大肠杆菌滤膜法过滤设备

1. 宝宝腹泻，检查是大肠杆菌，如何针对大肠杆菌做好治疗

刘女士周末带着两岁的宝宝到郊外牧场进行参观游玩，中午在牧场用餐之后，宝宝出现了严重腹辩渗泻现象，孩子哭闹不止，刘女士带孩子到医院进行检查，医生说孩子可能是感染了大肠杆菌，需要使用抗生素来控制感染， 什么是大肠杆菌感染呢？如何对大肠杆菌进行检测来做好治疗？

大肠杆菌大部分附着在人和动物的肠道中，且会伴随着人和动物肠道的排泄物粪便排出体外，分散到自然环境中。有一小部分的大肠杆菌是有毒性的。大肠杆菌感染是引起腹泻的主要原因，因此采用先进的方式，快速地对大肠杆菌进行检验是提升食品安全的有效途径，也是保障人们生命安全的重要措施。

1、 大肠杆菌感染的定义

大肠杆菌的感染主要分为肠道内感染和肠道外感染，引起肠道感染的大肠杆菌群主要是通过污染的食物进入口腔而导致的， 它主要会引起腹泻的症状，严重的会导致患者脱水和血压下降，例如婴幼儿会发生流行性的腹泻， 旅游 者会发生腹泻，都携桐脊是因为受到了大肠杆菌的感染引发的疾病。

肠道外的疾病主要是因为外部肝脏化脓和炎症引起的， 例如尿道感染、新生儿脑膜炎等，都会引发肠道外感染，肠道外感染后，人体的症状大部分是抵抗力下降或者是外伤，这些通过相关的肠道手术或者抗生素都可以对感染进行控制，但是一定要对大肠杆菌进行检测，这就需要了解相关的检测方法。

2、 大肠杆菌的检测方法

①首先多管发酵法， 就是根据大肠菌群能够发酵乳糖产酸产气的特性，可以在 45 左右的培养基上进行一天的菌群培养，这样将可以释放出荧光产物使培养基在紫外线的光源照射下发生荧光反应，这种方法就能检测出样本是否含有大肠杆菌。但是因为这样的方法非常简单，就很容易受到其他因素的干扰，影响结果的准确性；

②滤膜法是一种非常普遍的检测水中大肠杆菌的方式， 就是在一定的水体样本中注入滤膜过滤，经过过滤，就会将水中的细菌留在滤膜上，将滤膜放在专业的培养基上培养，一天时间，也就是 24 小时，保持温度在 37 ，发酵之后的大肠杆菌产生乳糖会使得滤膜呈现出紫红色，然后通过计算得出大肠杆菌的数量，这样的方法虽然费用低廉，原理简单，但是其检测的时间比较漫长，步骤繁琐，经过长期的培养之后，还要进行数据计算，因此只适用于少量的数据的分析；

③平板计数法这种方法是统计含菌数量的有效方法。 对分析的样本进行稀释，然后把其中的微生物分散成单个的个体，取出一定量的溶液进行培养，让其可以生长成为能被肉眼所看到的菌落，然后通过稀释液体的浓度含量和样本的数目来计算菌数，但是由于测量的样品是不一样的，因此长成的菌落也是不同的，需要的时间也是不同的，这样的计算结果不具有代表性，而且效率很低；

④大肠杆菌还可以通过细菌分离鉴定来进行检测， 首先要对感染者的尿液、血液、粪便进行取样，粪便标本可以直接接种肠道杆轮族菌，血液先经过增菌再转种血琼脂平板同时和其他肠道杆菌选择培养，在 37 的环境下，培育 24 小时之后，再用观察菌落的染色片进行显微镜观察，这样才能最后确定是否是大肠杆菌，通过对粪便中的细菌总数进行检查，当发现粪便中的细菌总数超过 100，就说明存在大肠杆菌感染；

⑤以上说的几种方法都是需要一定的时间，而且效果不是特别明显。 在现代生物 科技 发展快速的今天，有很多快速检测大肠杆菌的方法， 首选 PCR 检测技术，它的全称是聚合酶链式反应，是体外酶促成特殊的 DNA 片段的一种方法。最快的在 2 个小时之内就能通过对大肠杆菌荧光定量的方法检测出大肠杆菌的含量。

这个方法操作非常简便，节省时间，但是它也存在着缺点，就是在核酸纯化的过程中会出现一些额外的产物，这样就会造成误差，对结果产生一定的影响，但是不会有特别严重的影响；

⑥然后就是基因芯片技术，基因芯片技术是对基因和一些程序运用来对大肠杆菌中的核酸物质进行高效快速的分析方法 ，它将各种基因放置在芯片表面，通过检测之后检测出大肠杆菌的数量。但是这种方法所使用的仪器设备价格高昂，而且在对大肠杆菌进行检测后，检测物也会造成污染，因此当前在我国这种技术还没有进行大规模的使用；

⑦ DNA 探针技术被称为是分子杂交技术， 它的原理是利用了 DNA 分子的变化性能来对大肠杆菌进行分析，一般有同位素检测方法和非同位素检测方法，但是其同位素检测方法，因为标记因素具有一定的放射性，会对人体产生危害，对食品的检测是不太适用的。可以采取非同位素标记的方法来对人体或食物中的大肠杆菌进行检测，这种方法是很便捷的，但是 DNA 探针技术因为操作的复杂性，所以很多只能在实验室内进行，就具有局限性；

⑧免疫分析检测技术， 它的原理是利用了抗原和抗体之间产生反应作为基础的。首先就是免疫荧光技术，通过直接标记特异荧光抗体和间接对检测样品滴加抗体溶液的方式来进行检测，这种方法检测大肠杆菌速度快，结果准确，非常适合在现实生活中应用；

⑨最后是代谢学的快速检测技术， 主要对细菌的代谢物体进行相应的检测，然后分析判断是否有大肠杆菌。

以上的这些检测大肠杆菌的方法都是需要联合来使用的，因为单独使用，他们都会存在一定的误差，只有彼此联合使用，才可以准确地对大肠杆菌进行检查，然后得出准确的结果。

3、 怎样预防大肠杆菌感染

大肠杆菌会对人们的身体造成伤害，而且检测的方法也非常的繁琐，因此怎样通过有效的手段去预防和减少大肠杆菌感染呢？

首先在准备制作食物的时候要注意卫生，尤其是在烹饪的时候，一定要进行彻底清洁，同时饮用水也一定要煮沸，防止烹饪的水和食物出现相关感染。其次在公共场所进行游泳的时候也应该有相关的防范意识，在离开游泳池后要进行淋浴，这样可以减少感染的机会，要养成卫生的好习惯，要定时洗手，保持双手的洁净，尤其是上完厕所之后。

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2. 求 滤膜法测大肠杆菌的方法

简单版：
取样，将这一定量的水通过滤膜，将膜铺在适宜大肠杆菌的培养基上，在适宜的环境下培养，得到的大肠杆菌菌落个数就是这些水中的菌体数，样品中的按比例放大就行了

专业版：
1. 消毒设备按照产品使用说明操作，待设备运转正常后，取水样进行消毒效果检验。消毒剂发生器按照产品使用说明书操作，待设备运转正常后，在出口处采集样品，按说明书规定的有效剂量稀释后，进行消毒效果检验。消毒剂按产品使用说明书稀释配制水样。2. 细菌加标操作程序(1) 在脱氯自来水中加入大肠杆菌，实验用菌种为大肠杆菌8099。加标量为>5×100-2×1000/100ml。(2) 将装有加标菌水样的三角烧瓶放入恒温水浴箱(20℃)中，开动磁力搅拌器5min，使细菌在水中分布均匀。先取2份细菌加标的水样，进行大肠杆菌活菌计数(阳性对照组)。(3) 待水温恒定后按说明书规定的最小剂量加入消毒剂，迅速搅拌均匀，从加入消毒剂起计时。设定3个工作时间，说明书规定的最短作用时间为T，3个作用时间分别为0.5T，T和1.5T，作用后分别吸取水样，注入装有中和剂(如硫代硫酸钠)无菌三角烧瓶中，以终止消毒作用。 对饮用水消毒处理器和消毒剂发生器应根据消毒产物的产生量及处理水最高流量进行加标采样。(4) 将中和的水样，分别取100ml、10ml、1ml各两份，用滤膜法进行大肠菌活菌计数。(5) 将未接种大肠杆菌的试验用同批培养基平板2个，置温箱中培养(阴性对照组)。试验重复三次。3. 上述试验同时，测定消毒成分和剂量，记录作用时间和水温。4. 结果评价消毒后水中大肠菌群指标应符合《生活饮用水水质卫生规范》规定5．√－ 必需测定项目 ； △ －如含有，需测定http://szbbs.soufun.com/2810026793~-1/23633781_23633781.htm

水中大肠菌群检验方法的改进
晁福环;芮期义;王新为;高明;欧阳川
<正> 水中细菌,包括致病菌与指标菌,因受自然条件或水处理过程的影响可以形成生理上存在缺陷,这些细菌称为损伤菌。损伤菌在适宜条件下仍可发育成正常菌落,可是直接暴露于含有抑制剂的选择性培养基时就不易生长。因此,现有远藤培养基滤膜法有可能使大肠菌检
【作者单位】：军事医学科学院卫生学环境医学研究所;军事医学科学院卫生学环境医学研究所;军事医学科学院卫生学环境医学研究所;军事医学科学院卫生学环境医学研究所;军事医学科学院卫生学环境医学研究所 300050 天津;300050 天津;300050 天津;300050 天津;300050 天津
【DOI】：cnki:ISSN:1004-8685.0.1991-01-021
【正文快照】：
水中细菌,包括致病菌与指标菌,因受自然条件或水处理过程的影响可以形成生理上存在缺陷,这些细菌称为损伤菌.损伤菌在适宜条件下仍可发育成正常菌落,可是直接暴露于含有抑制剂的选择性培养基时就不易生长.因此,现有远藤培养基滤膜法有可能使大肠菌检出菌数偏低,影响水质卫生学评价的准确性。为提高检出率,本文在水中大肠菌损伤状况及生长特点研究的基础上,对现用远膝培养基进行了改进研究. 一、天然水及经不同条件处理后水中大肠菌损伤状况见表l、2.裹l不同条件处理后水中大肠,抓伤状况实较条件翻伤和.。,卜飞,了气P侧价与脚脚日)‘t习分钟…
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-ZWJZ199101021.htm

1 材料 呋喃唑酮片（地产及市售，规格0．10g／片），混合纤维素酯微孔滤膜，孔径规格0．45μm、1．2μm、3．0μm，大肠杆菌CMCC（B）〔4〕、胆盐乳糖增菌液（BL）、伊红美蓝琼脂（EMB）及大肠杆菌生化反应用培养基均由中国药品生物制品检定所提供。

2 方法和结果 供试液先经离心，取上清液依次经过孔径为1．2μm或3．0μm的微孔滤膜和0．45μm的微孔滤膜过滤后取0．45μm的滤膜加入BL中增菌。
2．1 由于呋喃唑酮几乎不溶于水，故选用一次离心法、二次离心法和离心-滤膜法〔1，2〕以及离心-双重滤膜法进行方法比较，结果表明只有离心-双重滤膜结合法能确保阳性菌的检出。

表1 不同方法阳性菌的检出试验结果

方法 BL增菌48h EMB平板分离 大肠杆菌
检出结果
一次离心法 微混 未长菌落 未检出
二次离心法 澄清 未长菌落 未检出
离心-滤膜法 澄清 未长菌落 未检出
离心-双重滤膜法 混浊、产气 典型的大肠
杆菌菌落 检出

2．2 人工污染呋喃唑酮片大肠杆菌的检出情况 选用8批样品加入大肠杆菌进行人工污染5d后，采用离心-双重滤膜法进行检验，结果表明8批均能检出。
表2 人工污染大肠杆菌的阳性检出情况

药品
批次 BL增菌
48h EMB
平板分离 大肠杆菌
检出结果 检出率
％
8批 8批出现混
浊、产气 8批呈典型菌落 8批检出 100

注：上述EMB平板分离的典型菌落均经生化反应确认检出大肠杆菌
3 讨论

3．1 虽然呋喃唑酮在水中的溶解仅达40mg／L〔3〕，但由于呋喃唑酮在BL增菌液中的最低抑菌浓度即MIC为0．01mg／L〔4〕，采用一次离心、二次离心法均未能使BL增菌液中的浓度低于0．01mg／L，采用2次离心-滤膜法，则由于供试液经孔径0．45μm滤膜过滤时残留呋喃唑酮，当加入BL增菌液后，呋喃唑酮的浓度仍高于MIC，因此大肠杆菌仍无法繁殖，而本文采用的离心-双重滤膜法，既能除去水中溶解的微量呋喃唑酮，又能把离心后上清液残留的呋喃唑酮截留在孔径1．2μm或3．0μm的滤膜上，最大程度地降低孔径0．45μm滤膜上的呋喃唑酮，也降低了BL增菌液中的呋喃唑酮浓度，所以大大提高了阳性检出率。
3．2 人工污染大肠杆菌5d仍能检出，说明离心-双重滤膜法检验过程中不影响大肠杆菌在BL增菌液中的繁殖，能有效地保证样品的阳性检出率。
3．3 离心-双重滤膜法能在很大程度上解决难溶于水的抗菌剂在BL增菌液中的浓度，故对今后开展口服抗生素控制菌的检验具有较高的参考意义。
3．4 因埃希氏杆菌属的菌体，直径为0．4～0．7μm，长度为1．0～3．0μm，笔者认为采用3．0μm孔径的滤膜比1．2μm的滤膜可使实际检验效果更佳。同时，笔者也认为选择何种规格的滤膜可因样品而异，这方面还有待进一步深入探讨。http://www.wanfangdata.com.cn/qikan/periodical.articles/haixyx/haix99/haix9903/990393.htm

3. 大肠杆菌普通净水器可以过滤吗吗

家用净水器的功能就是过滤水中的漂浮物、重金属、细菌、病毒、余氯专、泥沙、铁属锈、微生物等。

大肠杆菌的传播途径：

1. 通过食物传播

2. 通过水传播

3. 密切接触传播

预防方法：

1. 保持地方及厨房器皿清洁，应该经常使用消毒柜消毒餐具。
2. 保持双手清洁，经常修剪指甲。
3. 食水应采用自来水，并最好煮沸后才饮用。
4. 避免进食高危食物，比如未经低温消毒法处理的牛奶，以及未熟透的汉堡扒、碎牛肉和其它肉类食品。
5. 易腐坏食物应用盖盖好，存放于冰箱中。

4. 农村饮水中含有大肠杆菌，有毒用什么过滤器。

大肠杆菌可以用化学杀菌剂或者煮沸来清除，过滤要0.22um滤膜过滤，过滤器我觉得太难了，毕竟是细菌。

5. 反渗透设备可以去大肠杆菌吗

反渗透设备是将抄原水经过精细过滤器、颗粒活性碳过滤器、压缩活性碳过滤器等,再通过泵加压,利用孔径为1/10000μm(相当于大肠杆菌大小的1/6000,病毒的1/300)的反渗透膜(RO膜),使较高浓度的水变为低浓度水,同时将工业污染物、重金属、细菌、病毒等大量混入水中的杂质全部隔离，从而达到饮用规定的理化指标及卫生标准,产出至清至纯的水,是人体及时补充优质水份的最佳选择.由于RO反渗透技术生产的水纯净度是目前人类掌握的一切制水技术中最高的,洁净度几乎达到100%,所以人们称这种产水机器为反渗透纯净水机。 反渗透设备应用膜分离技术，能有效地去除水中的带电离子、无机物、胶体微粒、细菌及有机物质等。是高纯水制备、苦咸水脱盐和废水处理工艺中的最佳设备。广泛用于电子、医药、食品、轻纺、化工、发电等领域。
可以去除，以上是参考资料

6. 五级滤芯的过滤器可以过滤大肠杆菌吗

可以。四级就可以除去大肠杆菌，五级更优化。一般净水机可有五级不同功能滤芯过滤：
1、第一级：对原水进行初过滤，用来去除水中较粗颗粒杂质、污泥、胶体、悬浮物质等。
2、第二级：针对水中异味、异色进行吸附作用。
3、第三级：去除氯、有机化合物、恶臭、异味、浊度。
4、第四级：以矽硅土烧结而成，用过滤去除杂质，用载银活性碳抑止细菌再生繁殖，去除霍乱、痢疾、大肠杆菌、酚、三卤甲烷。
5、第五级：调节纯水的PH值、改善口感。

7. 大肠杆菌怎么培养的

大肠杆菌一般培养方法

使用牛肉膏蛋白胨培养基
组成成分：牛肉膏 3g,蛋白胨 10g,Nacl 5g,琼脂 15～20g,水1000mL,PH7.4～7.6。
具体配置步骤：
1.称药品 按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中.牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放入热水中,牛肉膏使与称量纸分离,立即取出纸片.蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速.
2.加热溶解中物卜 在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量.若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中,再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失的水分.
3. 调pH 检测培养基的pH,若pH偏酸,可滴加lmol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH范围.若偏碱,则用lmol/L HCl进行调节.pH的调节通常放在加琼脂之前.应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度.
4.过滤 液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利培养的观察.但卖穗是供一般使用的培养基,这步可省略.
5.分装 按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内.分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染. 分装量:固体培养基约为试管高度的l/5,灭菌后制成斜面.分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜.半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.
6.加棉塞 试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞.棉塞的形状,大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用.要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内,以防棉塞脱落.有些微生物需要更好的通气,则可用8层纱布制成通气塞.有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞.
7.包扎 加塞后,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞.若培养基分装于试管中,则应以5支或7支在一起,再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎好.然后用记号笔注明,培养基名称,组别,日期.
8.灭菌 将上述培养基于121.3℃湿热灭菌20min.如因特殊情况不能及时灭菌,则应故人冰箱内暂存.
9.无菌检查 将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h,无菌生长即可使用,或贮存于冰箱蚂巧或清洁的橱内,备用.
大肠杆菌的培养：
37摄氏度，恒温培养48到72小时，因为接种时和具体培养条件的不同，其生长一般都在2天外才能长出明显的菌落。
菌落特征：乳白色，圆形，菌落边缘整齐，表面光滑，表面和背面颜色一致

8. 如何鉴定大肠杆菌

1、发酵法

这种方法主要是在44.5℃下的培养基上进行大肠杆菌的培养，该培养基含有荧光底物，需要培养 24 h。然戚汪后对荧光底物进行释放，需要采用葡萄糖醛酸进行，让培养基能够在紫外光的照射下发出荧光。

采用这样的方式方法，还可以进行统计学估计原来样品中的菌落。盯罩主要步骤包括发酵、分离培养、二次发酵、显微镜观察等 。

2、滤膜法

该方法主要过程：加入 10 mL 左右的无菌水于滤器中，然后掺入一些无菌水进行清洁滤器的内壁，再进行过滤，将滤凯仔闹膜放在 M-FC 培养基中，两者之间不能够有气泡，然后进行密封，存放温度为 44.5℃，存放时间约 24 h，直到大肠杆菌的菌群变成蓝色或蓝绿色。

然后记录数据，估算每一单位的水溶液菌群数量，然后进行大肠杆菌量值的换算 。

(8)大肠杆菌滤膜法过滤设备扩展阅读：

大肠杆菌是短杆菌，两端呈钝圆形，革兰阴性。有时因环境不同，个别菌体出现近似球杆状或长丝状 ；大肠杆菌多是单一或两个存在，但不会排列呈长链形状。

大多数的大肠杆菌菌株具有荚膜或微荚膜结构，但是不能形成芽孢；多数大肠杆菌菌株生长有菌毛，其中一些菌毛是针对宿主及其他的一些组织或细胞具有黏附作用的宿主特异性菌毛 。

生化特性

大肠杆菌在常用的生化特性检测项目中，甲基红试验呈阳性，吲哚产生和乳糖发酵是阳性（个别菌株表现阴性），维-培试验是阴性，尿素酶和柠檬酸盐利用呈阴性（极个别菌株表现阳性），硝酸盐还原试验表现阳性，氧化酶表现阴性，氧化-发酵试验表现为F型

9. 滤膜法测大肠杆菌的培养基

（1）过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，这些实验仪器都需要经过灭菌处理，与过滤有关的操作都要在酒精灯火焰旁进行，防止杂菌的污染．
（2）待测水样过滤完之后，还有部分细菌吸附在滤杯杯壁上，此时可以在无菌条件下，用无菌水冲洗滤杯，再次过滤，将这部分细菌也尽可能集中到滤膜上．
（3）将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，属于微生物培养中的接种操作．从功能上看，该培养基中含有伊红美蓝，因此EMB培养基属于鉴别培养基．
（4）无菌操作下将90ml无菌水加入到10ml待测水样中，这样就将待测水样稀释了10倍；根据大肠杆菌鉴定的原理可知，黑色菌落为大肠杆菌，因此1升待测水样中的大肠杆菌数目=5×（1000÷10）=500个．
（5）若要测定待测水样中酵母菌的数目，酵母菌属于真核生物，大肠杆菌属于原核生物，真核细胞的直径比原核细胞大，因此应更换上述过滤装置中的滤膜，选择孔径更大的滤膜．
故答案为：
（1）滤杯、滤膜和滤瓶
（2）无菌条件下用无菌水冲洗滤杯，再次过滤
（3）接种 鉴别
（4）10 500
（5）更大

10. 养大肠杆菌的具体步骤

大肠杆菌（Escherichia coli），又叫大肠埃希氏菌，Escherich在1885年发现的。

养大肠杆菌的方法和具体步骤：

1、发酵法，这种方法主要是在44.5℃下的培养基上进行大肠杆菌的培养，该培养基含有荧光底物，需要培养 24 h。

然后对荧光底物进行释放，需要采用葡萄糖醛酸进行，让培养基能够在紫外光的照射下发出荧光。主要步骤包括发酵、分离培养、二次发酵、显微镜观察等。

2、滤膜法主要过程：加入 10 mL 左右袭丛的无菌水于滤器中，然后掺入一些无菌水进行清洁滤器的内壁，再进行过滤，将滤膜放在 M-FC 培养基中敏亩，两者之间不能够有气泡，然后进行密封，存放温度为 44.5℃，存放时间约 24 h，直到大肠杆菌的菌群变成蓝色或蓝绿色。

(10)大肠杆菌滤膜法过滤设备扩展阅读：

大肠杆菌是动物肠道中的正常寄居菌，其中很小一部分在一定条件下引起疾病 。

大拍拿樱肠杆菌的血清型能够引起人体或动物胃肠道感染，主要是由特定的菌毛抗原、致病性毒素等感染引起的，除胃肠道感染以外，还会引起尿道感染、关节炎、脑膜炎以及败血型感染等大肠杆菌是短杆菌，两端呈钝圆形，革兰阴性。

有时因环境不同，个别菌体出现近似球杆状或长丝状
；大肠杆菌多是单一或两个存在，但不会排列呈长链形状；大多数的大肠杆菌菌株具有荚膜或微荚膜结构，但是不能形成芽孢。

多数大肠杆菌菌株生长有菌毛，其中一些菌毛是针对宿主及其他的一些组织或细胞具有黏附作用的宿主特异性菌毛。