❶ 化學試劑的有效期怎麼確定
國際慣例：不開封一年。
化學試劑是進行化學研究、成分分析的相對標准物質，是科技進步的重要條件，廣泛用於物質的合成、分離、定性和定量分析，可以說是化學工作者的眼睛，在工廠、學校、醫院和研究所的日常工作中，均離不開化學試劑。
化學試劑的有效期隨著化學品的化學性質的改變，有著很大的區別。一般情況下，化學性質穩定的物質，保存有效期就越長，保存條件也簡單。初步判斷一個物質的穩定性，可遵循以下幾個原則：
無機化合物，只要妥善保管，包裝完好無損，可以長期使用。但是，那些容易氧化、容易潮解的物質，在避光、蔭涼、乾燥的條件下，只能短時間（1～5年）內保存，具體要看包裝和儲存條件是否合乎規定。
有機小分子量化合物一般揮發性較強，包裝的密閉性要好，可以長時間保存。但容易氧化、受熱分解、容易聚合、光敏性物質等，在避光、蔭涼、乾燥的條件下，只能短時間（1～5年）內保存，具體要看包裝和儲存條件是否合乎規定。
有機高分子，尤其是油脂、多糖、蛋白、酶、多肽等生命材料，極易受到微生物、溫度、光照的影響，而失去活性，或變質腐敗，故此，要冷藏（凍）保存，而且時間也較短。
基準物質、標准物質和高純物質，原則上要嚴格按照保存規定來保存，確保包裝完好無損，避免受到化學環境的影響，而且保存時間不宜過長。一般情況下，基準物質必須在有效期內使用。
❷ 請問誰知道使用液相色譜儀的應注意的事項
HPLC用水來源
1 專門的純水機或超純水機；
2 去離子水重蒸；
3 二次或三次重蒸水；
4 採用類似家用的純水機；
5 市場上瓶裝的純凈水或蒸餾水；
6 其它途徑
以上的水除第1項的水能用於梯度淋洗外，其餘的水均難用於梯度淋洗。不管採用何種途徑，配製流動相應用新鮮水，水質越高放置時間越短。
理想的HPLC用水應為18.2MΩ的超純水，並通過0.22um的濾膜，除去熱源、有機物、無機離子及空氣等。
最小檢測限的計算方法
（以N2000色譜工作站為例）
CL=2*Nd*c*20/HV
註：Nd 基線雜訊，單位：mV
c 樣品濃度
H 峰高，單位：mV（或AU）
V 進樣體積
例：
如基線雜訊為20微伏即0.02mV，萘的甲醇標樣溶液濃度為0.0001g/L，峰高145000微伏即145mV，進樣體積為20微升，即得：
CL=2*0.02*0.0001*20/145*20=2.76e-8
即10的負8次方
對儀器進行維護時應該遵循的幾條基本規則
1. 一次規則
當系統出了故障，你可以試探性地改變某些狀態，一次可以改變一個參數。例如，限制色譜峰脫維的問題，可以依次改變流動相，換保護柱，換分析柱等。做一些簡單的改變步驟，也許就能解決問題。
2. 二次比較規則
在動手檢修之前已經明確了故障所在，或者已經確定了解決故障的方案。換句話說，動手之前已經找對了解決辦法。例如，在進樣過程中發現內標物的峰值變低了，可以重復進樣看看重復性如何，如果是偶然變低，是否是定量管里進了氣泡。這個規則可用於考察系統改變後的情況。更換了流動向後在正式進樣前可以進兩次標准品以檢查保留時間的穩定情況和色譜峰的穩定性。在梯度洗脫中如果出現了多餘的峰，可以空載梯度洗脫一次（真的有問題嗎？），用此規則可以避免不必要的改變，盡快確定糾正措施。
3. 取代規則
用好的部件換下可疑的部件，是查找故障的最好方法。如果你懷疑檢測器引起了噪音，就換一個性能好的檢測器。如果故障被排除了，就說明換下的檢測器有問題。這個規則應用的規模有大有小，可以從換整個部件到換印刷線路板上的集成塊。
4. 換回規則
這個規則和取代規則一起運用，好部件取代了可疑部件後情況並未得到改善，應重新換上原部件。這樣做的維修費用最小，也防止了用過的部件積壓下來。這條規則僅適用於單一的故障。換回原則不適用於以下的情況：
（1） 在取下時新部件已損壞（如泵密封墊圈）；
（2） 部件價格低（如柱內襯過濾片）；
（3） 重新裝上原部件要冒損壞的風險；
（4） 定期更換的部件。
5. 參考條件規則
通常有兩種參考條件：①標准參考條件；②試驗參考條件。
標准參考條件也叫標准試驗條件，是從一個系統到另一個系統，從一個實驗室到另一個實驗室都易於驗證的條件。用該條件所測得的數據有助於識別實際試驗和系統間的問題。如果在某試驗條件下系統壓力升高，而在標准條件下壓力正常。這說明系統異常是由實驗室的變化所引起的。下表列舉了啟用新色譜柱是的標准試驗條件，在使用過程中也可用此標准試驗條件檢查系統的情況。
流動相 甲醇/水（體積比=70/30）
色譜柱 C18
反相 流速 1mL/min
檢測器 UV 254nm
樣品 尿嘧啶（用於t0）
苯酚，苯乙酮，硝基苯，苯甲醚，甲苯
流動相 正己烷/異丙醇（體積比=75/25）
色譜柱 腈基
極性鍵合相 流速 1mL/min
檢測器 UV 254nm
樣品 硝基苯，苄醇，2,4-二硝基甲苯，對硝基苄醇
流動相 正己烷/二氯甲烷/異丙醇胺（體積比=95/4/1）
色譜柱 硅膠
正相 流速 1mL/min
檢測器 UV 254nm
樣品 2-苯-2-丙醇，甲苄醇，肉桂醇
試驗參考條件是用於檢查正常系統每天的工作情況。要選最方便的方法驗證這種條件。每天可以列印兩張校正用色譜圖作對照，檢查保留時間、峰寬、系統壓力等方面的變化。發現峰的斜率、色譜柱塔板數和其他參數與原來色譜圖相比有了變化，說明系統在運行中可能發生了問題。當然發生問題不結合實際分析程序考慮，只通過查找標准參考色譜圖是不能一目瞭然的。
6. 記錄規則
這條規則往往被人忽視。應該在每次維護和故障排除後都作記錄。例如，對系統的某一特定故障因為沒作記錄就不可能系統地分析問題，費時又費力。從長遠掛點看，系統發生的特定故障對今後的操作也有極其重要的意義。每台儀器都應備有維修記錄本，內容包括日期、故障部位、現象、產生的原因、解決的辦法和結果等。還有一點要注意，試過或換下的部件都要貼上標志。
做好維修保養記錄有如下好處：
（1） 讓所有的操作人員都知道發生了什麼故障，在操作過程中以引起注意；
（2） 幫助操作人員描述故障現象；
（3） 當再次發生故障時可根據資料盡快解決問題。
7. 預測規則
有維修實踐和保養習慣的人員應能夠預測系統的故障，平時在保養方面多投入些時間，系統會以減少故障作為報答，同時也消除了連鎖性的損壞。例如，平時不注意保養，泵的密封墊圈壞了，造成流動相滲漏，會腐蝕泵和其它部件。善於保養能節約時間和金錢，而不是儀器控制了操作人員。例如，每天開始工作或結束工作時發現燈壽命引起基線漂移就把燈換下來。如果等到燈全壞了，就需要停機，造成的損失可能比一個燈的費用還要高。
8. 緩沖液規則
這條規則提醒你停機時一定要洗凈系統中的緩沖物。系統中的緩沖物的殘余會造成磨損、腐蝕和阻塞。另外，生理緩沖液極易受到細菌和黴菌的影響。理想的沖洗液是不含緩沖物的相同組成的流動相。不要讓純水儲藏於系統中，以防生長細菌。可在水中加入10%的有機溶劑或0.02~0.05%的疊氮化鈉。在實驗室中應按如下程序沖洗：用純水沖洗30~60min(1mL/min)再用甲醇沖洗30min後關機。千萬不能一開機就用有機溶劑沖洗，否則無機鹽就`會沉澱在系統中，造成不良後果。
HPLC日常維護辦法之一：壓力異常
操作壓力的變化往往是故障的徵兆。從下表中找出所觀察到的現象，並在右側的列表中參考相應的解決方法。
A、 沒有壓力顯示，沒有流動相流動
原 因 解決方法
1Q、電源問題 1A、接通電源，開機
2Q、保險絲被燒壞 2A、更換保險絲
3Q、控制器設定不正確或設定失敗 3A、a、採取恰當的設定 b、修理或更換控制器
4Q、柱塞桿折斷 4A、更換柱塞桿
5Q、泵頭內有空氣 5A、溶劑脫氣、啟動泵抽出空氣
6Q、流動相不足 6A、a、補充流動相b、更換入口濾頭
7Q、單向閥損壞 7A、更換單向閥
8Q、漏液 8A、擰緊或更換手緊接頭
B、 流動相流動正常，但沒有壓力顯示
原 因 解決方法
1Q、儀表損壞 1A、更換儀表
2Q、壓力感測器損壞 2A、更換壓力感測器
C、 壓力持續偏高
原 因 解決方法
1、流速設定過高 1、調整流速設定
2、柱前篩板堵塞 2、a、在允許情況下反沖色譜柱 b、更換篩板c、更換色譜柱
3、流動相使用不當或緩沖鹽的結晶沉澱 3、a、使用恰當的流動相b、沖洗色譜柱
4、色譜柱選擇不當 4、選擇恰當的色譜柱
5、進樣閥損壞 5、清洗或更換進樣閥
6、柱溫過低 6、提高溫度
7、控制器失常 7、修理或更換控制器
8、保護柱阻塞 8、清洗或更換保護柱
9、在線過濾器阻塞 9、清洗或更換在線過濾器
D、 壓力持續偏低
原 因 解決方法
1、流速設定過低 1、調整流速
2、系統漏液 2、確定漏液位置並維修
3、色譜柱選擇不當 3、選擇恰當的色譜柱
4、柱溫過高 4、降低溫度
5、控制器失常 5、維修或更換控制器
E、 壓力不斷上升
原 因 解決方法
1、見列表C 1、見列表C
F、 壓力降為零
原 因 解決方法
1、見列表A、B 1、見列表A、B
G、 壓力不斷下降，但不回零
原 因 解決方法
1、見列表D 1、見列表D
H、 壓力波動
原 因 解決方法
1、泵中有氣體 1、a、溶劑脫氣b、從泵中除去氣體
2、單向閥損壞 2、更換單向閥
3、泵密封損壞 3、更換泵密封
4、脫氣不充分 4、a、溶劑脫氣b、改變脫氣方法（使用在線脫氣法等）
5、系統漏液 5、確定漏液位置並維修
6、使用梯度洗脫 6、由於流動相粘度的變化引起的壓力波動
HPLC日常維護辦法之二：漏液
通常可以通過擰緊或更換管路接頭來解決漏液的問題。但值得注意的是過份擰緊會導致金屬接頭的漏液和塑料接頭的磨損。如果通過稍微擰緊接頭不能解決漏液的問題，就必須將接頭取下，檢查是否損壞（例如，卡套損壞、密封表面有雜質）；損壞的接頭應該更換掉。
A、 接頭處漏液
原 因
解決方法
1、接頭松動
1、擰緊
2、接頭磨損
2、更換
3、接頭過緊
3、a、擰松，再重新擰緊
b、更換
4、接頭被污染
4、a、拆下清洗
b、更換
5、部件不匹配
5、使用同一品牌的配件
B、 泵漏液
原 因
解決方法
1、單向閥松動
1、a、擰緊單向閥（不必擰的過緊）
b、更換單向閥
2、接頭松動
2、擰緊接頭（不必擰的過緊）
3、混合器密封損壞
3、a、更換混合器密封
b、更換混合器
4、泵密封損壞
4、維修或更換泵密封件
5、壓力感測器損壞
5、維修或更換壓力感測器
6、脈沖阻尼器損壞
6、更換脈沖阻尼器
7、比例閥損壞
7、a、檢查隔膜，如果漏液立即更換
b、檢查手緊接頭，損壞的立即更換
8、放空閥的損壞
8、a、擰緊放空閥
b、更換放空閥
C、 進樣閥漏液
原 因
解決方法
1、轉子密封損壞
1、重新安裝或更換進樣閥
2、定量環阻塞
2、更換定量環
3、進樣口密封松動
3、調整
4、進樣針頭尺寸不合適
4、使用恰當的進樣針
5、廢液管中產生虹吸
5、保持廢液管高於廢液液面
6、廢液管阻塞
6、更換或疏通廢液管
D、 色譜柱漏液
原 因
解決方法
1、尾端接頭松動
1、擰緊接頭
2、卡套內有填料
2、拆下、清洗卡套、重新安裝
3、篩板厚度不合適
3、使用合適的篩板（參考下表）
篩板選擇指導
物質粒徑
篩板孔徑
3-4u
0.5u
5-20u
2u
E、 檢測器漏液
原 因
解決方法
1、流通池墊片損壞
1、a、避免過大的背景壓力（壓力降）
b、更換墊片
2、流通池窗破碎
2、更換窗口
3、手緊接頭漏液
3、擰緊或更換
4、廢液管阻塞
4、更換廢液管
5、流通池阻塞
5、重新安裝或更換
HPLC日常維護辦法之三：譜圖的各種問題
液相色譜系統的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變設備參數得到解決；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對於色譜柱和流動相的正確選擇是得到好的色譜圖的關鍵。
A、 峰拖尾
原 因
解決方法
1、篩板阻塞
1、a、反沖色譜柱
b、更換進口篩板
c、更換色譜柱
2、色譜柱塌陷
2、填充色譜柱
3、干擾峰
3、a、使用更長的色譜柱
b、改變流動相或更換色譜柱
4、流動相PH選擇錯誤
4、調整PH值。對於鹼性化合物，低PH值更有利於得到對稱峰
5、樣品與填料表面的溶化點發生反應
圖
5、a、加入離子對試劑或鹼性揮發性修飾劑
b、更改色譜柱
B、 峰前延
原 因
解決方法
1、柱溫低
1、升高柱溫
2、樣品溶劑選擇不恰當
2、使用流動相作為樣品溶劑
3、樣品過載
3、降低樣品含量
4、色譜柱損壞
4、見A1、A2
C、 峰分叉
原 因
解決方法
1、 保護柱或分析柱污染
圖
1、取下保護柱再進行分析。如果必要更換保護柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強保留物質污染，運用適當的再生措施。如果問題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。
2、樣品溶劑不溶於流動相
2、改變樣品溶劑。如果可能採取流動相作為樣品溶劑。
D、 峰變形
原 因
解決方法
1、樣品過載
1、減少樣品載量
E、 早出的峰變形
原 因
解決方法
1、樣品溶劑選擇不恰當
1、a、減少進樣體積
b、運用低極性樣品溶劑
F、 早出的峰拖尾程度大於晚出的峰
原 因
解決方法
1、柱外效應
1、a、調整系統連接（使用更短、內徑更小的管路）
b、使用小體積的流通池
G、 K』增加時，脫尾更嚴重
原 因
解決方法
1、二級保留效應，反相模式
1、a、加入三乙胺（或鹼性樣品）
b、加入乙酸（或酸性樣品）
c、加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品）
d、更換一支柱子
2、二級保留效應，正相模式
2、a、加入三乙胺（或鹼性樣品）
b、加入乙酸（或酸性樣品）
c、加入水（或多官能團化合物）
d、試用另一種方法
3、二級保留效應，離子對
3、加入三乙胺（或鹼性樣品）
H、 酸性或鹼性化合物的峰拖尾
原 因
解決方法
1、緩沖不合適
1、a、使用濃度50-100mM的緩沖液
b、使用Pka等於流動相PH值的緩沖液
I、 額外的峰
原 因
解決方法
1、樣品中有其他組份
1、正常
2、前一次進樣的洗脫峰
2、a、增加運行時間或梯度斜率
b、提高流速
3、空位或鬼峰
3、a、檢查流動相是否純凈
b、使用流動相作為樣品溶劑
c、減少進樣體積
J、 保留時間波動
原 因
解決方法
1、溫控不當
1、調好柱溫
2、流動相組分變化
2、防止變化（蒸發、反應等）
3、色譜柱沒有平衡
3、在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱
K、 保留時間不斷變化
原 因
解決方法
1、流速變化
1、重新設定流速
2、泵中有氣泡
2、從泵中除去氣泡
3、流動相選擇不恰當
3、a、更換合適的流動相
b、選擇合適的混合流動相
L、 基線漂移
原 因
解決方法
1、柱溫波動。（即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。）
1、控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器
圖
2、流動相不均勻。（流動相條件變化引起的基線漂移大於溫度導致的漂移。）
2、使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動相在使用前進行脫氣，使用中使用氦氣。
3、流通池被污染或有氣體
3、用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸）
4、檢測器出口阻塞。（高壓造成流通池窗口破裂，產生噪音基線）
4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。
5、流動相配比不當或流速變化
5、更改配比或流速。為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。
6、柱平衡慢，特別是流動相發生變化時
6、用中等強度的溶劑進行沖洗，更改流動相時，在分析前用10-20倍體積的新流動相對柱子進行沖洗。
7、流動相污染、變質或由低品質溶劑配成
7、檢查流動相的組成。使用高品質的化學試劑及HPLC級的溶劑
8、樣品中有強保留的物質（高K』值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現出一個逐步升高的基線。
8、使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。
9、使用循環溶劑，但檢測器未調整。
9、重新設定基線。當檢測器動力學范圍發生變化時，使用新的流動相。
10、檢測器沒有設定在最大吸收波長處。
10、將波長調整至最大吸收波長處
M、 基線噪音（規則的）
原 因
解決方法
1、在流動相、檢測器或泵中有空氣
1、流動相脫氣。沖洗系統以除去檢測器或泵中的空氣。
2、漏液
圖
2、見第三部分。檢查管路接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。
3、流動相混合不完全
3、用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑
4、溫度影響（柱溫過高，檢測器未加熱）
4、減少差異或加上熱交換器
5、在同一條線上有其他電子設備
5、斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自於外部，加以更正。
6、泵振動
6、在系統中加入脈沖阻尼器
N、 基線噪音（不規則的）
原 因
解決方法
1、 漏液
圖
1、見第三部分。檢查接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。
2、流動相污染、變質或由低質溶劑配成
2、檢查流動相的組成。
3、流動相各溶劑不相溶
3、選擇互溶的流動相
4、檢測器/記錄儀電子元件的問題
4、斷開檢測器和記錄儀的電源，檢查並更正。
5、系統內有氣泡
5、用強極性溶液清洗系統
6、檢測器內有氣泡
6、清洗檢測器，在檢測器後面安裝背景壓力調節器
7、流通池污染（即使是極少的污染物也會產生噪音。）
7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池
8、檢測器燈能量不足
8、更換燈
9、色譜柱填料流失或阻塞
9、更換色譜柱
10、流動相混合不均勻或混合器工作不正常
10、維修或更換混合器，在流動相不走梯度時，建議不使用泵的混合裝置
O、 寬峰
原 因
解決方法
1、流動相組成變化
1、重新制備新的流動相
2、流動相流速太低
2、調節流速
3、漏液（特別是在柱子和檢測器之間）
3、見section 3。檢查接頭是否松動、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。
4、檢測器設定不正確
4、調整設定
5、柱外效應影響
a、柱子過載
b、檢測器對反應時間或池體積響應過大
c、柱子與檢測器之間的管路太長或管路內徑太大
d、記錄儀響應時間太長
圖
5、
a、 小體積進樣（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀釋樣品
b、減少響應時間或使用更小的流通池
c、 使用內徑為0.007-0.01的短管路
d、減少響應時間
6、緩沖液濃度太低
6、增加濃度
7、保護柱污染或失效
7、更換保護柱
8、色譜柱污染或失效，塔板數較低
8、更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對稱的色譜峰，則用強溶劑沖洗舊柱子。
9、柱入口塌陷
9、打開柱入口，填補塌陷或更換柱子
10、呈現兩個或多個未被完全分離的物質的峰
10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果
11、柱溫過低
11、提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過75℃
12、檢測器時間常數太大
12、使用較小的時間常數
P、 分離度降低
原 因
解決方法
1、流動相污染或變質（引起保留時間變化）
1、重新配置流動相
2、保護柱或分析柱阻塞
圖
2、去掉保護柱進行分析。如果必要則更換保護柱。如果分析柱阻塞，可進行反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被強保留的污染物損壞，建議使用恰當的再生程序。如果問題仍然存在，進口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。
Q、 所有的峰面積都太小
原 因
解決方法
1、檢測器衰減設定過高
1、減少衰減的設定
2、檢測器時間常數設定太大
2、設定較小的時間常數
3、進樣量太少
3、增大進樣量
4、記錄儀連接不當
4、使用正確的連接
R、 所有的峰面積都太大
原 因
解決方法
1、檢測器衰減設定過低
1、採取較大的衰減
2、進樣過多
2、減少進樣量
3、記錄儀連接不正確
3、正確連接記錄儀
HPLC日常維護辦法之四：進樣閥的問題
以下問題在使用進樣閥過程中有可能發生。
A、 手動進樣閥，轉動不靈
原 因
解決方法
1、轉子密封損壞
1、更換或調整轉子密封
2、轉子太緊
2、調整轉子的松緊度
B、 手動進樣閥，載樣困難
原 因
解決方法
1、進樣閥安裝不當
1、重新安裝
2、定量環阻塞
2、清洗或更換定量環
3、進樣器污染
3、清洗或更換進樣器
4、管路阻塞
4、清洗或更換管路
C、 自動進樣閥，不能轉動
原 因
解決方法
1、無壓力（或電源）
1、提供恰當的壓力（電源）
2、轉子太緊
2、調整轉子的松緊度
3、進樣閥安裝不當
3、重新安裝
D、 自動進樣閥，其它問題
原 因
解決方法
1、阻塞
1、清洗或更換阻塞部件
2、機械故障
2、見隨機維修手冊
3、控制器故障
3、維修或更換控制器
HPLC日常維護辦法之五：由氣味、景象和聲音可以發現的問題
由氣味、景象和聲音可以發現的問題
你需要運用你所有的感官去發現液相色譜的問題。你最好養成習慣，每天花上幾分鍾運用你的感官（除了味覺）來「感覺」你的液相色譜是否存在問題，這樣可以幫助你迅速找到問題所在。例如：在你看到漏液之前，你可能首先聞到它的氣味。大部分的問題是可以通過眼睛看到。
A、 溶劑的氣味
原 因
解決方法
1、漏液
1、見section 3
2、濺出
2、a、檢查廢液瓶是否已滿
b、找到濺出的部位並清洗干凈
B、 熱氣味
原 因
解決方法
1、儀器過熱
1、a、檢查並調節通風設施
b、檢查並調節溫度設定
c、關掉儀器，查找維修手冊
C、 讀數不正常
原 因
解決方法
1、壓力不正常
1、見section 2
2、柱溫箱問題
2、
a、檢查並調節設定
b、參照用戶手冊
3、檢測器燈失效
3、更換燈
D、 燈警告
原 因
解決方法
1、壓力超出極限值
1、
a、檢查是否阻塞
b、檢查並調節極限值的設定
2、其它警示燈
2、見用戶手冊
E、 警告音
原 因
解決方法
1、溶劑泄漏/濺出
1、找到並解決
2、其它警告音
2、見用戶手冊
F、 刺耳的短音或長音
原 因
解決方法
1、軸承失效
1、見用戶手冊
2、潤滑不夠
2、進行恰當的潤滑
3、機械故障
3、見用戶手冊
HPLC日常維護辦法之六：常見故障及日常維護
常見故障及日常維護
下表中列出了液相色譜常見的一些問題，右側中則列出的日常維護的方法可以減少問題出現的頻率。括弧中的數字是建議進行維護的時間間隔。用戶手冊則提供您更多的維護方法。
溶劑瓶
問 題
維 護
1、進口篩板阻塞
1、
a、更換（3-6個月）
b、過濾流動相，0.5u濾膜
2、氣泡
2、流動相脫氣
泵
問 題
維 護
1、氣泡
1、流動相脫氣
2、泵密封損壞
2、更換（3個月）
3、單向閥損壞
3、過濾流動相，運用在線過濾，准備備用單向閥
進樣閥
問 題
維 護
1、轉子密封損壞
1、
a、不要擰的過緊
b、過濾樣品
色譜柱
問 題
維 護
1、篩板阻塞
1、a、過濾流動相
b、過濾樣品
c、運用在線過濾或保護柱
2、柱頭塌陷
2、a、避免使用PH>8的流動相（針對大部分硅膠的柱子）
b、使用保護柱
c、使用預柱（飽和色譜柱）
檢測器
問 題
維 護
1、燈失效，檢測器響應降低，噪音增大
1、更換（6個月）或准備備用燈
2、流通池有氣泡
2、a、保持流通池清潔
b、池後使用反壓抑制器
c、流動相脫氣
一般
問 題
維 護
1、腐蝕/摩擦損壞
1、在不使用時保持系統緩沖液的清潔
❸ 液相色譜柱應該如何使用和維護
一、使用前准備
1、使用前認真閱讀色譜柱的說明書，了解色譜柱的種類，選用合適的色譜柱。
在選用色譜柱時，應充分考慮所分析樣品的極性大小、化合物的種類數量、結構特徵。根據化合物的性質，選擇合適的色譜柱和分析條件。不同類型的色譜柱使用的流動相不同，使用錯誤的流動相會降低柱效，損傷柱子。如分析極性較大的多糖類成分，應當採用親水性的反相填料。對於首次使用的色譜柱，還應按照廠家的出廠說明對色譜柱進行低流速的沖洗活化，活化後的色譜填料共價鍵鍵合力增強，柱效提高，壽命延長。
2、樣品的准備與預處理
我們的經驗是樣品純化得越干凈，色譜柱的使用壽命越長。許多樣品，尤其是生物樣品，組份非常復雜，對色譜柱的損傷性較大，不經預處理的樣品直接分析，會嚴重縮短色譜柱的使用壽命。因此，在樣品的准備時需對樣品進行預處理，包括准備溶劑的選擇、樣品過濾等。
2.1 制樣溶劑的選擇
制樣溶劑通常需要考慮樣品的溶解性、與流動相的相溶性、色譜填料的適用性等方面。這類溶劑需對樣品有較大的溶解性，而且與流動相溶，洗脫強度最好低於流動相或梯度洗脫中的起始流動相，以免影響樣品分離。目前許多手性色譜柱都禁止使用DMSO、四氫呋喃、氯仿等溶解樣品，這些溶劑會破壞固定相的結構，從而縮短色譜柱的使用壽命。此外，制樣溶劑還應與色譜系統其他部件如高壓泵、進樣器等相適用。
2.2 制樣溶劑過濾
在進樣前需過濾樣品溶液，如採用0.22μm的微孔濾膜除去不溶性微粒，以免堵塞柱頭濾片及柱內填充床。在條件允許的情況下，最好採用與色譜柱同種填料的固相萃取柱過濾進樣溶液，可以減少在色譜柱上死吸附的物質或易堵塞的大分子樣品。如生物樣品中的小極性的油脂類易於沉澱死吸附在C18反相色譜柱中，導致柱效降低、柱壓升高。採用SPE柱過濾後，可以有效減少在色譜柱中附著沉積的死吸附成分，保護色譜柱不被污染，保證其使用壽命。
2.3 其他，如溶液濃度、進樣量等
分析物的某些性質同樣能影響色譜柱的使用壽命。強酸、強鹼性物質和蛋白質類生物大分子，它們能與固定相填料作用，或生成不可逆吸附層，改變填料表面特徵，使色譜柱性能發生變化，最終導致分離失效。此外樣品的進樣量過大、超載都會影響色譜柱的分離性能和使用壽命。
二、使用過程中的維護
1、流動相的使用和分析方法的選擇
流動相的純度、溶劑的選擇、適當分析方法的使用與色譜柱的性能和壽命密切相關。
1.1 流動相的選擇
所選用的流動相應與色譜柱、待分析樣品相兼容，即樣品、樣品溶液和流動相是互溶的。流動相能夠溶解樣品，避免樣品沉澱析出；同時還要求流動相與樣品不發生化學反應，並且要求與色譜柱不能發生溶解或化學反應。
色譜分析應選擇色譜級的流動相。通常分析純的溶劑含有微量雜質，如有機溶劑中的聚乙二醇、無機鐵離子（Fe+）等，作為流動相大量使用後會引起色譜柱性能變化。最好是使用色譜純級或者更高純度的試劑，盡量降低溶劑中雜質帶來的損傷。
1.2 流動相過濾
使用色譜純試劑配製流動相，使用前需經0.45μm或者更小孔徑的濾膜過濾和超聲脫氣處理，減少灰塵、微生物等雜質堵塞色譜柱，尤其是水溶性流動相易引起微生物生長而造成色譜柱阻塞。流動相最好是現配現用，放置時間最好不要超過2天。
1.3 流動相的pH和緩沖鹽的選擇
極端pH的流動相會破壞填料內的共價鍵，「溶解」硅膠，使固定相流失，從而降低柱效，縮短使用壽命。以硅膠作基質的固定相一般要求pH在2.5~7范圍內使用。長期在pH>7或pH<2使用環境中，硅膠會逐漸溶解或者表面鍵合的官能團會逐漸流失。如果一定要用高或低pH的流動相，最好是選用相適應的色譜填料。
1.4 流速的控制
目前粒徑為1.8μm的UPLC的流速常設為0.3~0.5mL/min，粒徑為5μm的HPLC分析流速不大於1.5mL/min，粒徑為10μm半制備柱流速控制在3mL/min。流速過大，壓力升高，會引起色譜填料沖垮、塌陷。
2、色譜儀器的操作
每次開機使用分析儀器時，泵啟動太快，流速和柱壓的瞬間升高，柱床受到沖擊，引起紊亂，產生空隙，影響色譜柱的使用壽命。因此，在操作實驗開始時，應當將流速和柱壓逐漸增加。
3、保護柱的使用
「保護柱」是與所使用液相色譜柱相同填料的短型色譜柱，可以有效地阻攔容易損壞色譜柱的大分子和不溶性顆粒，過濾易沉著色譜柱上產生死吸附的物質，從而延長色譜柱使用壽命。
4、柱溫的控制
不同類型的色譜柱耐受的溫度各有差別。通常色譜柱溫維持在10～40℃之間，能夠充分、最優的發揮色譜柱的性能。超出色譜柱溫度范圍，尤其高於柱溫范圍，會增加對流動相中化學物質的吸附，引起色譜柱固定相結構的改變；此外，還可能引起柱床塌陷，改變峰形，降低柱效，產生不可逆性的損傷。
三、使用後的清洗與保存
柱子使用一段時間後，總會有一些雜質累積在柱內，保留值較弱的物質，一般能快速從色譜柱沖洗出來，不產生干擾；中等保留強度的雜質能被緩慢沖洗出來，但對分析產生一定的干擾；強保留雜質通常聚集在柱頭或色譜柱中，難以被洗脫，甚至可能與填料發生相互作用，形成新的偽固定相，改變色譜柱的分離性能。通常表現為柱壓升高、基線不平、色譜雙峰、分離性能降低等。這些被污染的色譜柱經清洗後，可恢復部分甚至大部分離能力。因此使用後認真、定期清洗，不僅能延長色譜柱的使用壽命，節省資源，還能大大降低分析的成本。以我們常用的硅膠基質色譜柱為例，簡要闡述常用色譜柱的清洗與再生。
1，色譜柱的清洗與再生
色譜柱的使用前後都需經較強的流動相沖洗。通常情況下，在使用硅膠、氧化鋁、極性鍵合相色譜柱時，每次用完後可先用二氯甲烷或正己烷等溶劑低流速長時間的沖洗；鍵合反相硅膠色譜柱、離子交換色譜柱和凝膠色譜柱可先用高比例的水（甲醇水混合溶劑）沖洗，再用100%甲醇沖洗。此外，色譜柱低流速的反相沖洗能夠有效除去堵塞在柱頭或篩板上的雜質，以及清洗聚集在柱頭部位的較強吸附物質。有些色譜柱在許多方法處理污染失效後，反過來使用，不僅柱壓降變小，柱效也可恢復如，延長了色譜柱的使用時間。
若上述常規清洗法無法清除污染物，則有必要採用更強的洗脫劑清洗，如反相材料的沖洗順序為：100%甲醇→100%乙腈→乙腈∶異丙醇(75∶25，V/V)→100%異丙醇。或者可以採用較低濃度的稀酸或稀鹼可將有機溶劑不能洗脫的污染物除去。例如採用0.05mol/L的硫酸和流動相溶液沖洗色譜柱，可取得良好效果；或者採用1%氫氧化銨或50%二甲基甲醯胺水溶液，對聚集在柱頭的污染物具有良好的清洗效果。
如果分析時流動相中含有緩沖液（通常為鹽溶液），沖洗時宜用水取代緩沖液與有機相混合沖洗色譜柱（20倍柱體積）；再用100%有機溶劑沖洗。若直接用100%有機溶劑沖洗，可造成緩沖液沉積析出，從而損壞柱子品質。同樣的，若流動相中加入酸、鹼溶液時，也應當按照上述方法，先採用高比例的水（水：甲醇10:90）沖洗20倍柱體積，防止強酸強鹼溶液導致硅膠基質填料的溶解。
蛋白質對反相色譜柱的污染已成為常見問題，尤其在分離未經處理的動物組織等生物樣品。一般情況下，純有機溶劑如乙腈或甲醇不能很有效地清洗色譜柱，因而需要一些特殊的清洗方法。首先嘗試用高比例強極性溶劑的流動相進行沖洗，如乙腈∶異丙醇（1:2,V/V）；或使用0.1%的三氟乙酸水溶液或者0.1%乙酸水溶液清洗。此外，還可以採用1%十二烷基硫酸鈉 (SDS)，然後用5%～95%乙腈/水（含0.1%TFA）梯度沖洗，去除蛋白污染物效果也較好。
若採用上述的條件清洗後色譜柱仍不能達到理想的效果，有必要將固定相從色譜柱內取出，進行清洗再生後重新裝填。具體操作是：將色譜固定相從色譜柱內打出後，用甲醇浮選，去除其中細小的破碎顆粒；然後用二甲基甲醯胺、丙酮、甲醇超聲清洗；最後乾燥固定相，重新裝填色譜柱。經該方法處理的色譜柱，性能可得到顯著提高。
2、色譜柱的保存
色譜柱的保存應按照使用說明書中所指明的溶劑進行填充，盡可能的貯存於100%有機溶劑。色譜柱不能貯存在水或含水量高的溶劑中，會引起微生物的滋生，影響色譜柱壽命。如反相色譜柱長期不用，最好採用90%~95%的有機溶劑混合水溶液保存，防止色譜柱因密封不嚴造成色譜柱兩頭乾涸、斷層引起的壽命縮短。
此外，色譜柱還應當輕拿輕放，避免劇烈碰撞引起的色譜柱填料產生塌陷、斷層，縮短使用壽命。答案來自
❹ 怎麼確定自製指示劑的有效期
要根據試劑的化學物理性質，以及在使用的作用來考慮的。
例如，硫代硫酸鈉標准溶液，在不用的情況下，保存一年後再次滴定。與原來的濃度也相差不大。
而二甲酚橙指示劑溶液，配置後，保質期只有兩周，時間長了變色不靈敏。
GBT 603-2002 化學試劑 試驗方法中所用制劑及製品的制備
GBT 601 2002化學試劑 標准滴定溶液配製.
以及相應檢測標准中提及的化學試劑的有效期
❺ 用甲醇做流動相和用乙腈做流動相有什麼區別
乙腈(ACN)和甲醇(MeOH)是在反向色譜柱方法開發中廣泛使用的兩種常見溶劑。所以，除了知道乙腈比甲醇有更高的洗脫能力這一事實外，色譜分析人員還應該知道其他的特性嗎?讓我們來討論一些所有色譜專家都應該知道的問題。
首先，對流動相溶液的准備提出幾點意見。
只有純水溶液部分才能正確調整pH值。不要嘗試測量或調整有機或有機混合物的pH值。
制備二元混合物的方法有兩種，即V/V流動相溶液。
方法#1是用特定體積的「A」溶液填充一個量瓶，然後用「B」溶液將量瓶填滿。
方法#2是用指定數量的「A」溶液填充量筒(或容量瓶)；用指定數量的「B」溶液填充第二個量筒(或容量瓶)，然後將兩者的內容混合在一起。
無論您使用哪種方法，請在您的高效液相色譜法中完整地記錄它，以便任何閱讀它的人都能准確地復制它。上面描述的兩種方法在設計上都是正確的，但是會產生不同性質的結果。
紫外線吸光度
對於HPLC級溶劑(我們在HPLC分析中應始終使用HPLC級溶液)，乙腈的吸光度在這兩種溶劑中最低，非常適合低紫外光分析。甲醇在205-210nm左右有較高的紫外光吸收值，在非常低的紫外光范圍內略有限制。
溶劑溶解性
乙腈和甲醇在溶解多種緩沖鹽和樣品的能力上存在顯著差異。這些差異在方法開發中至關重要。
1.流動相溶解度
梯度運行顯示低重現性或失敗的一個常見原因可能與運行高濃度緩沖液和高濃度有機溶液有關。而含有濃度小於10mM鹽溶液的水溶液/有機溶液在大多數梯度條件下不太可能沉澱（最多98%是有機溶劑，而不是100%)，大多數與高效液相色譜應用一起使用的緩沖溶液會有更高的鹽濃度，當分析條件中有機溶劑含量較高時可能會從溶液中析出（導致堵塞，泄漏，插頭和不準確的結果）。在反向色譜法中選擇有機組成時要謹慎。確保使用的溶液在所有濃度下都是穩定的。還要驗證緩沖能力是否仍然存在，當使用高有機濃度時(當緩沖液被稀釋時)。
不確定鹽是否會溶解?只要把同樣濃度的溶劑混合起來做測試就行了。觀察它，有任何渾濁或可見顆粒嗎?你就可以得到你需要的答案。
甲醇總體上具有更好的溶解度特性(優於乙腈)，這意味著它在較高濃度下能更好地溶解大多數鹽，從而獲得更好的性能和更少的沉澱。
2.樣品的溶解度(對峰形和保留的影響)
液相色譜的一個基本要求是樣品完全溶解在流動相(初始流動相)中。在分析前，將樣品溶解在流動相或強度稍弱的溶液（不是更強的溶液）。這確保它將作為一個集中的段塞載入到柱的頂部，以改善峰形和RSD。如果樣品沒有完全溶解在流動相，那麼你實際上並沒有分析整個樣品。甲醇優於乙腈的另一個方面是它能完全溶解更多類型的樣品。這一改進的溶解度可能導致更好的整體峰形。甲醇的選擇性也不同於乙腈(不僅僅是洗脫強度)，這可能導致峰洗脫時間與預期的保留時間不同。這也是為什麼在開發反向方法時，我們總是嘗試使用含有乙腈或甲醇的不同流動相混合物的另一個原因。
永遠不要假設一種溶劑會比另一種溶劑更好。太多的色譜新手只使用乙腈作為他們方法開發的主要有機溶劑。請不要犯他們的錯誤，這樣的策略表明缺乏實踐經驗和知識。您必須首先分別嘗試它們（乙腈&甲醇）用你的樣品來評估結果（在適用的情況下最好從不同pH值的全面梯度開始）。如果您在最初的時間內測試了這兩種類型的溶劑，那麼將獲得回報，因為還沒有開發出能夠使用您自己的樣品來預測真正准確的結果的模擬器。可能會驚訝地發現，有多少樣品使用甲醇溶液顯示出更好的峰形和性能。如果沒有看到任何改善，至少你現在知道了，因為你已經嘗試過了，並且可以滿懷信心地前進。
背壓
乙腈的粘性比甲醇小，因此通常會導致整體柱壓和系統背壓降低。乙腈和水的混合物也會發生吸熱反應(冷卻溶液)，從而在溶液中捕獲氣體。如果你預先混合你的流動相，讓它靜置幾分鍾後在制備。
甲醇比乙腈更粘稠。它還有一個不尋常的特性，就是甲醇和水的50/50混合物會產生一個比甲醇或水更高的系統和柱背壓。它的峰值壓力是由50/50的混合物所觀察到的。兩種溶液在開始混合釋放出一些氣體也會產生放熱反應。在制備溶液時，最好是讓溶液靜置幾分鍾，然後在高壓液相色譜系統中使用。
❻ 關於化學試劑有效期
化學試劑沒有一般性的有效期規定，因為化學試劑的種類太多太多，而不同的化學試劑在保存過程中穩定性大不相同。如：氯化鈉，你保存它100年、1000年都沒事
❼ 如何保護色譜柱延長使用壽命
一、流動相的PH應在使用的范圍內
Welch公司的色譜柱除反相氰基柱PH1.5-9.0外，其反相色譜柱的PH范圍均為1.5-10，由於填料中存在Si-C和Si-O鍵，流動相超過其PH范圍將會導致硅膠基質流失和鍵合相碳鏈斷裂，使柱效下降，使用壽命變短。由於流動相的PH 控制不當而對色譜柱造成的損害，通常很難是色譜柱恢復，因此必須認真對待，嚴格控制流動相的PH值。
二、去除樣品和流動相中的固體顆粒
樣品和流動相中含有的固體顆粒物質會堵塞色譜柱篩板，篩板被堵住不僅會引起柱壓的升高，而且也會引起柱效下降，因為篩板的堵塞會引起液流不均，導致色譜峰型拖尾、變寬，從而使柱效下降。因此，建議使用超純水和色譜純試劑，在分析樣品前對樣品進行針筒過濾，流動相過0.45μm濾膜。
三、使用保護柱或在線過濾器
樣品和流動相經過濾後並不能完全消除固體顆粒物質，因為泵的磨損、密封圈和管路的老化也會產生固體顆粒物質，這些固體顆粒被流動相帶入色譜柱，堵塞篩板，導致柱壓升高、柱效下降。保護柱和在線過濾器上都有篩板，其孔徑與色譜柱孔徑相同，因此可以阻止固體顆粒物質到達色譜柱，有效防止色譜柱篩板的堵塞。由於柱壓升高在分析故障中占很大 比例，因此，除對樣品和流動相進行過濾外，建議您在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器。
如果去人色譜柱柱壓升高是由於進樣端篩板被堵引起的，科選擇一下方式進行補救：
1、先在色譜柱前加上保護柱或在線過濾器，然後用甲醇、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min。
2、先在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器，然後反向使用。
四、正確使用緩沖鹽
緩沖鹽通常易溶於水，難溶於有機溶劑，因此緩沖鹽使用不當會使其析出，堵塞填料基質上的微孔和顆粒間的空隙，使填料板結，柱壓上升；同時阻礙了基質上鍵合的碳鏈自由舒展，使色譜柱的保留能力下降，柱效降低。緩沖鹽析出後，去除非常困難，因此，正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要。
正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出，因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結為一句話：使用前要過濾，使用後要沖洗。具體方法如下：
1、等度條件：使用緩沖鹽前和使用後需用過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min；使用後去除緩沖鹽的另一個方法是用過渡流動相以0.2ml/min流速沖洗色譜柱過夜。
2、梯度條件：用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前，用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min，再用該過渡流動相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設定應盡量平緩，以避免梯度過程中緩沖鹽析出。
注意：過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同，區別只是過渡流動相不含緩沖鹽。
3、緩沖鹽析出的補救方法：
1）方案1：用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min
2）方案2：用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。
五、防止強保留物質在色譜柱上存留
強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積，對樣品中的化合物產生額外的保留行為，不僅引起峰型變寬、拖尾，使柱效下降，同時也會引起保留時間的變化，累積到一定程度時還會導致柱壓升高。由於強保留物質和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應，需要一定的時間才會體現出來，但對許多葯品特別是復雜樣品而言，很難判斷其是否是含有強保留物質，因此要防止強保留物質的累積，需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。
清洗方法：
1、未使用緩沖鹽：每天分析完成後，先用上述方法除去緩沖鹽，然後再用甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min。
2、使用過緩沖鹽：分析完成後，先用上述方法除去緩沖鹽，然後在用純甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min
3、補救方法：
水——乙氰——氯仿（或異丙醇）——乙氰——水
每一步以1.0ml/min流速反向沖洗色譜柱60min。
❽ 液相色譜儀是如何進行保養和維護的
轉載：《分析測試網路網》
液相色譜儀的維護與保養
液相色譜儀的維護與保養
液相色譜儀是屬於易學難用的儀器，特別講究「正確使用」和經驗。
液相工作者接觸最多的是流動相，也就是流動相，是造成液相色譜各種問題的最主要源頭。
液相色譜儀最常見的故障一是堵，二是漏。下面就這兩點分別展開討論。(註：流動相以甲醇為例，色譜柱以C18為例)
「堵」的表現現象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，最主要原因就是流動相里有雜質，雜質的主要來源就是細菌。
「堵」的原因之一：配製流動相時細菌污染。
首先我們要認識到，一般的國產甲醇其實不需要額外過濾處理，直接使用沒有問題。即使是有些固態微粒雜質，也能在液相流路系統最前端的過濾頭上排除，真正容易引起問題的，是水中的細菌。
新制備的純水在室內放置幾天就會長菌，而這些細菌雖然肉眼不可見，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙，造成柱子很快報廢。這就是在配製流動相時造成的細菌污染的原因，解決它的方法很簡單，就是確保水的可靠性。這里有兩種方式推薦：
(1)最理想的方式當然是購買實驗室專用純水機，既方便又可靠，質量也放心。唯一的缺點就是價格不菲。
(2) 成箱購買市售品牌純凈水，如500ml 一支的怡寶或娃哈哈，這些水的質量足以應付液相色譜的要求。先隨機抽取一支做一下細菌平板實驗，待菌落數合格方可使用。這樣每次只要單獨開一支即可，也很方便。每次成本2 元左右。
這里特別指出一個細節：在絕大多數書本上，凡談到配製流動相都會談到最後有一個過濾的步驟。但是從我們長期使用的實際效果來說，只要能保證水的質量，這一步完全可以也應當去除。原因有以下三點：
(1)流動相過濾在理論上有好處，但是實際操作時由於不可能做到專瓶專用，反而容易造成的交叉污染，對於配比復雜的流動相影響更大。
(2)流動相過濾在經濟成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000多元，且過濾器公認是比較容易損壞的設備。最主要是過濾片的成本太高，一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計算，過濾片的成本會遠遠高於色譜柱的成本。
(3)流動相過濾對於工作效率成本不劃算。使用溶劑過濾器有一個預清洗、裝備、使用、用後清洗，晾乾的過程，至少也有一個小時的時間。這個成本也不能忽視。
(4)在實際工作未發現流動相不過濾會對柱壽命有任何影響。我們起碼有6 年時間沒有做過流動相過濾的工作，但是和國內同行相比較，在同等使用強度下我們的柱壽命是比較長的。
「堵」的原因之二：使用流動相時的細菌污染。
指的是：流動相剛開始沒有長菌，在使用時卻產生了細菌污染。這主要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習慣造成的。
舉最簡單的例子：50%的甲醇水流動相，有兩種使用方式。一種方式是在上機前就配好混合在一起，另一種方式是在流路A放純甲醇，流路B放純水。
從單純實驗效果來說，後一種有明顯的優點：首先是簡單，不需要實驗者另個計算配比混合，其次就是比例准確，能得到保留時間重復性極好的實驗效果。
但是，它有一個致命的缺陷，就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細菌(很多情況下不僅僅用純水作流動相，而是用緩沖鹽溶液，本身就是優質肥料，細菌長得更迅速)，一旦有細菌柱子就壞得很快。所以這種方式要求操作人員每次實驗都要用新制備的純水，更要求在每次實驗後把水相換掉，換成甲醇沖洗干凈，這一點在實際工作中很多人意識不強，就是意識到了但多次使用中總有一兩次會遺漏，但是往往這一兩次就足以產生致命的影響。因為液相色譜柱的堵塞是不可逆的。
所以，寧可犧牲小小的保留時間的重復性，也不要用純水溶液作為流動相的一組。從實際實驗效果來說，我建議用10%的甲醇水代替純水溶液(以前我做過不同比例甲醇水的細菌總數實驗，在5%就基本可以抑菌，在10%及以上就可以完全殺菌了)，這樣可以有效排除長細菌的隱患，既可作流動相，也可沖柱。就算是在配製流動相時會計算得麻煩一些，但是一次麻煩，終身受益。
"堵」的原因之三：不適當操作。
常見問題的有以下幾種：
(1)在更換零件時選擇的型號有誤，介面不是很匹配，在擰緊的時候產生變形而使得管路堵塞。
(2)樣品處理液凈化得不幹凈，長期會在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。
(3)在使用手動六通閥時，有些人可能由於手勁小的原因，轉動的不到位，於是造成流路形成了死堵，壓力快速升高超過警戒值。
(4)在使用金屬管路作出廢液管時，應當注意最好廢液瓶中先放一些水，並把廢液管的出口端放在液面下。如果位於在液相上且實驗使用較高濃度的緩沖鹽溶液，在停機時可能在出口端結晶成塊並造成堵塞。這種情況不常見，但卻的確發生過。
「堵」的原因講了不少，現介紹查堵的方法。
在發生「堵」的現象後，就需要找出原因，主要是什麼位置發生了「堵」。注意，絕大多數情況下，整個系統只會有一個地方發生堵塞。
查堵的方法是從尾向前逆向分段拆開，仔細觀察壓力數值，如果某一個部件(柱子除外)裝上和拆下時的壓力差別很大，可發展變化判斷。至於柱的堵塞，可以通過換同樣規格的柱的壓力是否一致來判斷。
下面再談一下「漏」的問題。「漏」則分兩種：漏液和漏氣。
一. 漏液
液相色譜儀從流動相瓶到廢液瓶之間的流路是一個全封閉體系，內部壓力很高，但外部卻能保證一滴不漏。如果某個部件發生了漏液，那就是故障所在。
漏液的原因分兩種：
(1) 接觸硬體不當。
在更換零件如流路管或換柱時，換的接頭介面不匹配，造成漏液。要注意不同公司的柱子接頭很多是不同的，甚至同一家公司在不同時期生產的液相柱接頭也有很大區別。當然選用PEEK接頭是一個較好的解決方法，不僅通用性好，而且靠手擰就能保證不漏液。
即使是介面本身是匹配的，但是如果操作不當也會漏液，一種不當就是力度把握不好，擰得太緊或太松;另一種不當就是致命的錯誤：滑絲，這是往往是動手能力不太強，螺絲釘很少擰的工作者犯的錯誤，滑絲的後果不僅是漏液那麼簡單，常造成重要部件的報廢。解決這個問題只能靠惡補基本功來實驗，那就是擰螺絲。
(2) 使用儀器不當
如果是輸送泵漏液，最常見的原因就是在活塞位置緩沖鹽析出造成。
析出的原因有兩個，一是使用緩沖鹽溶液時突然加入了純甲醇而析出，這種錯誤很容易避免，這是盡量不要用純的甲醇和純水。只要互相有10%的比例就不會出現這個問題。另一原因是在用緩沖鹽溶液(不論甲醇含量有多少)作流動相時，實驗結束後沒有換甲醇水沖洗，使得微滲的流動相乾燥形成晶體造成。
不過，輸送泵漏液並不是非得馬上修不可，沖洗干凈並在以後的使用中多加小心一般都可以正常使用。
檢測器漏液是個很麻煩的事，一般都是吸收池的問題，更換的費用相當高。但是並不是說一定要馬上更換，還可以從實際實驗效果看能否湊合使用。
二. 漏氣
漏液是從內部向外漏，而漏氣則是外部的氣體進入液相色譜儀的流路內部形成了氣泡。下面按流路的方向逐個部件分析產生氣泡的原因和相應解決方法。
(1) 過濾頭
抽液時，在流路管中有不規則但持續的小氣泡產生，這時考慮的是流動相有沒有脫氣(需要特別提醒即使是有了真空脫氣機也是要先超聲脫氣的，起碼可以減少脫氣機的工作壓力並提高工作效率)，如果已經脫了氣，則要注意過濾頭的污染也會造成這種現象。處理方法比較簡單，擰下過濾頭在稀硝酸中浸泡，超聲半小時，洗凈後裝回去即可。
(2) 透明流路管
指的是在過濾頭和輸送泵之間的那一段管路。這一個部分往往不是有點氣泡，而經常是整個管中全是空氣而操作人員卻渾然不知，以致輸送泵工作了半天才發現流動相瓶里的液體一點也沒少。這也是我們常說的液相色譜儀至少一周要開機一次的原因(我們做液相一定要有「微滲」的概念)。如果長時間不用，這一段管路的液體會徹底幹掉，而充滿空氣的管路和充滿液體的管路不仔細看是分辨不出的。
這種情況對於輸送泵很危險，因為泵從設計來說是輸送液體而不是氣體，內部的液體對於活塞來說起到了機油的作用，如果活塞桿上還殘存了一些緩沖鹽，則極易拉傷，造成不可逆轉的影響。
對於這種情況，要突出「預防為主」如：，液相色譜使用人員要相對固定和穩定，工作中合理搭配資源，每台機一周擊至少作一次實驗，如長期不用起碼每周要沖流動相2 小時。養成良好的工作習慣很重要。
如果不慎出現了這種問題怎麼辦?我的建議是用外力使管路中充滿液體。具體如下：
1、 找到流路管進入輸送泵的接頭。
2、 擰下來。
3、 用一干凈的洗耳球的尖端對准管路的平整切口。
4、 吸液體，看液面從流動相瓶里上升，至離洗耳球5 厘米左右時停止該動作。
5、快速把接頭擰回輸送泵上(這個過程可能會有少許流動相外泄，這是正常現象)。
6、 開機，打開排液閥門，啟動輸送泵。
7、等排液管中流出的溶液沒有氣泡時，再關閉排液閥，儀器正常工作。
(3) 輸送泵和柱子
這些部分進了氣泡一般不怕，沖掉就行。
(4) 檢測器
應該說，整個流路中只要有一個氣泡都會在檢測器上得到強烈的信號反映，檢測器內部的氣泡一般都能被沖走，但也有很難沖掉的殘留氣泡的情況。
如果檢測器里有殘留氣泡，會有特徵明顯的表現形式，就是在走基線時會時不時間隔出現直上直下信號很大的信號峰。這時先看普通流量能否沖走，如果沖不走，那唯一的辦法就是拆柱，把檢測器直接連到輸送泵的出口，加大幾倍流量沖洗，則肯定能沖走氣泡。
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