽 1.0g
水 l000ml
碳酸鈣 10.0g
取上述成分，混合，微溫溶解，滅菌。
臨用前，取上述培養基，每10ml加入碘試液0.2ml和亮綠試液0.lml，混勻。
11.沙門、志賀菌屬瓊脂培養基（SS）
腖 5.0g
硫代硫酸鈉 8.5g
牛肉浸出粉 5.0g
中性紅指示液 2.5ml
乳糖 10.0g
亮綠試液 0.33ml
牛膽鹽 8.5g
瓊脂 16.0g
枸櫞酸鈉 8.5g
水 1000ml
枸櫞酸鐵銨 1.0g
除乳糖、中性紅指示液、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調節pH值使滅菌後為7.2±0.1,濾過，加入瓊脂，加熱溶化後，再加入其餘各成分，搖勻，滅菌，冷至60℃，傾注平皿。
12．膽鹽硫乳瓊脂培養基（DHL )
腖 20.0g
枸櫞酸鈉 1.0g
牛肉浸出粉 3.0g
枸櫞酸鐵銨 1.0g
乳糖 10.0g
中性紅指示液 3ml
蔗糖 10.0g
瓊脂 16.0g
去氧膽酸鈉 1.0g
水 l000ml
硫代硫酸鈉 2.3g
除糖、指示液及瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調節pH值使滅菌後為7.2±0.1,加入瓊脂，加熱溶化後，再加人其餘成分，搖勻，冷至60 ℃，傾注平皿。
13.溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基
腖 10.0g
溴化十六烷基三甲銨 0.3g
牛肉浸出粉 3.0g
瓊脂 14.0g
氯化鈉 5.0g
水 l000ml
除瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調節pH值使滅菌後為7.5±0.1，加入瓊脂，加熱溶化後，分裝，滅菌，冷至60 ℃，傾注平皿。
14．亞碲酸鹽肉湯培養基
臨用前，取滅菌的營養肉湯培養基，每100ml中加人新配製的1%亞諦酸鈉（鉀）試液0.2ml，混勻，即得。
15．卵黃氯化鈉瓊脂培養基
腖 6.0g
10%氯化鈉卵黃液 100ml
牛肉浸出粉 1.8g
瓊脂 14.0g
氯化鈉 30.0g
水 650ml
除10 %氯化鈉卵黃液外，取上述成分，混合，微溫溶解，調節pH值使滅菌後為7.6土0 .1，滅菌，待冷至約60 ℃，以無菌操作加入10%氯化鈉卵黃液，充分振搖，傾注平皿。
10%氯化鈉卵黃液的制備取新鮮雞蛋1個，以無菌操作取出卵黃，放入10%無菌氯化鈉溶液100ml中，充分振搖，即得。
16.甘露醇氯化鈉瓊脂培養基
腖 10.0g
酚磺酞指示液 2.5ml
牛肉浸出粉 1.0g
瓊脂 14.0g
甘露醇 10.0g
水 l000ml
氯化鈉 75.0g
除甘露醇、酚磺酞指示液及瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調節州值使滅菌後為7.4 ±0.2，加入瓊脂，加熱溶化後，濾過，分裝，滅菌，冷至60 ℃，傾注平皿。
17．乳糖發酵培養基
腖 20.0g
乳糖 10.0g
0.04%溴甲酚紫指示液 25ml
水 l000ml
除0.04%溴甲酚紫指示液外，取上述成分，混合，微溫溶解，調節pH值使滅菌後為7.2±0.2，加入指示液，分裝於含倒管的小試管中，每管3ml．滅菌。
18．綠膿菌素（Pyocyanin）測定用培養基（PDP瓊脂培養基）
腖 20.0g
甘油 l0ml
氯化鎂（無水） 1.4g
瓊脂 14.0g
硫酸鉀（無水） 10.0g
水 1000ml
取腖、氯化鎂、硫酸鉀和水混合，微溫溶解，調節pH值使滅菌後為7.3±0.1，加入甘油及瓊脂，加熱溶化，混勻，分裝於試管，滅菌，置成斜面。
19.梭菌增菌培養基
牛肉浸出粉 10.0g
鹽酸半胱氨酸 0.5g
腖 10.0g
氯化鈉 5.0g
酵母浸出粉 3.0g
醋酸鈉 3.0g
可溶性澱粉 1.0g
瓊脂 0.5g
葡萄糖 5.0g
水 1000ml
取上述成分，混合，加熱煮沸使溶解，調節pH值使滅菌後為6.8士0.2，加熱溶化，濾過，分裝，滅菌。
20.哥倫比亞瓊脂培養基
酪蛋白胰酶消化物 10.0g
肉胃酶消化物 5.0g
心胰酶消化物 3.0g
酵母浸出粉 5.0g
玉米澱粉 1.0g
氯化鈉 5.0g
瓊脂 15.0g
水 1000ml
除瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調節pH值使滅菌後為7.3士0.2，加入瓊脂，加熱溶化，濾過，分裝，滅菌，冷至45～50 ℃，加人相當於20mg慶大黴素的無菌硫酸慶大黴素，混勻，傾注平皿。
21．沙氏葡萄糖液體培養基
腖 10g
葡萄糖 40g
水 1000ml
除葡萄糖外，取上述成分，混合，微溫溶解，濾過。加人葡萄糖，溶解，分裝，滅菌。
22．沙氏葡萄糖瓊脂培養基
腖 10g
水 1000ml
葡萄糖 40g
瓊脂 14g
除瓊脂和葡萄糖外，混合，微溫溶解，濾過。加入瓊脂和葡萄糖，溶解，分裝，滅菌。
23.（科瑪嘉）念珠菌顯色培養基（注1）
腖 10.2g
瓊脂 15g
氫罌素 0.5g
滅菌水 1000ml
色素 22.0g
除瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調節pH值至6.3士0.2。濾過，加入瓊脂，加熱煮沸，不斷攪拌至瓊脂完全溶解，傾注平皿。
24.1%聚山梨酯80-玉米瓊脂培養基
黃色玉米粉 40g
瓊脂 10～15g
聚山梨酯80 10ml
水 1000ml
取玉米粉、聚山梨酯80及蒸餾水500ml，混合，65℃加熱30分鍾，混勻，用紗布濾過，補足原水量。取瓊脂，水500ml，混合，加熱溶解。將以上兩種溶液混合，搖勻，分裝，滅菌。