离子交换树脂可以在异丙醇

A. 异丙醚的制备

工业上，可从丙烯硫酸水合制异丙醇的副产品中回收。丙烯与硫酸反应生成异丙基氢硫酸酯，然后水解为异丙醇。反应过程中，异丙基氢硫酸酯与丙烯继续反应亦生成二异丙基硫酸酯，后者与异丙醇反应生成异丙基氢硫酸酯和二异丙醚。当硫酸水合反应后的物料在解吸塔用蒸汽汽提，使异丙醇与二异丙醚从酸液中释出后，通过蒸馏，从塔顶首先获得二异丙醚。在实验室中，异丙醚可由异丙醇用硫酸脱水得到，也可由异丙醇与丙酮加氢反应来制取。还可由异丙醇与丙烯催化缩合而成。离子交换树脂法也可制取二异丙醚。

B. 细菌基因组的提取原理

一、实验原理

真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。

蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离，EDTA则抑制细胞中Dnase的 活性；而蛋白酶K可将 蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。

二、仪器及试剂

1. 仪器：

恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计（GeneQuant）、移液器、玻璃匀浆器、离心管（灭菌）、吸头（灭菌）

2. 试剂：

（1）细胞裂解缓冲液：

Tris (pH8.0) 100 mmol/L

EDTA (pH 8.0) 500 mmol/L

NaCL 20 mmol/L

SDS 10%

胰RNA酶 20ug/ml

（2） 蛋白酶K： 称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中，?C20℃备用。

（3）TE缓冲液（pH 8.0）：高压灭菌，室温贮存。

（4）酚?氯仿?异戊醇（25:24:1）、

（5）异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。

三、操作步骤

1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml 离心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μl，混匀。在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。于台式离心机以12000 rpm离心5min，取上清液入另一离心管中。

2.加2倍体积异丙醇，倒转混匀后，可以看见丝状物，用100ul 吸头挑出，凉干，用200ul TE 重新溶解。（可进行PCR反应等，需要进一步纯化的按下列步骤进行）

3.加等量的酚?氯仿?异戊醇振荡混匀，离心12000 rpm，5min。

4.取上层溶液至另一管，加入等体积的氯仿?异戊醇，振荡混匀，离心12000 rpm，5min。

5. 取上层溶液至另一管，加入1/2体积的7.5mol/L乙酸氨加入2倍体积的无水乙醇，混匀后室温沉淀2min ，离心12000 rpm ,10min。

6.小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉。

7.用1ml 70%乙醇洗涤沉淀物1次，离心12000 rpm ， 5min。

8.小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉，室温干燥。

9.加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存备用。

10.吸取适量样品于GeneQuant上检测浓度和纯度。

四、常见问题

1.选择的实验材料要新鲜，处理时间不易过长。

2.在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散，以减少DNA团块形成。

3. 提取的DNA不易溶解：不纯，含杂质较多；加溶解液太少使浓度过大。沉淀物太干燥，也将使溶解变得很困难。

4. 电泳检测时DNA成涂布状：操作不慎；污染核酸酶等。

5.分光光度分析DNA的A280/A260小于1.8；不纯，含有蛋白质等杂质。在这种情况下，应加入SDS至终浓度为0.5%，并重复步骤2～8。

6.酚/氯仿/异戊醇抽提后，其上清液太黏不易吸取：含高浓度的DNA，可加大抽提前缓冲液的量或减少所取组织的量。
基因组DNA提取方法2008-10-23 18:43制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。主要是CTAB方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法超声波法研磨法冻融法。2化学方式：异硫氰酸胍法碱裂解法3生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等

试验步骤：

1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。

2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。试验步骤2再重新作一边。

3、加入5mlDNA提取缓冲液，(10mmol/LTris-cl0.1mol/LEDTAo.5%SDS)混匀。

4、加入25ul蛋白酶K使终浓度达到100ug/ml混匀，50℃水浴3h

5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相

6、用等体积的氯仿，异戊醇抽提一次。加入等体积的5mol/L的LiCL混匀，冰浴，10min.。

7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温10min。

2500rpm离心10min。弃上清。

8、加入0.1倍体积3mol/L乙酸钠(PH5.2)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃20min。

9、12000r/min室温离心5min。弃上清。将DNA溶于适量TE中。

外周血DNA提取技术

分离外周血白细胞提取方法：

试验步骤：

1、取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10min。

2、小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml离心管中。

3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。

4、2500rpm离心10min，弃上清。

5、加入10ml溶血液，摇匀，冰浴15min。

6、3000rpm离心10min，弃上清。

7、倒置离心管，去掉残液。

8、得白细胞，－80?C冻存。

试验要求：

血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h，4℃放置不超过5h，以防白细胞自溶。

C. 口腔拭子DNA提取的方法

采样步骤说明】
1、操作前确定一次性宫颈采样拭子是独立包装完整无破损，检查细胞保存管是否有破损或漏液现象。
2、取出一次性宫颈采样拭子，调整至取样刷的圆盘处在卡口A和B之间，取样刷刷头在套管中不露出；
3、操作者握住套管的防滑纹处，将拭子（此时取样刷刷杆的圆盘处在卡口A和B之间）自阴道缓慢插入，至宫颈外口处为止（此时应该略有阻力，但不感到疼痛）；
4、单手固定住套管，将取样刷按图示方向轻推，使取样刷杆的圆盘穿过套管内部的卡口A，表明取样刷刷头已露出套管，然后再继续往里轻推约1厘米，使刷头完全露出套管并接触到宫颈外口；抵住刷柄，将取样刷以同一方向缓慢转动4-5圈，以采集到足够的宫颈细胞（注意用力要适中，太轻不能取到足够的细胞，太重可能损伤宫颈引起出血）；
5、采集完细胞后，单手固定住套管，另一只手握住刷柄按图示方向稍用力往外拉，使取样刷刷杆的圆盘退回到套管内部的卡口A与卡口B之间。
将套管和取样刷一起缓慢退出阴道
（将刷头推出套管）
6、单手固定套管，另一手按图示方向推动刷柄，使取样刷杆的圆盘穿过卡口A,暴露刷头于套管外直至露出刷头端的凹槽处（注意刷头不要接触到其他物体）；
（产品性能为收集病毒标本）
7、打开与取样器配套的细胞保存管（装有2ml易挥发细胞保存液），将刷头浸入液面，固定瓶身，充分搅动10次以上，以使采集的标本完全释放在细胞保存液中（如不慎沾液，用清水冲净即可）；
（折断刷头）
8、单手固定细胞保存管，按图所示，从刷头端的凹槽处折断自取样刷，保留刷头在细胞保存液内，拧紧细胞保存管的管盖，丢弃刷柄及套管部分。

D. 哪些合成树脂溶于异丙醇

各种氨基树脂、部分丙烯酸树脂能溶于异丙醇

E. 二异丙醚的合成方法

1、工业上，可从丙烯硫酸水合制异丙醇的副产品中回收。丙烯与硫酸反应生成异丙基氢硫酸酯，然后水解为异丙醇。反应过程中，异丙基氢硫酸酯与丙烯继续反应亦生成二异丙基硫酸酯，后者与异丙醇反应生成异丙基氢硫酸酯和二异丙醚。当硫酸水合反应后的物料在解吸塔用蒸汽汽提，使异丙醇与二异丙醚从酸液中释出后，通过蒸馏，从塔顶首先获得二异丙醚。在实验室中，异丙醚可由异丙醇用硫酸脱水得到，也可由异丙醇与丙酮加氢反应来制取。还可由异丙醇与丙烯催化缩合而成。离子交换树脂法也可制取二异丙醚。
2、将异丙醇和浓硫酸混合，加热使之回流，边回流边分出反应生成的水，当水不再生成时，反应结束：
降温后， 将反应液倒入冷水， 静置分层，弃去水层。油层先经水洗除去未反应的醇， 然后加入高锰酸钾溶液， 除去烯烃并水洗， 用硫酸亚铁水溶液除去过氧化物后水洗， 再用氢氧化钠溶液中和所含的酸后用水洗至中性， 静置分层， 弃去水层， 醚层用无水氯化钙干燥脱水， 滤去固体干燥剂后， 常压蒸馏， 收集67～69℃的馏份， 即为成品异丙醚。高纯异丙醇可采用含70%异丙醇的废水溶液， 先与苯共沸蒸馏， 除去水分， 冷却后经孔径为0.8μm、0.45μm和0.2μm的三层聚四氟乙烯膜过滤所得。产品中含99.9%的异丙醇、 0.1%的水、0.4×10-6 Ca和0.01～0.09×10-6的其他阳离子杂质（ 如 K、Mg、Cr 、Fe和Na） 。

F. 异丙醇能做油漆稀释剂用吗，对树脂有没有溶

下午好，IPA可以做油漆的稀释剂但是种类很有限，它只适合稀释含有羟基或内者醇溶性树脂，可以溶容解的树脂有一部份羟基丙烯酸树脂、PVB、硝基、醛酮树脂和环氧树脂如E44、E51等等，不能稀释PU（发生化学反应使PU单体报废）、PA、醇酸和几乎全部石油树脂比如松香甘油酯、C5C9、萜烯和古马隆（而且上面的硝基和环氧中，它也不是良溶剂之一，只能有限比例开稀，有最大使用量）。相比甲醇和乙醇，IPA对油脂的溶解性增强，但仍不及常见的酯、醚、酮和芳香烃，它对非极性高聚物的溶解力十分有限，而且有一定吸水性，请酌情参考。