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离子交换色谱法测定蛋白

发布时间:2020-12-15 19:33:29

㈠ 求离子交换色谱法分离蛋白质试验步骤

离线pH梯度复-强阳离子交换色谱法制分离肽段混合物 这篇文献能否帮助您?
建议朋友有问题,可到分析测试网络网去提问,基本上问题都能得到解答,网络上搜下就有。

缓冲液和洗脱液最好一致。你自己查文献看看选吧。

㈡ 7.下列关于用离子交换纤维素色谱法分离蛋白质原理的叙述哪一个是正确的

答案D
分配层析利用样抄品各组分在固定相和流动相间溶解度的不同(分配系数不同)来进行分离;吸附层析法利用吸附剂表面对样品组分吸附能力强弱不同来进行分离;亲和层析由于配体与待分离物质进行特异性结合;DEAE-纤维素离子交换层析法利用样品组分对离子交换剂静电力的差异来进行分离。

㈢ 关于液相色谱法纯化蛋白质

凝胶过滤色谱法:来 分辨率较高源,但是上样量仅为柱体积的1%,而且对流速也有严格的限制
离子交换色谱法:根据目的蛋白质表面所含有的氨基酸残基带有的净电荷分离蛋白质,但是分辨率没有凝胶过滤高
亲和层析法: 根据生物分子的特异性分离目的蛋白,特异性很高,但是配件容易丢失 适合含有特异性的标签的或者抗体
疏水色谱:根据疏水性来分离蛋白质,缺点是有的蛋白质在高盐中溶解度降低,所以应用范围受到限制,适合蛋白质表面含有较多疏水性氨基酸残基的疏水性蛋白质

㈣ 离子交换层析法分离纯化蛋白质有哪些局限性

  1. 因为抄离子交换吸附蛋白质并不是特异性吸附,在某些情况下可能难以判断结合的蛋白质是否为当初设计的目的蛋白。

  2. 离子交换吸附依赖于蛋白质表面的静电荷,如果蛋白质结构比较特殊,可能会有在各种pH都难以结合上离子交换层析的情况。

  3. 离子交换层析对于等电点与目标蛋白接近的杂蛋白并没有很好的分离效果。

㈤ 离子交换色谱法是蛋白质纯化技术中的一种吗

是的,蛋复白质纯化技术分为制电泳和色谱法两种。离子交换色谱法是色谱法的一种,所以也是蛋白质纯化技术中的一种。其实在伯乐生命医学上有很详细的介绍,蛋白质纯化技术就是为了获得的蛋白质去除杂质而是用的各种方法,并且根据不同的蛋白质采用的方法也有所不同,蛋白质纯化的工作是较为复杂的。

㈥ 为什么说离子交换色谱法是分离蛋白质的最佳方法

它是根据蛋白质的组成物质氨基酸的物理性质(基于氨基酸电荷行为)为分离基础的方法。相对透析和超过滤及凝胶过滤来说,可以针对多种蛋白质中的某一种(前提是知道蛋白质的氨基酸组成及其离子交换树脂的亲和度及洗脱强度)进行分离。(而透析和超过滤还有凝胶过滤方法更大的取决于相对分子质量及其结构 分离出的单一蛋白质纯度相对要低 并且凝胶过滤要求凝胶对要求组分不能有吸附作用 适用性较低 ) 相对盐溶和盐析来说,分离单一蛋白质的纯度要高,且更好的保留其天然理化性(盐溶要求蛋白质分子吸附某一盐离子从而改变其溶解性 但有些蛋白质吸附某些盐离子后其蛋白质构象及理化性会发生改变)。 相对有机溶剂分级分离法,更好的保留其天然理化性(有机溶剂分类法易造成蛋白质不可逆变形 且适用范围窄) 相对凝胶电泳和等电聚焦来说 更易于实现大量制备分离 且不改变蛋白质结构和功能(电泳会影响蛋白质结构 且操作繁琐 成本高) 相对亲和层析来说 它更加易于实现且成本低廉效果也不错(亲和层析需要制备其配体并与载体交联 因而制备难且成本较高)
PS: 最好的分离方法不是例子交换色谱法 而是高效液相色谱法 相对离子交换色谱来说有着更高的效率、更高的分辨率和过柱速度

㈦ 离子交换层析法分离纯化蛋白质有哪些局限性

1,离子交换树脂固定床的床层压力会随着分离过程的进程而不断加大,需要重回新填充答。同时,也造成固定床填充过程操作麻烦,而且密封性要求高。2,蛋白质分离纯度问题,如果在出峰之后再行切换接收馏分,而在峰行下降后提前切换,虽可以保证纯度,但蛋白分离收率则会下降。3,由于交换层析介质决定,不同蛋白质相互分离效果也不确定,这种分离,也易造成各蛋白峰重叠,造成分离纯度下降。4,自动化程度不高。主要也是受固定床以及树脂交换饱和当量无法保持长期稳定造成的。无法像液相色谱柱那样,可以在标样标定后,建立方法,自动分离目标蛋白。5,不过,规模化分离纯化蛋白质过程,使用这种层析法,还是具有一定优势的。
………………
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详细资料请参考:
离子交换层析: http://proct.bio1000.com/100474/

㈧ 测定蛋白质的定量的方法有哪些及其原理各是什么

在酸性条件来下,考马斯自亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合,导致最大吸收峰由465 nm 变为595 nm,同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合

㈨ 离子交换层析在蛋白质分离中的应用

离子交换层析在蛋白质分离纯化中有非常广泛的应用,在样品富集,回中度纯化和精制阶答段都可以采用。另外还可以利用离子交换层析去除DNA和内毒素。因此在生物制品工艺中应用非常广泛。关键是要选择合适的介质和分离条件。
你的问题范围太广,如果有具体的问题可以详细讨论。

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