树脂切片经验

㈠ 捞取切片，有3种方法，该如何选择合适的捞片方法

切树脂切片，切片比较大，用perfectloop捞片，非常方便；

当切割金属样品或其它无机固体材料等样品，往往切片较小，建议用铜网从水面上直接捞片，注意铜网尽量要保持与水面平行，平行向下捞取切片，否则切片可能会堆积到铜网一侧，而切片小，如用perfectloop捞片圈捞片，小切片可能会跑到边上去；但是如果切片样品是树脂包埋的颗粒物，如果颗粒物质比较重，则可能会发生切片中树脂部分被铜网捞起，而颗粒物没被捞起并沉到水槽中的情况；

因此有时使用铜网从水面下直接捞片，但使用该方法铜网必须要亲水化。亲水化使用镀膜仪当中的glow-discharge功能即可。将铜网亲水化，不论是上捞取，还是下捞取方法，切片在铜网上都表现为更平整

㈡ 怎样用中性树脂封片

晾干后滴在上面两滴中性树脂然后放盖玻片，轻压盖玻片让液滴充满整个玻片，然后晾干，最好晾一个星期再看，不然容易脱落。当然不用油镜的话应该就不用晾那么久了。

㈢ 超薄切片技术操作过程是什么

观察病毒在细胞组织内的状态，可采取超薄切片技术，将标本用固定液固定后，经过脱水渗透包埋聚合切片等过程，切成薄片然后染色检镜。

（1）固定。

常用的固定液主要有锇酸固定液、醛固定液、高锰酸盐固定液等。

①锇酸固定液：这是最常用的固定液，作用迅速，新鲜的锇酸呈浅黄色，其蒸气极毒，使用时应在强通风柜中把装有锇酸的安瓿瓶在缓冲液内敲碎。

②醛固定液：植物材料具有厚壁，锇酸固定液不能很好渗透，有时固定得不好。而醛固定液往往可获得较好效果，同时还不会破坏酶的活性，可以在切片上进行组织化学测定。常用的有甲醛固定液和戊二醛固定液。

③高锰酸盐固定液：此种固定液可保持膜的结构，但破坏核糖体并失去酶的活性，对维持TMV粒子在细胞内的排列比戊二醛及锇酸固定液好。

缓冲液可用1%液体锇酸和1%过锰酸钾，也可用磷酸盐巴比妥-醋酸和二甲胂酸盐缓冲液。固定可在0～5℃或室温下进行，供试材料尽可能使用幼嫩的植株，小的根可整个固定，叶片需剪成1～2cm的小块。叶中的空气会阻止固定液与大部分细胞接触，可在真空下把空气除去。

组织固定后必须彻底冲洗，在进行锇酸固定前要把多余的醛用缓冲液冲洗彻底。固定后的组织一定要进行脱水，特别是采取不溶于水的树脂包埋时，在室温低于4℃时，丙酮或乙醇脱水效果都很好。

（2）包埋。

包埋用的树脂可分为四类，即甲基丙烯酸酯、环氧树脂、聚酯树脂和各种水溶性化合物。

甲基丙烯酸酯在聚合过程中可能引起组织损伤，在电子束轰击下，这种介质有升华的趋向，引起细微组织结构的破坏。但甲基丙烯酸酯也有优点，它比环氧树脂能切出较大的切块切面，切片也容易染色。

环氧树脂和聚酯树脂是保存细胞细微结构的最好包埋材料，目前最常用的环氧树脂是Epon和Araldite，用它包埋的标本可避免聚合损伤，树脂切片在电镜下不升华，可使标本连续观察，并保存细微结构。

水溶性树脂剂对一些不希望用有机溶剂脱水，或利用组织切片做酶外处理试验特别有用，其缺点是不能很好地保持细胞的细微结构。

组织需在包埋介质中充分渗透，常用的有两种方法：

①环氧树脂包埋组织的渗透。将丙醇脱水的组织转到装有6ml由等量丙酮和环氧树脂的标本管中，将标本管放在烤箱内由倾斜45°角的马达带动的轮上，使其不断转动，丙酮由开口的管中蒸发，当丙酮味消失后，将组织在擦镜纸上吸干，浸入新鲜的树脂中，再于同一温度下放4h，再一次吸干组织后，移到装有新鲜树脂的胶囊内，将Epon块放在40℃下，直至完全变硬，并继续在60℃下凝固12h。

②水溶性树脂包埋组织的渗透。将组织在戊二醛中固定，在缓冲剂中冲洗1～12h，然后在80%GMA单体和20%的水中脱水20min，再于97%GMA单体和3%的水中继续脱水20min后，在制备的聚合混合物中渗透过夜。将组织放在烘炉内的明胶胶囊中，注满聚合混合物除去所有空气泡，盖好使其不使与空气接触，把胶囊用金属丝垂直吊起，用长波长的紫外光聚合1～3d即可。

（3）切片。

切片前切去埋块四周的树脂，留下高2～3mm的标本正方柱，装入切片机，使埋块面的平行边与刀口平行，把刀慢慢向标本推进，通过切片机上的目镜系统，把刀推到看不到有间隙之处，每次推进0.5～1.0μm，直到切下切片。切片厚度以能达到浮于液面的切片呈灰色为最好。切片可用醋酸双氧铀和柠檬酸铅进行染色。染色后的切片在0.1N氢氧化钠中冲洗，然后用水冲洗。

㈣ 聚酯切片的生产方法

PTA法连续工艺主要有德国吉玛(Zimmer）公司、美国杜邦公司、瑞士伊文达（Inventa）公司和日本钟纺（Konebo）公司等几家技术。其中吉玛、伊文达、钟纺技术为5釜流程，杜邦则开发了3釜流程（目前正在开发2釜流程），两者缩聚工艺基本相似，区别在于酯化工艺。如5釜流程采用较低温度及压力酯化，而3釜流程则采用高乙二醇（EG)/PTA摩尔比和较高的酯化温度，以强化反应条件，加快反应速度，缩短反应时间。总的反应时间为5釜流程10小时，3釜流程3.5小时。当今世界大型聚酯公司都采用集散型（DCS）控制系统进行生产控制和管理，并对全流程或单釜流程进行仿真计算。
2003年初，伊文达-费希尔（Inventa-Fisher)(I-F）公司公布了其聚酯生产流程和能耗。该工艺从PTA或DMT与乙二醇（EG）反应生产树脂级或纺织级聚酯。采用4釜（4R）工艺，由PTA和EG或熔融DMT和EG组成的浆液，进入第一酯化/酯交换反应器，反应在较高压力和温度（200～270℃）下进行，生成的低聚物进入第二串级搅拌式反应器，在较低压力和较高温度下进行反应，反应转化率大于97%。然后在低于常压和较高温度下，藉第3台串级反应器预聚合，缩聚程度大于20，经第4台DISCAGE精制器后，使最终缩聚物的特性粘度（i.V.）提高到0.9。能耗为：电力55.0 kwh/t，燃料油61.0kg/t，氮气0.8m3/t，空气9.0m3/t。采用该工艺已建有50多套装置，其中13条生产线能力为100～700吨/天。现已有单系列700吨/天生产线投运。