㈠ 在做液相時0.1%磷酸緩沖鹽用完了,機器顯示壓力不足,色譜柱走峰基線不穩,現在我應該用什麼去沖洗柱子
C18柱用甲醇乙腈沖,基線平了換水沖,然後換成流動相就行
㈡ 我用0.2M的磷酸鹽作為流動相,用完後用5%的乙腈沖洗,為什麼會堵柱子和系統呢
真的嗎? 應該不會,要不然鹽就不用走梯度了, 我用過0.1M的磷酸, 是不是0.2M太濃?
㈢ 因用磷酸鹽緩沖液,液相色譜柱堵了怎麼辦
看你使用的是什麼牌子的色譜柱悉喚螞了,有的色譜柱是可以使用純水沖去掉磷酸鹽的。普通色譜柱是不能沖的,主要是由於水會溶解硅鏈櫻膠,導致相坍塌。還有的色譜柱是可以反沖睜埋。但是如果使用磷酸鹽堵了,久了不用,磷酸鹽結晶了,會導致硅膠顆粒受破壞,影響分離效果。
一般而言,色譜柱堵了,可以用10~30的甲醇水走柱子。但是,不知道你使用的是什麼牌子的柱子,以及情況嚴重到什麼程度。
㈣ 高效液相色譜使用磷酸鹽做流動相時應該注意什麼
sunmaocheng(站內聯系TA)是不是在跑液相開始的時候,用磷酸鉀緩沖液和純乙腈先梯度洗脫?huanghaiyu(站內聯系TA)只要鹽完全溶解,一般不會有問題的,如果你確實很擔心,就把乙腈和鹽按照你的比例混合好,然後裝在一個瓶子了,再進樣品,這樣就沒問題了,使用完清洗的時候首先要用95%的水沖洗,避免殘留。痴客(站內聯系TA)以前用PB緩沖液和乙腈跑過,貌似沒出過什麼問題,但是後來老師說鹽可能會堵柱子fisherme(站內聯系TA)遇到過這樣的問題,前一天有人用眼做流動相跑了,系統可能沒有沖干凈,隔天再用乙腈系統壓力就會升高,甚至堵住。這明顯是少量鹽溶液在系統內有過量的乙腈會洗握罩出鹽結晶。 其實只要鹽溶液和乙腈比例合適就不會存在析出的問題,關鍵是使用過後的後處理,也不能直接用100%水來沖,要有個緩沖。算不上經驗,交流一下。lihuan0525(站內聯系TA)最關鍵的就是使用後的及時沖洗。chene(站內聯系TA)主要是要在用完後,耐心把柱子沖趕緊,這很重要,要不下次別人沒法用的同時也耽擱你自己的使用!caozhanglei(站內聯系TA)1.用前要用磷酸舉皮純調PH值,使其達到所要求的PH值。 2.要現用現配,以免時間長緩沖鹽析出和滋生細菌。 3.要一次配足,多次配的前後緩沖效果不一樣,影響分離效果。 4.磷酸鹽流動相盡量現用現配,不要存放太久,如果晶體析出,會嚴重損壞柱子和泵內的密封墊圈,還有柱塞桿。 5.流動相溶劑應選擇hplc的溶劑或依此為標準的溶劑。流動相使用前用0.45μm濾膜過濾、脫氣,清除微粒和灰塵。 在送液泵內,為了防止雜物(固體)進入流路,裝有吸濾器,但網孔徑為10μm,比此更小的顆粒仍然可通過,這會導致流路和柱子堵塞和污染。為此,建議常用0.45μm濾膜過濾。流動相溶劑須經脫氣,如不脫氣,在溶劑混合時,或壓力溫度變化時容易產生大量氣泡,會導致泵誤動作和輸液不暢,檢測器產生雜訊信號等。 6.流動相恢復到室溫後使用。流動相溫度與室溫相差時,流動相在恢復到室溫前,基線水平很難穩定,特正咐別是發生漂移,也容易產生氣泡等現象。水與有機溶劑混合時,混合液變化大,往往會與室溫相差很大,務必注意。gdmc041(站內聯系TA)安裝保護住,再則沖洗好柱子,一般沒有什麼大礙了。痴夷子皮(站內聯系TA)緩沖鹽會析出是因為流動相中有機相(甲醇或乙腈)比例高所致。防止鹽析出就需避免高比例有機相-緩沖鹽體系的出現。 正規操作1、以流動相平衡色譜柱前,先用50%~90%以上的水平衡約30min,再更換上流動相。 2、使用後,及時以梯度沖洗色譜柱。80%~90%水 0.5ml/min沖約1h,再改用80%~90%有機相沖約1h,然後以純乙腈沖及保存。
㈤ 如果我液相色譜儀器一直用緩沖液做樣應該怎麼沖洗儀器
既然是洗鹽,那肯定是先用純水去長時間沖洗管路。如果您擔心有污染的殘留呢,建議用 甲醇:水:乙腈:異丙醇=1:1:1:1 低流速長時間沖洗系統,之後換成純有機相就可以了。試劑一定都用色譜純的。
㈥ 每次使用之後的高效液相色譜柱都要清洗嗎,如何沖洗
這個是不是需要清洗的問題,需要看你的流動相是什麼。
一般反相色譜,經常會用到緩沖鹽。而鹽對於色譜柱傷害比較大。如果鹽堵在色譜柱裡面那柱子就廢了。所以需要把它沖掉。最好是每次都沖掉。
如果你的柱子流動相裡面沒有鹽,那就瞎帆沒必要沖洗了。
沖洗橘神信方法:反相柱子最好保存在純甲醇或者純乙腈裡面,但是鹽不溶於純有機相。所以中間過渡甲醇水或者乙腈水。
究竟用什麼,要看你的流動相。
比如,我用的是磷酸鹽緩沖液-乙腈(70:30)的流動相,那麼沖洗的時候最好選用10%-15%乙腈水,沖洗1.0ml/min,至少30min,最好40min。
如果第二天接著使用的話可以不必用純甲醇或者純乙腈封存了。如果第二天不用,最好用純的有機相封上柱子,圓輪同樣是1.0ml/min流速沖洗30min。
另,也不是說不清洗就會壞。我們研發有的時候為了趕項目,來不及沖洗色譜柱。柱子不會怎麼樣。就是壽命會短一點而已。
㈦ 液相色譜 流動相加了磷酸如何 沖洗可以使柱子使用更長久
反相柱的話,先用10%甲醇 1.0流速沖洗一個小時,再用甲醇清洗45-60分鍾。
可以用甲醇-水=5:95沖洗,在用甲醇沖洗。不行的話就用異丙醇效果更好一些。能延長使用期,但與你做的東西有關。
沖洗柱子能夠保持柱子良好的柱效
大比例水沖洗就可以了。只要ph不是很小,對色譜柱幾乎無影響
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