㈠ 跑SDS-PAGE的电泳缓冲液需要什么水来配制
1.配制电泳试剂用水蒸馏水就可以了就是单蒸水,如果条件允许的话,可以只用更好的当然纯水是最好了;
2.一般实验室都会有蒸馏水,双蒸水,其实双蒸水就能满足大多数实验室的要求,纯水才是所谓的去离子水
㈡ 为什么蒸馏水作透析液比磷酸缓冲溶液作透析液的透
1.分压.例如某容器内某混合气体对某处容器壁产生的压力为a,若该气体有20%是氧气,氧气所产生内的压力叫氧容气的分压,为20%a.容器体积不变,氧气重量不变,无论是加进其它气体或抽调其它其它,氧气的分压都是那么多.反正就是那么多的东西产生那么多的压力.
2.如果有还原糖的一边是一样的,另一边是水或磷酸缓冲液,这两种情况,还原糖在膜两边的压力差是一样的.一边有若干,另一边没有.要研究水就看水的分压,要研究糖,就看糖的分压.既然压力差一样,为什么速度不一样呢?可能阻力不一样,可能其实压力差本来就不一样.
3.可溶性淀粉加唾液产生还原糖,这里有误差的,大不大呢?是不是这个原因造成的呢?要排除它,这一边改成定量的还原糖,再测一下就知道.
4.用哪一种半透膜?NaCL、磷酸缓冲液里的各种离子能不能通过?会不会影响淀粉的分解?
5.还原糖在纯水中的扩散肯定比在磷酸缓冲液中要快,(在旷野跑与在树多的地方跑,)我没做过实验,但我觉得在你的实验中,不会差得很多.
㈢ 纯净水可以当缓冲液吗
可以
除盐水能用纯净水代替配制缓冲液
化学分析中用的除盐水,能用蒸馏水代替。蒸馏水制备时的蒸馏过程,其实也是除盐过程,盐在水的沸腾过程中,不会挥发。
化学分析中用的除盐水,能用蒸馏水代替。蒸馏水制备时的蒸馏过程,其实也是除盐过程,盐在水的沸腾过程中,不会挥发。
㈣ 二、跑胶切割回收
在进行跑胶切割回收实验时,确保在跑胶的实验台上佩戴一次性手套,以防止污染,同时仅限于在跑胶实验区域内使用,避免污染其他区域。
配制1%琼脂糖凝胶时,首先使用电子天平称取0.4g琼脂粉,然后将此粉加入40ml的1*10的TBST缓冲液与100ml的三角烧瓶中,搅拌均匀后放入微波炉加热约50秒,使用锡箔纸封盖以确保完全溶解。接着,在温热状态下加入核酸酶(如Eb替代物)2ul,并持续搅拌以确保充分混合。随后,将溶液倒入电泳槽中,放入三个大孔和两个小孔的电泳槽中,并插入梳子,确保其位于红色条带下方,以便于样品的添加。冷凝20分钟后,取出胶块并放入电泳槽中,加入足够的电泳液浸过凝胶。
从冰箱中取出MARK和loading buffer,将6ULloading buffer加入样品中并充分混合,然后使用加样枪将混合后的溶液分别加入电泳槽的大孔中。确保缓慢加入以避免穿透凝胶,同时避免过量加样导致空气进入并使样品吹出。MARK应加入小孔中任意一个孔。盖上电泳槽后,确保红对红,黑对黑的极性正确,电源调至60~80V,持续40~60分钟。观察条带的形成。
切胶步骤中,将已跑出条带的凝胶转移至切胶机上,并在使用前佩戴一次性手套。打开紫外荧光并盖上滤光板,根据需要调整条带的形状,但切勿触及有条带显示的地方。将切下的凝胶放入干净无菌的EP管中,密封好。
进行胶DNA回收,使用通用型DNA纯化回收试剂盒,离心柱型。产品包含溶液PC(Buffer PC),平衡液BL(BL),漂洗液PW(PW),洗脱缓冲液EB,吸附柱CB2,收集管(2ML)。试剂在15~25℃的室温下干燥保存,若出现沉淀,可放置于37℃水浴预热至溶解。使用前检查平衡液BL是否澄清,若浑浊,可通过37℃水浴加热几分钟澄清。溶液PC含指示剂,为黄色,pH值应≤7.5。
操作步骤如下:首先,进行柱平衡步骤,向吸附柱CB2中加入500UL平衡液BL,离心1分钟,倒掉废液后重新放回收集管中。接下来,将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下,尽量去除多余部分,称取其重量。然后,向胶块中加入等体积的溶液PC(如凝胶重0.1g,则为100UL),在50℃水浴下放置10分钟,确保充分溶解。胶块完全溶解后,将溶液冷却至室温后上柱。
接下来,离心吸附柱12000rmp/1分钟,弃掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。然后,向吸附柱加入600UL漂洗液PW,并静置2~5分钟,再进行12000rmp/1分钟的离心,弃掉废液。重复上述漂洗步骤。最后,将吸附柱放回收集管中,12000rmp/2分钟离心,尽量去除残留的漂洗液。将吸附柱置于室温下放置数分钟以确保完全干燥,防止后续酶反应实验中残留的乙醇影响。
在干净的离心管中滴加适量的洗脱液EB(通常使用蒸馏水ddw),以回收DNA。滴加量不少于30UL,放置2分钟后进行12000rpm/2分钟的离心,以回收DNA。为了提高回收量,可重复离心操作。最后,将回收的DNA保存于-20℃以防止DNA降解。