『壹』 急求解答:氣相色譜(FID)溶劑峰峰高很低
恢復一根已受污染的高效液相色譜柱的關鍵在於了解污染物的性質,然後尋找一種合適的溶劑將其去除。如果污染物是由於一些強保留物質的多次進樣積聚而產生,一個除去這些污染物的簡單的沖洗過程往往會使色譜柱恢復性能。有時,在經過了等度操作之後,用20個柱體積的90%~100%的溶劑B(二元反相體系中較強的溶劑)將會除去這些污染物。(表二列出了各種型號的高效液相色譜柱的柱體積,所以讀者可以很輕易地確定色譜柱的沖洗體積。)例如,脂質類的化合物可以使用一些非水性的溶劑來去除,如甲醇、乙睛、四氫呋喃。如果你正在使用含水的緩沖流動相,則千萬不能將流動相直接跳到強溶劑中。將流動相猛然間改到高比例有機相的舉動會導致高效液相色譜流動體系的緩沖沉澱,這將會造成更加嚴重的問題,如使篩板堵塞,介面管路堵塞,泵的密封墊失效,刮傷泵的柱塞桿,使進樣閥轉子失靈。相反,應使用非緩沖的流動相來沖洗色譜柱(就是用水來代替緩沖液)。在經過了5~10個柱體積的非緩沖溶劑沖洗之後才能允許較強的溶劑流經色譜柱。
有時,流動相中的強溶劑組分是不能充分去除色譜柱中的污染物的。必須另外使用一種更強的溶劑或一系列的溶劑才能清洗色譜柱。假如污染物是非生物性的,則使用者可以通過一種或更多的其他有機溶劑來去除不需要的化合物。可以使用許多種的溶劑和溶劑組合方式。訪問一些色譜柱生產廠商的網站可以瀏覽到一些推薦使用的溶劑系統。
一般來說,所有的清洗都會遵循一個相似的模式。清洗過程中的溶劑濃度是增加的,通常最後都是使用一些非極性的溶劑(例如:乙酸乙酯,乃至碳氫化合物),它將會有助於溶解一些脂質類和油類化合物。重要的是要確保這一系列的每個溶劑都能與所使用的下一個溶劑互溶。一個清洗循環的結論是,在回到初始的流動相系統之前,可通過中間的可互溶的溶劑反向走。例如,異丙醇就是這個中間步驟的一個極好的溶劑,因為它能夠同有機溶劑互溶,如正己烷和二氯甲烷,而且同樣也能夠和水相溶劑互溶。因為異丙醇有很大的粘度,所以必須確保清洗時流速不能太高,否則會引起泵的壓力過載。同樣,如果使用了紫外檢測器,則需避免使用在紫外光譜區有吸收的溶劑,因為這樣會需要大量的清洗溶劑才能去除所有吸收的溶劑以得到一個穩定的基線。對於典型的鍵合硅色譜柱和無緩沖液的流動相的一個推薦使用的清洗系統就是:
l 100%甲醇;
l 100%乙睛;
l 75%乙睛——25%異丙醇;
l 100%異丙醇;
l 100%二氯甲烷;
l 100%正己烷;
當使用了二氯甲烷或正己烷作為沖洗溶劑後,由於溶劑的不互溶性,需要先用異丙醇沖洗色譜柱,而後才能使用含水的流動相。沖洗色譜柱的清洗溶劑的體積最小為柱體積的十倍。對於一根250mm×4.6mm的色譜柱,分析者可以使用經典的1~2mL/min的高效液相色譜流量。為了要回到原來的流動相,色譜工作者可以跳過顛倒使用該系列的清洗溶劑。推薦使用異丙醇為中間的清洗溶劑,然後用不含緩沖液的流動相沖洗,最後再用最初使用的流動相進行沖洗。四氫呋喃是另一個使用廣泛的溶劑,它可以被用來清洗受污染的色譜柱。如果使用者懷疑色譜柱受到了比較嚴重的污染,則可以用二甲亞碸或二甲基甲醯胺與水以50:50的比例,以小於0.5mL/min的流速進行清洗。成功的反向液相色譜柱的再生需要花費相當多的時間,使用溶劑進行沖洗可以設置梯度程序來進行通宵操作。*
在清洗過程中產生了是否應該將色譜柱顛倒過來沖洗的問題。因為大部分的強保留的污染物都會留在色譜柱的前端,將色譜柱顛倒過來清洗會減少已被溶解的污染物流出色譜柱的遷移距離。就填料層的穩定性而言,大部分的現代高效液相色譜柱都是用比普通操作壓要高得多的壓力裝填的;因此,色譜柱的填料層應該不會受到反向的流速的干擾。然而,如果色譜柱頂端的篩板的空隙要比底部的來得大,這種反向的方式則是有害的。比如說,如果底部篩板的空隙為2µm,則足夠容納裝填有平均填料粒徑為5µm的色譜柱。(含有粒徑5±2µm的尺寸分布)。然而生產商往往在色譜柱的頂端安裝空隙度比較大的篩板,以防止其被樣品或流動相顆粒所堵塞。如果這種篩板的空隙度要比粒徑大小分布的最小微粒大,部分填料會經篩板而流出色譜柱,這樣就會產生中空。如果色譜柱上有一個箭頭來提醒色譜柱的流向,我覺得應該在反向使用色譜柱之前參考說明使用書,瀏覽生產商的網站,或與技術支持組進行商討,以確定這是否是一個安全的舉動。無論你是否將色譜柱反向使用,最好要將色譜柱同高效液相色譜檢測器斷開,使污染物或者顆粒留在篩板上而不流經檢測池,因為這些物質會污染檢測池。
清洗污染的反相色譜柱的頻率依懶於有多少不明物質被注射到柱子中,因為反相色譜柱有時在解析度損失和外來物質的洗脫前可以忍受大量的污染物, 使用者往往等到他們觀察到一些異常現象才對柱子進行清洗。然而,長時間累積的污染物會使色譜柱的清洗工作變得更難。正因為如此,如果你知道自己的色譜柱很容易受到臟的樣品基體的污染時,我建議定期清洗你的色譜柱。清洗的次數越多,清洗條件也就越簡單。
反相硅膠基質色譜柱中殘留蛋白質的清洗
如果一些如血漿、血清的生物物質留在了反相液相色譜柱上,色譜工作者必須使用一些不同的清洗程序。在大部分情況下,一些比較純的有機試劑如乙睛或甲醇是不能溶解肽和蛋白質的,所以它們不能有效清洗反相液相色譜柱。然而加入了緩沖液、酸或者一些離子對試劑的混合有機溶劑能夠有效清洗這些物質。起初,可以嘗試含比較高濃度的溶劑B的流動相來沖洗色譜柱。
Freiser和他的同事(4)發現來回反復地梯度洗脫,使用三氟乙酸的水溶液和三氟乙酸—正丁醇可以使污染的反相液相色譜柱再生。Bhadway和Day(5)建議進樣100µL的三氟乙醇到250mm×4.6mm色譜柱可以達到清洗的目的。如果這些方案都失敗了的話,推薦使用Cunico和他的同事們(6)的強洗脫液和溶解性的試劑(見表三)。然而,在用這些試劑沖洗色譜柱之前,應該參考色譜柱的手冊,或和生產商進行商議,以確保其不會破壞色譜柱的填料。硅鍵合色譜柱的填料往往能夠與這些試劑共存,而聚合物色譜柱可能會因為與特定溶劑結合而使填料產生膨脹或收縮,從而影響到色譜柱的性能。
表三 用於HPLC反相色譜柱蛋白質物質除去的清洗溶劑
溶劑 組成
乙酸 1%的水溶液
三氟乙酸 1%的水溶液
0.1%三氟乙酸-異丙醇 40:60(V:V)(粘稠的,通常降低流速)
TEA-異丙醇 40:60(V:V)(在三乙胺混合前用0.25N的磷酸調節pH到2.5)
尿素或胍的水溶液 5-8M(調節pH到6-8)
NaCl,Na3PO4,Na2SO4水溶液 0.5-1.0M (Na3PO4 pH 7.0)
DMSO-水 或 DMF-水 50:50(V:V)
來自參考文獻6。
如果使用了早期的一系列溶劑,則必須確保表三中的溶劑與這個系列中的溶劑都是互溶的。異丙醇是一個良好的中間沖洗溶劑。在體系中的清洗體積最少為20個柱體積。由於一些溶劑清洗系統具有一定的粘滯性,所以必須調整沖洗流速以避免產生超壓。在清洗完一根含有胍和尿素的色譜柱後,需要用至少40~50柱體積的色譜級的水進行沖洗。
對於反相高效液相色譜柱來說使用一些如十二烷基磺酸鈉(SDS)和Triton的清洗劑來清洗是不妥的,因為這些化合物會強烈地吸附在硅膠基質的表面而難以去除。這些試劑會影響填料表層,改變填料的性質。然而,分離小組的研究發現,肽合成過程中保護基團和凈化劑產物對柱子的污染,可以通過在流動相中注射500µL的1%SDS溶液以1mL/min的流速進行沖洗(7)。如果接下來使用含0.1%(V/V)三氟乙酸的5%~95%乙睛的梯度,在開始的條件下進行平衡,多肽的分離效果則可恢復。
『貳』 氣相色譜雜峰的問題。
這個雜峰挺討厭,可以確定,你已經進行了必要的努力。
建議你再對下面幾點處理一下:
1,進樣口。再提進樣口,是因為絕大多數的雜峰情況都出現在進樣口和色譜柱。所以再提一下,進樣口溫度一般不改變,相當於在始終老化,但如果進樣口太臟的話,靠260度還是不行的,把襯管還有玻璃毛都換成新的。
2,把螺帽擰下來,清理裡面的殘留,用溶劑好好清理一下。
3,色譜柱如果污染的話,光用老化是不行的,必要時要清洗,但這種污染機率不太大,你可以最後再做。
4,分流臟了。這個可能在你的敘述中可能性是最大的,建議直接把分流管給換了,用不著清洗了,反正成本也低,截取一段銅管換上就行了。
總結,根據你的敘述,最有可能是襯管(玻璃毛)臟了,其次是分流臟了。這兩種可能性最大。
如果以上兩點確定沒問題了,那就應該是色譜柱問題,我覺得和檢測器的關系不大。
『叄』 安捷倫氣相色譜只出溶劑峰不出產品峰是怎麼回事
這個還是需要你說得詳細點才能更針對的回答你的問題,
從你的標題來看,我分析有以下幾種可能:
首先,只出溶劑峰而不出產品峰,可能是產品濃度太低,達不到其檢出限;
其次,可能是你設定的分流比太大,而導致進樣量太少而導致達不到其檢出限;
再次,可能是你設定的可視量程太大,如按照溶劑峰的最大量程設定,可能導致未顯示出產品峰;
最後,就是試樣中沒有該產品,這個很有可能,因為不知道你的處理過程,所以只能這樣比較寬泛的分析。
建議你針對上述可能導致不出產品峰的情況,分析沒一個步驟,沒一種可能,以排除問題。
『肆』 用氣相色譜儀檢測乙醇含量,水作為空白溶劑,但空白溶劑在和乙醇相同的保留時間出峰了,有可能是啥原因
是一個樣品中含有乙醇與二氯乙烷是嗎?那是因為你的溫度太高了,設低一些,因為這兩個都是溶劑,沸點很低,出峰時間重在一起了,用40度左右試試,壓力也設小些,50左右都可以了。
『伍』 氣相色譜儀(1790)的檢測譜圖中,峰的信號太大,結果太高,請問是什麼原因如何解決
先說明,樓上的是個大-傻-X,如果稀釋了,那測量的還是原來的樣品嗎?再者,既然不能確定樣品成分,用何種溶劑稀釋?用何種方式稀釋?稀釋後的結果怎麼反映到樣品上?用點腦子好么?
對於樓主反映的問題,如果是採用TCD方式測量的話,按照我的經驗,可能有如下幾種原因:1,色譜圖設置有誤,峰高和峰寬的單位/比例需要調整;2,TCD電橋故障導致產生的電流被放大;3,色譜柱需更換了;4,參比氣成分改變或壓力設定不當。
目前我只能猜測這幾種原因,具體原因請現場工作人員檢查方能確定,最好通知廠家技術人員解決,如非必要不要自己動手,自己檢查時請注意一些細節性的問題,如電路是否斷開,氣液管路有無堵塞等,這些往往影響測量結果,造成測量故障。
『陸』 氣相色譜溶劑峰寬是怎麼回事 小木蟲 小木蟲
你是說你氣相里所有的色譜峰都寬,還是說,你的溶劑峰特別寬呢?
如果是所有峰都很寬,一個是可以老化一下色譜柱,一個是考慮你的進樣是不是不夠快(這只是針對手動進樣而言),再一個就是可能樣品濃度太高了,可以考慮減少進樣量,或者加大分流比。
如果你說的是溶劑峰很寬,那是很正常的事情。
因為你的樣品占很少比例的,你的溶劑比例很大的。所以一般溶劑峰都會過載,這很正常很正常。只要它不影響你的待測樣品就行了。如果真的影響的話,你可以考慮換個溶劑,錯開你的待測峰出峰時間。
『柒』 氣相色譜儀進樣時,溶劑峰拖尾是什麼原因
這個其實挺正常的。因為濃度太高了。
氣相既然要保證主成分檢出,那麼溶劑峰的濃度自然會比較高。有時候就會出現拖尾的情況,這個其實比較常見。
如果想要避免的話,最好是調整一下樣品濃度,比如,主成分的濃度增加,然後加大分流比或者減小進樣量。再有,如果溶劑的沸點足夠高,可以考慮用頂空之類的進樣方式,這樣就可以減小溶劑的濃度了。再有一個就是更換溶劑,一個就是更換色譜柱了。
不過氣相一般不怎麼看溶劑峰。你研究的是主成分,如果溶劑峰不幹擾主成分測定就沒什麼關系。
『捌』 氣相色譜峰形不好看是什麼原因
實驗條件不好
a.柱溫太低:柱溫太低,樣品在柱子里停留時間就會變長,峰型自然也就不好了。
b.色譜柱的類型:關於極性柱、中極性柱、非極性柱的選擇問題可以在網路上仔細學習一下,如果柱子的類型沒有選好,色譜峰也會有一些問題的。
樣品的問題
a.一定要確定樣品沒有被污染,氣相很容易污染,不光是試劑瓶、進樣針,有的時候溶劑也會有有機揮發性雜質污染樣品。一定要排除這個可能性,避免是兩個峰包在一起導致的肩峰或者是叉峰。
b.樣品濃度太高。如果濃度超載了,或者進樣量太大了,那麼峰型就不好了。
色譜柱污染
如果污染了,一個是老化色譜柱,比色譜柱的最高耐受溫度低20-30℃,老化3個小時。另外一個就是截去靠近進樣口的一截色譜柱。另外就是進樣口的氣密墊,或者叫做密封墊、T形墊,一般一個墊子也就用100次,如果次數超過90,差不多就可以換了。
進樣的問題
如果用的是頂空進樣,或者是自動進樣,那就不存在這個問題。如果是新手又是手動進樣,就有可能出現這個問題。進樣的時候,一定要快進,快推,快出。避免污染。同一個樣品,不同的進樣手法,跑出來的峰型差異會很大的。
『玖』 氣相色譜雜質峰偏大是什麼原因造成的
你需要確定一下是不是真的雜質偏大。還是儀器誤差、人為誤差導致的。
如果是真的樣品中的雜質大,那就沒啥好說的了。如果不是,那麼可能有以下幾個原因:
色譜柱老化一下,色譜柱裡面可能會有一些殘留的東西,沒有除凈。
清洗襯管並且更換石英棉。一樣的道理。襯管就在進樣口下面,很容易污染。
清洗所有的配製樣品溶液(如果你進的是液體的話)所接觸到的玻璃儀器。比如容量瓶、玻璃滴管、頂空瓶等等。洗完之後可以用60℃烘乾,一方面是幹得快,一方面裡面的有機溶劑也可以烘出來。
注意進樣的時候(這里指的是手動,直接進樣),別用手去碰進樣針。如果導入時需要一個支點,必須!戴手套。而且是干凈的手套。
這些都是常規的問題,如果不是上述問題,那就比較麻煩了。
樣品問題:這個吧有時候比較難說。有的物質受熱分解,有的會發生化學反應,這些都要注意。我碰巧做到一個物質,它遇水或乙醇會劇烈地分解成丙酸、丙酸乙脂和氯化氫。所以需要無水,而且不可以和乙醇一起做。
還是儀器問題。我有一次做頂空,空白溶劑dmso裡面就有很多亂七八糟的雜質。最後賣家告訴我,他們的頂空氣路不適合做dmso,結果溶劑換成dmf就沒事兒了。如果你用的是頂空,可以考慮直接進樣排除一下干擾。
計算問題。我不知道你是怎麼算出雜質峰大的。如果是第一次做,如果使用面積歸一化法計算,考慮一下更換計算方法。因為響應值不同,如果用外標方法計算可能雜質含量就很小了。
目前就想到了這么多。
『拾』 氣相色譜峰太寬,怎麼調節
1.降低進樣量
2.加大分流比
3.加塊程序升溫
4.提升進樣口溫度
5.嘗試更換更合適的色譜柱
建議先查查色譜柱是否合適測你所做的實驗,如何OK,就可以考慮調整1-4的條件