A. 分光光度计是测什么的
分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析的方液基橘法。它具有灵敏度高、操作简便、快速等优点,是生物化学实验中最常用的实验方法。
分光光度计基本上量化了给定物质反射或吸收光的程度,我们倾向于认为这是更定性的。您可能认为将不透明产品描述为红色或蓝色,具有哑光或光泽的光泽。分光光度计使这种评估更进了一步,并将这些特征量化为可以测量和用于精确应用的东西,包括临床诊断、质量控制、产品设计和生化研究。
分光光度计优点
(1)显示清晰、明确的结果:通过明确的颜色测量,观看环境的差异不会影响您使用的颜色。例如,计算机屏幕设置和照明的变化可能会使颜色看起来与预期不同。即使是人闹团类感知的差异,例如色盲和眼睛疲劳,也会导致许多不同的颜色解释。通过特定的测量,这个问题就会消失。
(2)量化定性锋和特征:由于颜色样本是精确定义的,您可以告别人们对颜色的主观差异。 “栗色”对于两个不同的人来说可能是一种完全不同的颜色,但他们无法与特定的颜色测量争论。这可以改善沟通并更容易讨论工作。
B. 721紫外分光光度计能测出酒中的甲醇含量吗,如何测啊!
几种甲醇含量测定方法的比较<br>摘要:白酒中甲醇含量的测定方法包括比色法、气相色谱法、高效液相色谱法、蒸馏法等。采用气相色谱法和比<br>色法,对不同酒精度和不同甲醇含量的样品进行检测。结果表明,两种检测方法之间存在一定的差异,在实际检验过<br>程中应根据不同情况选用相应的测定方法。<br>关键词:白酒;甲醇;检测;气相色谱<br>甲醇是白酒中对人体有害的成分,为保障人体的健<br>康安全,国家发布的蒸馏酒及配制酒卫生标准中对白酒<br>中甲醇含量提出了严格的上限要求,以谷类为原料的白<br>酒中甲醇含量不得超过0.04 g/100 mL,以薯干及代用品<br>为原料的白酒中甲醇含量不得超过0.12 g/100 mL[1]。但<br>是在白酒生产发酵过程中会自然产生甲醇,同时由于甲<br>醇和乙醇的沸点接近,目前绝大部分白酒生产厂家的蒸<br>馏设备很难将其完全分离开来,所以白酒中不可避免地<br>含有一定量的甲醇。<br>目前,国内外检测酒中甲醇含量的方法主要有比色<br>法、气相色谱法、高效液相色谱法、固定化酶流动注射分<br>析法、酶电极法、激光拉曼光谱法、Fourier变换红外光谱<br>法、折射法、蒸馏法等[2]。白酒生产企业中的甲醇检测,既<br>要保证结果的准确性,又要节约检测成本,准确及时地出<br>具检测结果。因此,许多企业根据自身实际情况,选用了<br>不同的检测方法。<br>DNP气相色谱法因具有稳定性好、操作简便、检测<br>速度快、成本低等优点,在白酒企业得到广泛的应用,但<br>该法用于甲醇检测的准确度变化尚不明确;毛细管气相<br>色谱法为GB/T394.2规定的醇类测定第一法,该法具有<br>灵敏度高、分离效能和选择性好的优点,但检测所用时间<br>较长。比色法是GB/T5009.48规定的甲醇检测方法,该法<br>使用的仪器简单,但操作较为繁琐,吸光度易受温度、时<br>间等因素影响,对检验员的操作水平要求较高。本文拟就<br>上述3种方法在测定白酒甲醇时的准确性进行对比实<br>验。<br>1材料与方法<br>1.1试剂<br>甲醇(色谱纯)、无甲醇酒精、蒸馏水、高锰酸钾-磷酸<br>溶液、草酸-硫酸溶液、品红-亚硫酸溶液。<br>1.2设备<br>气相色谱(上海分析仪器厂1102型色谱仪)、气相色<br>谱(上海天美分析仪器厂7890型色谱仪)、紫外-可见分<br>光光度计(上海精密科学仪器有限公司754N)。<br>1.3方法<br>1.3.1样品的制备<br>为对比不同酒精度、不同甲醇含量的白酒按照上述3种方法进行检测时的误差情况,笔者结合目前市场上<br>常见成品白酒的酒精度分布,采用无甲醇酒精、蒸馏水配<br>制34%vol、39%vol、44%vol、52%vol 4种不同酒精度<br>样品各1000 mL,然后,将每个酒精度的样品分为4份共<br>计16个样品,再量取一定量的色谱纯甲醇分别加入到<br>16个样品中,使样品的甲醇含量分别为0.1 g/L、0.4 g/L、<br>0.8 g/L和1.2 g/L。具体样品规格见表1。</p><img class=ed_capture src="http://pic.wenwen.soso.com/p/20090920/20090920140324-704144154.jpg">1.3.2气相色谱法之一(固定相DNP)<br>选用上海分析仪器厂生产的1102色谱仪,色谱柱采<br>用填充柱,固定相为20%DNP。<br>色谱条件:载气(N2)流速为150 mL/min;氢气(H2)<br>流速为40 mL/min;空气流速为400 mL/min;气化室温度<br>为160℃;检测器温度为150℃;柱温为90℃。<br>打开N2000色谱工作站,选取正确的方法文件,吸<br>取样品1μL进样检测,检测结果见表2。<br>1.3.3气相色谱法之二(毛细管柱)<br>选用上海天美分析仪器厂7890色谱仪,色谱柱为交<br>联石英毛细管柱。<br>色谱条件:载气(N2)流速1 mL/min;氢气(H2)流速<br>30 mL/min;空气流速300 mL/min;检测器温度200℃[3],<br>柱温采用程序升温:初始温度40℃,保持3 min,升温速<br>率为5℃/min,升至100℃后保持5 min,然后升温至<br>200℃保持5 min。<br>打开N2000色谱工作站,选取正确的方法文件,吸<br>取样品1μL进样检测,检测结果见表2。<br>1.3.4比色法<br>根据试样中乙醇浓度适当取样置于25 mL具塞比<br>色管中。吸取甲醇标准使用液分别置于25 mL具塞比<br>色管中,并加入0.5 mL无甲醇的乙醇。于试样管及标准<br>管中各加水至5 mL,再依次各加2 mL高锰酸钾-磷酸<br>溶液,混匀,放置10 min,各加2 mL草酸-硫酸溶液,混<br>匀使之褪色,再各加5 mL品红-亚硫酸溶液,混匀,于<br>20℃静置30 min,用2 cm比色杯,以零管调节零点,于波长590 nm处测吸光度,绘制标准曲线比较,或与标准<br>系列目测比较。此外,还可以采用建立线性回归方程的方<br>法来计算。检测结果见表2。</p><img class=ed_capture src="http://pic.wenwen.soso.com/p/20090920/20090920140404-2022133599.jpg">2结果与分析<br>2.1甲醇含量对测定结果的影响<br>由表2可以看出,样品中甲醇含量的多少,对3种检<br>测方法有着较为明显的影响,其变化曲线见图1。</p><img class=ed_capture src="http://pic.wenwen.soso.com/p/20090920/20090920140438-931846792.jpg">从图1可明显看出,当试样中甲醇含量小于0.4 g/L<br>时(样品1~4甲醇含量为0.1 g/L、样品5~8甲醇含量<br>为0.4 g/L),3种方法的检测结果差异较小;当甲醇含量<br>大于0.4 g/L时(样品9~12甲醇含量为0.8 g/L、样品<br>13~16甲醇含量为1.2 g/L),3种方法的检测结果差异<br>较大。<br>2.2酒精度对测定结果的影响<br>酒精度对测定结果的影响也比较显著,以甲醇含量<br>0.1 g/L的样品(样品1~4)为例,3种检测方法的结果<br>见图2,其中横坐标1~4分别代表酒精度为34%vol、</p><img class=ed_capture src="http://pic.wenwen.soso.com/p/20090920/20090920140501-1579827409.jpg">39%vol、44%vol和52%vol的样品。<br>从图2可以看出,随着酒精度的增加,气相色谱法测<br>定的甲醇含量误差有增大的趋势,其中,DNP气相色谱<br>法受酒精度影响较大,毛细管柱气相色谱法次之。<br>3结论<br>3.1从检测结果看,当酒样中甲醇含量为0.1 g/L和0.4 g/L时,不同酒精度酒样,分别用3种检测方法检测<br>所得结果之间差异较小;而当酒样中甲醇含量为0.8 g/L<br>和1.2 g/L时,3种不同检测方法所得结果之间的差异较<br>大,相比而言,DNP法的检测结果误差最大,结果偏高,<br>毛细管柱次之。<br>3.2酒精度为34%vol和39%vol的酒样采用3种检<br>测方法的结果之间差异较小,而酒精度为44%vol和<br>52%vol的酒样采用3种方法检测结果之间的差异较<br>大,相比而言,DNP法的检测结果误差最大,毛细管柱<br>次之。因此,在实际检验工作中,当酒精度含量大于<br>40%vol时,不推荐使用DNP气相色谱法。<br>参考文献:<br>[1]GB/T5009.48-2003,蒸馏酒与配制酒卫生标准的分析方<br>法[S].<br>[2]李永生,齐娇娜,高秀峰.酒中甲醇测定方法的研究进展[J].酿<br>酒科技,2006,(1):84-89.<br>[3]GB/T394.2-1994,酒精通用实验方法[S].
C. 用分光光度计法测定时在什么情况下可用蒸馏水作为参比溶液
紫外分光光度计测定时,那个空白溶液或者叫做参比溶液通常——不是水回
如:要测量x溶液答中物质a的含量时,
取x溶液加y物质,然后加z物质,
另取同体积的蒸馏水,加y物质,再加z物质
空白溶液与待测液相比,外加的条件是一致的(要尽可能地保持一致),
而待测液中原来含有物质a,而空白液中不含有a
D. 甲醇的氧化反应——如何测量酒中的甲醇浓度
甲醇能氧化成甲醛,生成的甲醛与品红亚硫酸反应,进一步生成蓝紫色物质。利用生成的蓝紫色物质的颜色深浅与已知甲醇浓度的对照品春毁作比较,就可以测定出甲醇的浓度。
“五花马,千金裘。呼儿将出换美酒,与尔同消万古愁”,自古以来,醇香的美酒是很多人的大爱,但是如今劣质酒中往往含有超量的甲醇。倘若有谁知道自己杯中的“佳酿”里面的甲醇超标,再怎么嗜酒的人也会大惊失色。有数据表明,人若误饮甲醇超过10毫升即可造成失明,扒薯备而超过30毫升将危及生命。
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E. 分光光度计是测什么的
分光光度计主要是检测,黑色金属材料所含元素,以及合金元素的,化学成分的定量分析的比色法测定,有色金属材料的所含元素的化学成分的定量分析的比色法测定,以及还有稀有元素的定量分析的比色法测定,还有有机材料元素的定量分析的比色法测定。
它利用光和能量的特性来识别颜色并确定光线中每种颜色的含量冲册。分光光度计的两个主要组件是和光度计。
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器备判铅、信号处理器和显示与存储系统组成。
特点:
1、独特的双光路、双光束光学系统,仪器分辨率更高,杂散光更低,稳定性、可靠性更强,分析更加准确。
2、采用320*240位点阵式高亮6 ”液仿好晶显示器,显示清晰,信息完备。
3、独特的长光程光路设计,使仪器分辨率更高,尤其适合微量测试 强大的数据处理功能,使测试结果能得到充分的应用,用户编辑更为简单快捷。
4、采用悬架式光学系统设计,整体光路独立固定在16mm厚的铝制无变形基座上,底板的变形和外界的震动对光学系统不产生任何影响,从而大大提高了仪器的稳定性和可靠性。
5、采用同步正弦机构,波长准确度高,重复性好。
F. 白酒中的甲醇应该用什么方法检测
原理
酒中甲醇在磷酸溶液中被高锰酸钾氧化成甲醛,过量的高锰酸钾及在
反应中产生的二氧化锰用硫酸草酸溶液除去,
甲醛与品红亚硫酸作用生
成蓝紫色醌型色素,与标准系列比较定量。
品红与亚硫酸形成非醌型无色化合物,甲醛与品红-亚硫酸作用生成蓝紫色醌型色素。
三、试剂
配制。
1.高锰酸钾-磷酸溶液
称取3g高锰酸钾,加入15m1 85%磷酸溶液及70ml水的混合液中,待高锰酸钾溶解后用水定容至100ml。贮于棕色瓶中备用。
2. 草酸-硫酸溶液
称取5g无水草酸(H2C2O4)或7g含2个结晶水的草酸(H2C2O2?2H2O),溶于1:1冷硫酸中,并用1:1冷硫酸定容至100ml。混匀后,贮于棕色瓶中皮告隐备用。
3.品红-亚硫酸溶液
称取0.lg
研细的碱性品红,分次加水(80℃)共60ml,边加水边研磨使其溶解,待其充分溶解后滤于100ml容量瓶中,冷却后加10ml(10%)亚硫酸钠溶液,ml盐酸,再加水至刻度,充分混匀,放置过夜。如溶液有颜色,可加少量活性炭搅拌后过滤,贮于棕色瓶中,置暗处保存。溶液呈红色时应弃去重新
4. 甲醇标准溶液
准确称取1.000g甲醇(相当于1.27ml)置于预先装有少量蒸馏水的100ml容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀。此溶液友信每毫升相当于10mg甲醇,置低温保存。
5.甲醇标淮应用液
吸取10.0ml甲醇标准溶液置于100ml容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀。此溶液每毫升相当于1mg甲醇。
6. 无甲醇无甲醛的乙醇制备
取300ml无水乙醇,加高锰酸钾少许,振摇后放置24小时,蒸馏,最初和最后的1/10
蒸馏液弃去,收集中间的蒸馏部分即可。
7. 10%亚硫酸钠溶液
四、仪器
分光光度计
五、操作方法
甲醇标准曲线制备与样品测定管号(25ml比色管)
0 1 2 3 4 5 样
11
样
12
甲醇标准液
ml
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 - -
56度酒样ml 0.6 0.6
56度无甲醇乙醇
ml 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 - -
去离子水ml 4.4 4.2 4.0 3.8 3.6 3.4 4.4 4.4
高锰酸钾磷酸ml 2 2 2 2 2 2 2 2
混匀静置
10min
草酸硫酸溶液
ml 2 2 2 2 2 2 2 2
混匀静置燃厅使褪色冷却
品红亚硫酸溶液
5 5 5 5 5 5 5 5
混匀在20至30摄氏度静置30min 以0管为调零点,于590nm波长处测吸光度
六测定结果
管号 0 1 2 3 4 5
样11 样12
甲醇标准液ml
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 - -
酒样ml - - - - - - 0.6 0.6
甲醇含量mg
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
吸光度值
七、计算
1、绘制标准曲线,计算回归方程,计算样品管中甲醇的含量(mg)
2、计算样品中甲醇的含量(g/100ml)
X=*100*1000mv
式中:
X——样品中甲醇的含量,
g/1000ml
M——测定样品中所含甲醇相当于标准的毫克数,mg V——样品取样体积,ml
G. 分光光度计如何测量样品急急急急急急
分光光度计要测量的样品必须是均一的溶液,不能有沉淀,如果有沉淀的话就要摇匀。之于为什么这样做和可以做哪些测量、如何测量,下面详述:
分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。
而分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析。 常用的波长范围为:(1)200~400nm的紫外光区,(2)400~760nm的可见光区,(3)2.5~25μm(按波数计为4000cm<-1>~400cm<-1>)的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度,所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定,定期进行校正检定。 单色光辐射穿过被测物质溶液时,被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比,其关系如下式: 1 A=log — =ECL T 式中 A 为吸收度; T 为透光率; E 为吸收系数,采用的表示方法是(E1% 1cm),即吸收度换算成溶液浓度为1%(g/ml),液层厚度为1cm的数值; C 为100ml溶液中所含被测物质的重量,g(按干燥品或无水物计算); L 为液层厚度 ,cm。 物质对光的选择性吸收波长,以轮雀弊及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后,可用同样条件将该供试品配成溶液,测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区,除某些物质对光有吸收外,很多物质本身并没有吸收,但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多,且常使用单色光纯度较差的仪器,故测定时应用标准品或对照品同时操作。
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
分光光度计的简单原理
分光光度计计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样腊族品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
核酸的定量
核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数。如:1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样品浓度。测试前,选择正确的程序,输入原液和稀释液的体积,尔后测试空白液和样品液。然而,实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器,表现出的吸光值漂移越大。
事实上,分光光度计的设计原理和工作原理,允许吸光值在一定范围内变化,即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%(1A)。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动,都是正常的。另外,还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值,离子浓度等:在测试时,离子浓度太高,也会导致读数漂移,因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液,如TE,可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素:由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒,尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干岁团扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内,颗粒的干扰相对较小,结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低,或者过高(超过光度计的测试范围)。最后是操作因素,如混合要充分,否则吸光值太低,甚至出现负值;混合液不能存在气泡,空白液无悬浮物,否则读数漂移剧烈;必须使用相同的比色杯测试空白液和样品,否则浓度差异太大;换算系数和样品浓度单位选择一致;不能采用窗口磨损的比色杯;样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。
除了核酸浓度,分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度,如A260/A280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品,A320一般是0。
蛋白质的直接定量(UV法)
这种方法是在280nm波长,直接测试蛋白。选择Warburg 公式,光度计可以直接显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法,将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单,先测试空白液,然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质,一般要消除320nm 的“背景”信息,设定此功能“开”。与测试核酸类似,要求A280的吸光值至少大于0.1A,最佳的线性范围在1.0-1.5 之间。实验中选择Warburg 公式显示样品浓度时,发现读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上,只要观察A280的吸光值的变化范围不超过1%,表明结果非常稳定。漂移的原因是因为Warburg 公式吸光值换算成浓度,乘以一定的系数,只要吸光值有少许改变,浓度就会被放大,从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说,速度快,操作简单;但是容易受到平行物质的干扰,如DNA的干扰;另外敏感度低,要求蛋白的浓度较高。
比色法蛋白质定量
蛋白质通常是多种蛋白质的化合物,比色法测定的基础是蛋白质构成成分:氨基酸(如酪氨酸,丝氨酸)与外加的显色基团或者染料反应,产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关,从而反应蛋白质浓度。
比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry 等几种方法。
Lowry 法:以最早期的Biuret 反应为基础,并有所改进。蛋白质与Cu2 反应,产生蓝色的反应物。但是与Biuret 相比,Lowry 法敏感性更高。缺点是需要顺序加入几种不同的反应试剂;反应需要的时间较长;容易受到非蛋白物质的影响;含EDTA,Triton x-100,ammonia sulfate 等物质的蛋白不适合此种方法。
BCA(Bicinchoninine acid assay)法:这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法。要分析的蛋白在碱性溶液里与Cu2 反应产生Cu ,后者与BCA形成螯合物,形成紫色化合物,吸收峰在562nm波长。此化合物与蛋白浓度的线性关系极强,反应后形成的化合物非常稳定。相对于Lowry法,操作简单,敏感度高。但是与Lowry法相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。
Bradford 法:这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应,产生的有色化合物吸收峰595nm。其最大的特点是,敏感度好,是Lowry 和BCA 两种测试方法的2 倍;操作更简单,速度更快;只需要一种反应试剂;化合物可以稳定1小时,方便结果;而且与一系列干扰Lowry,BCA 反应的还原剂(如DTT,巯基乙醇)相容。但是对于去污剂依然是敏感的。最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大,无可比性。
某些初次接触比色法测定的研究者可能为各种比色法测出的结果并不一致,感到迷惑,究竟该相信哪种方法?由于各种方法反应的基团以及显色基团不一,所以同时使用几种方法对同一样品得出的样品浓度无可比性。例如:Keller等测试人奶中的蛋白,结果Lowry,BCA 测出的浓度明显高于Bradford,差异显著。即使是测定同一样品,同一种比色法选择的标准样品不一致,测试后的浓度也不一致。如用Lowry测试细胞匀浆中的蛋白质,以BSA作标准品,浓度1.34mg/ml,以a球蛋白作标准品,浓度2.64mg/ml。因此,在选择比色法之前,最好是参照要测试的样本的化学构成,寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品。另外,比色法定量蛋白质,经常出现的问题是样品的吸光值太低,导致测出的样品浓度与实际的浓度差距较大。关键问题是,反应后1011分光光度计的重要配件—— 比色杯的颜色是有一定的半衰期,所以每种比色法都列出了反应测试时间,所有的样品(包括标准样品),都必须在此时间内测试。时间过长,得到的吸光值变小,换算的浓度值降低。除此,反应温度、溶液PH值等都是影响实验的重要原因。此外,非常重要的是,最好是用塑料的比色法。避免使用石英或者玻璃材质的比色杯,因为反应后的颜色会让石英或者玻璃着色,导致样品吸光值不准确。
细菌细胞密度(OD 600)
实验室确定细菌生长密度和生长期,多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验,需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。OD600是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。以未加菌液的培养液作为空白液,之后定量培养后的含菌培养液。为了保证正确操作,必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数,做出校正曲线。实验中偶尔会出现菌液的OD值出现负值,原因是采用了显色的培养基,即细菌培养一段时间后,与培养基反应,发生变色反应。另外,需要注意的是,测试的样品不能离心,保持细菌悬浮状态。
分光光度计的重要配件—— 比色杯
比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积,有比色杯和毛细比色杯等。一般测试核酸和紫外定量蛋白,均采用石英杯或者玻璃杯,但是不适合比色法测定。因为反应中的染料(如考马斯亮兰)能让石英和玻璃着色,所以必须采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品。
由于另外测试的样品量不同,所以一般分光光度计厂家提供不同容积的比色杯以满足用户不同的需求。目前市场已经存在一种既可用于核酸、紫外蛋白质定量,亦可用于蛋白比色法测定的塑料杯,样品用量仅需50μl,比色杯单个无菌包装,可以回收样品。如Eppendorf UVette®塑料比色杯,是目前比色杯市场上一个革新。随着生命科学以及相关学科发展,对此类科学的实验研究提出更高的要求,分光光度计将是分子生物学实验室不可缺少的仪器,也成为微生物、食品、制药等相关实验室的必备设备之一。
随着科技的发展,现在比色杯已经不是使用分光光度计时的必备物品。目前国外Nanodrop公司(现已被Thermo Fisher公司收购)生产的ND1000分光光度计与旧式分光光度计相比,已经可以做到无需稀释样品,无需使用比色杯,每次测量仅需1-2μl样品即可完成测量。
H. 有没有一种方法是用721分光光度计来验证蒸馏水是否纯洁
水里
成分
复杂,有机物、钾钠钙镁铁
金属离子
、
氯离子
等都可能存在。对于
721分光光度计
,只能把这些物质形成特征可见颜色,才能验证,否则得不到结论。例如,用
纯净水
做参比,测得的水
吸光度
值大于零,可以证明“蒸馏水不是纯洁”的,但是如果吸光度值等于零,还不能说“蒸馏水是否纯洁”。因为,很多
离子
是无色的。
所以721分光光度计不能作为来验证蒸馏水是否纯洁的
仪器
。
实际上验证水的
纯度
采用
电导
率仪。电导越小,水越纯。
I. 紫外可见分光光度计如何使用
1、机器开关在机器的右侧,按一下就会打开,有个小的屏幕,可升神团以按数字键来操作选项,测吸光值操作。
J. 分光光度计是测什么的
分光光度计是测食品厂、饮用水厂办理QS、HACCP认证的必备检验设备。
分光光度计采用可产生多种波长的光源。通过一系列分光装置,产生特定波长的光燃稿源。光线穿过被皮咐孝测样品后,部分光线被吸收。计算样品的吸光度值并转换成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
当单色光辐射通过被测物质溶液时,被测物质吸收的量与物质浓度和液层厚度(光路长度)成正比。在可见光区,除了一些吸收光的物质外,许多物质本身并不吸收,但可以通过加入显色剂或加工使其在一定条件下显色来测定,简余因此也称为比色分析。由于显色时影响色深的因素较多,且常使用单色光纯度较差的仪器,故测定时应使用标准品或参比品同时操作。