反相色谱为什么不能用纯水

① 苯基键合硅胶色谱柱柱为什么不能用纯水冲洗

这个问题比较难回答。因为注意的东西比较多，比如：
首先是色谱柱的方向问题。大多数色谱柱会标明方向。这个傻子都知道，安装的时候要顺着方向安装。不过也有一些色谱柱没有方向，这些是双相填料的色谱柱。第一次使用时的方向就是它的方向。不过所有的色谱柱都是，一旦开始使用，就不要转换方向。这样会损毁色谱柱。
第二个是柱压问题。一般的色谱柱压力最好不要超过20MPa，压力过高会加速损毁色谱柱。
第三，柱温。色谱柱温度最好不要超过45℃。也是会加速损毁色谱柱。
还有pH值。色谱柱的pH值范围是不同的。大多数色谱柱的pH值范围是4-7左右。有些偏向酸性，有些偏向碱性的，还有一些pH值广泛的。这些按照说明书操作即可。

除此之外，色谱柱还有别的一些需要注意的事情。
首先，键合硅胶色谱柱分成几种。比如C18、C8、苯基柱这些的使用方法都差不多。是反相色谱柱。它们的流动相中还有大量的水，还有无机盐。这个时候需要注意，无机盐是不能够长时间留在色谱柱里面的。色谱柱最好保存在纯甲醇或者纯乙腈里面。但是无机盐不能溶于纯甲醇或者纯乙腈。所以中间要过渡甲醇水或者乙腈水。
而有些色谱柱比较特殊，比如氨基柱、氰基柱。他们是可以用于正相，也可以用于反相。所以使用的时候注意区分。配置流动相的时候也避免使用大量的水相。

其他的暂时想不到。或者说你想问的问题可以提出来，大家讨论讨论。

② 何谓正相色谱和反相色谱在应用上有什么特点

1、正相色谱基本上可以被看做是液固吸附色谱，其柱填料是吸附剂，其表面上分布有活性吸附位点，溶剂和溶质分子均能被吸附于活性位点上。由于相互作用力有大有小，溶剂分子与溶质分子、溶质分子相互之间又存在竞争吸附，从而造成了在柱内保留时间的差异，使不同物质得到分离。

应用特点：正相色谱一般用来分离中性化合物和离子(或可电离的)化合物，而且以中性样品为主。适于分离样品如下：

①对于反相色谱法很难分离的异构体，可以采用以硅胶为固定相的正相色谱分离分析；

②根据被分离样品极性差别进行族类分离；

③易于水解样品的分离分析；

④分离分析高脂溶性样品，其在极性有机溶剂中溶解度很小；

⑤正相色谱也可以用于异构体分离(包括几何异构体和光学异构体)。

2、流渣丛动相极性大于固定相极性的情况，称为反相色谱。非极性键合相色谱可作反相色谱。在现代液相色谱中应用最广泛，现代液相色谱分析工作的70%以上是在非极性键合固定相上进行的。反相介质性能稳定。分离效率高，可分离蛋白质、肽、氨基酸、核酸等含有非极性基团的各种物质。

应用特点：反相介质性能稳定。分离效率高，可分离蛋白质、肽、氨基酸、核酸、甾类、脂类、脂肪酸、糖类、植物碱等含有非极性基团的各种物如迟樱质。

(2)反相色谱为什么不能用纯水扩展阅读

原理：

反相色谱(RPC)是指利用非极性的反相介质为固定相，极性有机溶剂的水溶液为流动相，根据溶质极性(疏水性)的差别进行溶质分离与纯化的洗脱色谱法。

与HIC一样，RPC中溶质也通过疏水性相互作用分配于固定相表面，但是，RPC固定相表面完全被非极性基团所覆盖，表现出强烈的疏水性。因此，必须用极性有机溶剂(如甲醇、乙腈等)或其水溶液进行溶质的洗脱分离。

溶质在反相介质上的分配系数取决于溶质的疏水性，一般疏水性越大，分配系数越大。当固定相一定时，可以通过调节流动相的组成调整溶质的分配系数。

RPC主要应用于相对分子质量低于5000，特别是1000以下的非极性小分子物质的分析和纯化，也可以用于蛋白质等生物大分子的分析和纯化。

由于反相介质表面为强烈疏水性旦仔，并且流动相为低极性的有机溶剂，生物活性大分子在RPC分离过程中容易变性失活，所以，以回收生物活性蛋白质为目的时，应注意选用适宜的反相介质。

③ 求助求助，waters的柱子不小心用纯水冲了

你问的应该是反相色谱柱，因为凝胶过滤用纯水相是司空见惯的。
Agilent的Bonus系列内，Aichorm的Aqua系列，都是可以做纯水容相的。
但你如果只是考虑梯度起点的高水相比例，那就不必了，普通的C18、C8都可以用纯水相短时间冲洗，不超过10个柱体积，是没什么问题的。

④ 如何正确保存液相色谱柱

1.短期保存色谱柱

反相色谱柱每天实验后的保养：

使用缓冲液或含缓冲盐的流动相，实验完成后应用20-30柱体积的甲醇或乙腈和水的50：50混合物进行冲洗。如需过夜保存，可将流速保持在 0.1 到 0.2 mL/min。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。

其他色谱柱的短期放置，同样应先用溶剂冲洗好色谱柱(如凝胶柱则用蒸馏水来冲洗) ，再把色谱柱的两头用密封螺丝密封好即可。

2.长期保存色谱柱

如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。特殊类型色谱柱的储存，需参考色谱柱说明书，使用厂商推荐的溶剂。

⑤ 如何反向冲洗液相色谱柱

转载”《分析测试网络网》实用资料！色谱柱冲洗一点意见！！

主要针对的反向色谱柱而讲！

1.色谱柱简介

最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。反相色谱系统使用非极性添充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶(如氰基硅烷键合相和氨基硅烷键合相等)也有使用,正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换填充剂用于离子交换色谱;凝胶或高分子多孔微球等填充剂用于分子排阻色谱;手性键合填充剂用于对映异构体的拆分分析。

填充剂的性能(如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含炭量和键合类型等)以及色谱柱的填充，直接影响待测物的保留行为和分离效果。孔径在15nm(1nm=10埃)以下的填料适合于分析分子量小于 2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。以硅胶为载体的一般键合固定相填充剂适用PH2~8的流动相。当PH大于8时，可使载体硅胶溶解;当PH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用PH大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、包裹聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等;当需使用PH小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶、有机-无机杂化填充剂等。

2.色谱柱的冲洗体积确定

一般情况都是冲洗色谱柱10-20倍柱体积，具体可以这样计算，根据柱内径和柱长算出色谱柱内体积。短柱一般时间就是30分钟、长柱一般冲洗60分钟就可以了。举例：内经为4.6mm、长250mm，其柱内体积=3.14*4.6*4.6/4*250=4.153毫升，流速是1.0毫升每分钟，折中取15被柱内体积，则冲洗时间就出来了。

3.色谱柱冲洗

冲洗色谱柱最好在分析结束后，用流动相冲洗到基线平稳，然后用10%左右的有机溶剂冲洗色谱柱，主要是冲洗干净流动相中的缓冲盐。然后用100有机溶剂冲洗。最好是梯度变化冲洗。分析物可能为一些能溶解在水中，有些需要用纯溶剂才能完全去除。如果分析时间紧迫一定要把盐分冲洗干净，一般情况不要用纯水冲洗色谱柱，特别是反向柱的填料的键合集团容易折断，对色谱柱造成损伤。色谱柱被使用在某种程度上就是开始被污染了，所以色谱柱的寿命和我们使用的情况有很大的关系。虽然被污染但是对我们分析目标物没有造成影响我们也就是认为还能用。

4.色谱柱维护冲洗

常见故障筛板阻塞，解决办法是：a、过滤流动相;b、过滤样品;c、运用在线过滤或保护柱。

柱头塌陷解决方法是：：a、避免使用PH>8的流动相(针对大部分硅胶的柱子);b、使用保护柱 ;c、使用预柱(饱和色谱柱)。

前面谈到的不管用什么溶剂一定要加入一定比例的用机溶剂，主要是考虑到一些疏水基团在有机溶剂里面容易伸展利于冲洗其包藏的杂质等。当我们的色谱柱在压力和柱效下降时，我可以拆开泵近端柱头的螺丝取出筛板，清洗筛板以及观察里面的填料，如填料污染严重，就要进行挖取一部分被污染的填料然后用其他废弃的柱子相同填料来填补，用新的筛板或清洗好的筛板拧好螺丝。然后冲洗观察柱压变化和测试柱效等。

5.特殊冲洗
强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积，对样品中的化合物产生额外的保留行为，不仅引起峰形变宽、拖尾，使柱效下降，同时也会引起保留时间的变化，累积到一定程度时还会导致柱压升高。由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应，需要一定的时间才会体现出来，但对许多样品特别是复杂样品而言，很难判断其是否含有强保留物质，因此要防止强保留物质的累积，需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙腈清洗色谱柱。

清洗方法：

1.未使用缓冲盐：每天分析完成后，用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱60min。

2. 使用过缓冲盐：分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然后再用纯甲醇或乙腈反向冲洗色谱柱 60min。

3.补救方法：

水——乙腈——氯仿(或异丙醇)——乙腈——水

每一步以 1.0ml/min 流速反向冲洗色谱柱 60min。

希望大家提出更好的建议和办法。

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⑥ C18反相柱怎样才能冲得够干净

相C18色谱柱（即来憎水柱自子）如果用纯水冲洗后，如果立即停泵则由于其憎水（疏水）的缘故使得柱子内的水因而流失掉，长时间停泵使得柱子干掉（变干），会造成柱子内固定相填料表面键合的硅烷基结构塌陷（也说成是失去支撑倒下），柱子就这样报废了。

⑦ c8色谱柱用水冲了怎么办

不能。一般洞渣不能。HPLC多用C8,C18色谱柱，而这些柱子要求最少也要有5%的有机相，用纯水相容易破坏固定性，从而使柱效下降。

日常使用当中多数情况下是念颤薯反相色谱柱，c18，c8，苯基柱等等！因为这些柱子键合相极性极小，所仔者以流动相的极性肯定比他。

⑧ 反相硅胶柱色谱为什么不直接采用去离子水装柱

出现残留物。反相硅胶是在正相硅胶的基础上进行化学反应把OH取代为OR的硅胶。反相硅胶柱色谱因在使用离子水柱时会出现残留物，不直接采用去离子水装柱。一般色谱柱的材质不允许长时间被纯水冲洗。