菌检薄膜过滤法滤膜

1. 薄膜过滤法，滤膜采用何种方式灭菌最好

用重物压着，我都是在不锈钢滤盘里安装好滤膜才拿去一起灭菌的

2. 平板计数法和膜过滤法检测细菌有什么区别呢 哪个精确一些

膜过滤法更为精确一些。
膜过滤技术是成熟的技术，ISO标准、AOAC、美国的EPA等等。所有这些标准，最起码ISO标准是可以拿过来用的。采用滤膜法进行微生物检测是一种国际公认的微生物标准检验方法，其得到AOAC、美国、欧洲和日本等国家的药典、FDA和EPA等组织的承认，广泛应用于环境监测、食品及饮料工业、化妆品、制药工业品质控制和电子工业等领域。赛多利斯公司的滤膜法微生物检测产品成功地应用于滤膜法已有20多年的历史，实用而且方便实用，它简化了微生物检测程序。 所以，1.有菌落总数检测膜过滤法的标准。2.有可行性。
标准和技术是两码事，标准的制定主要是为了评价水平和保护安全。
2.关于平皿计数法检不出，而滤膜法却能检测出，可想到以下两点：1）平皿计数法，倾倒的培养基也要50度左右，而50度左右足矣使部分环境微生物不能生长了；2）在培养基内部的微生物比在表面的获得更少的氧，应该也是会影响部分微生物的生长。膜过滤法是水质样品的国际上公认的方法，有依据可查。主要起到一个富集的作用 毕竟水中的菌比较分散。
滤膜法微生物检测： 将适当孔径的滤膜放入滤器，过滤样品，由于滤膜的作用而将微生物保留在膜的表面上。样品中微生物生长抑制剂可在过滤后用无菌水冲洗滤器而除去。然后，将滤膜放在培养基上培养，营养物和代谢物通过滤膜的微孔进行交换，在滤膜表面上培养出的菌落可以计数，并和样品量相关。
滤膜法的优点：
-与直接法比较，可以检测大量的样品
- 浓缩效应使微生物检测的准确度提高
- 带有菌落的滤膜，可作为检测的永久记录存档
- 可见的菌落和样品量直接对应，得出定量结果

3. 复方氨酚烷胺片的微生物限度检查采用薄膜过滤法如何操作可以顺利滤过

1. 设备、仪器
1.1 无菌室 微生物限度检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统。
1.1.1 操作间 操作间应安装空气除菌过滤层流装置。环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于4.9Pa。操作台上备有电子天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳头等。
1.1.2 缓冲间 缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。缓冲间内不得放置培养箱和其他杂物。
1.1.3 在每次操作前、后，用75%乙醇溶液或其他消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。然后启动层流净化装置，同时用紫外杀菌灯照射30min。
1.1.4 无菌室操作台消毒擦拭后，先启动层流净化装置30min，将备妥的营养琼脂平板3个（经30～350C预培养48h，证明无菌落生长），以无菌方式移入操作间，置净化台左、中、右各1个，开盖，暴露30min后将盖盖上。在30～350C培养箱内倒置培养48h，取出检查。3个平板生长的平均菌落数不超过1个。
1.2 仪器
1.2.1 恒温培养箱（30～350C）、生化培养箱（23～280C）、电冰箱、蒸汽灭菌器。
1.2.2 玻璃器皿 烧杯、培养皿、量筒、试管及塞、吸管。玻璃器皿用前应洗涤干净，吸管、量筒不挂水滴，无残留抗菌物质。玻璃器皿均应用牛皮纸（或双层报纸）严密包裹置蒸汽灭菌器高压蒸汽121℃灭菌30min，烘干。或于160℃干热灭菌2h，备用。
2 培养基及其制备方法
2.1 营养琼脂培养基：取营养琼脂培养基34g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。
2.2 玫瑰红钠琼脂培养基：取玫瑰红钠琼脂培养基30.5g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。
2.3 胆盐乳糖培养基：取胆盐乳糖培养基36g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。
3 稀释剂
3.1 0.9%无菌氯化钠溶液：取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，121℃灭菌20分钟。
3.2 PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g，磷酸氢二钠7.23g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，分装，过滤，灭菌。
4 供试液的制备
4.1 取供试品10g，加经干热灭菌的5%吐温-80 0.2ml，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释至100ml，边加边振摇使成混悬液，静止5分钟使分层，倾取上清液置离心机中500r/min离心5分钟，取上清液作为供试品溶液。
5 检查方法
采用薄膜过滤法，滤膜孔径为0.45um，直径为50mm。滤膜及滤器在使用前采用121℃高压灭菌30钟。试验过程中，应保持滤膜前后的完整性。将制备好的供试液过滤，然后用100mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（注意保持供试品溶液覆盖整个滤膜表面）。冲洗后，用镊子取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基平板上培养。细菌于30～35℃培养48小时，霉菌于23～28℃培养72小时。

4. 纯化水微生物限度检查用薄膜过滤法怎么做

准备工作：

用纯化水浸泡滤膜，浸泡完全后放入滤杯中，包好滤杯，连同回量筒、培养基、平皿、答取膜器、三角烧瓶等一起121℃灭菌30min。

灭菌后的物品一并传入洁净室中，微生物限度过滤器上连好已经灭好的滤杯，用缓冲液先润湿滤膜，抽掉缓冲液，然后倒入供试液（10倍稀释），滤过，再用缓冲液冲洗滤膜。

过滤结束后取下滤膜平贴于R2A琼脂培养基平板上，32℃倒置培养5天。菌落计数（平皿上长几个菌结果就报几个菌）

(4)菌检薄膜过滤法滤膜扩展阅读：

薄膜过滤系统主要用于去除小颗粒及溶解盐，一般可分为微滤、超滤、纳滤和薄膜过滤反渗透。

微滤又称微孔过滤，它属于精密过滤，截留溶液中的砂砾、淤泥、黏土等颗粒和贾第虫、隐抱子虫、藻类和一些细菌等，而大量溶剂、小分子及少量大分子溶质都能透过膜的分离过程。

超滤是一种加压膜分离技术，即在一定的压力下，使小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的特制的薄膜，而使大分子溶质不能透过，留在膜的一边，从而使大分子物质得到了部分的纯化

纳滤 ( NF，Nanofiltration)是一种介于反渗透和超滤之间的压力驱动膜分离过程，纳滤膜的孔径范围在几个纳米左右。

参考资料来源：网络-薄膜过滤

5. 水质检测时，我们用薄膜过滤法。但是我有几个问题向老师请教.

1 生物酶并没来有你想像的多 不会影响细自菌生长 而且薄膜过滤后会被滤掉只剩下微生物
2 营养琼脂和玫瑰红钠都不是选择培养基 有时候会有都长的情况 营养琼脂培养基建议加TTC让细菌更容易观察 也可以通过其他方式来判断~比如细菌菌落大小不一 一般比较小 边缘光滑 味道臭 真菌酵母菌菌落大 有的会长毛 有酒香或霉味。更准确的方法是用选择培养基进一步培养 或显微镜观察 最好是增加阳性对照试验

6. 薄膜过滤法检验纯化水为什么要截留菌面朝上

准备工作：
用纯化水浸泡滤膜，浸泡完全后放入滤杯中，包好滤杯，连同量筒专、培养基、平属皿、取膜器、三角烧瓶等一起121℃灭菌30min。
灭菌后的物品一并传入洁净室中，微生物限度过滤器上连好已经灭好的滤杯，用缓冲液先润湿滤膜，抽掉缓冲液，然后倒入供试液（10倍稀释），滤过，再用缓冲液冲洗滤膜。
过滤结束后取下滤膜平贴于R2A琼脂培养基平板上，32℃倒置培养5天。
菌落计数（平皿上长几个菌结果就报几个菌）

7. 薄膜过滤法，滤膜采用何种方式灭菌最好

最好采用一次性过滤器。如果用多次使用的过滤器，则滤膜用湿热灭菌比较好，因为干热灭菌后，滤膜较脆，试验时不容易保证滤膜完整。

8. 医用刀片如何采用薄膜过滤法过滤进行无菌检查

1、灭菌
培养基灭菌主要两种高压除菌及0.22um微孔滤膜滤除菌与滤相比高压灭菌工作强度本较低易造营养流失且加（菌谷氨酰胺溶液菌碳酸氢钠溶液等）程容易造二污染数培养基采用0.1～0.2μm孔径微孔滤膜进行滤灭菌并且已培养基除菌发展向低限度减少培养基营养损失
1.1 高压灭菌

某些培养基（MEM）进行高压灭菌例清MEM培养基MD605、MD609等类培养基般含L-谷氨酰胺碳酸氢钠般培养基高压灭菌加入L-谷氨酰胺碳酸氢钠菌液体另外高压谷氨酸盐（L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺
高压灭菌培养基121℃、15psi15钟条件完全达灭菌效及营养损失需灭菌间延保证高压灭菌效灭菌设备验证关键
1.2 滤灭菌
供滤灭菌使用滤膜其材料polyethersulphone（PES）、尼龙、聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等般情况采取压滤压滤较负压滤具流速高、滤快、易污染避免蛋白质产量气泡等优点般使用滤器参照各供应商产品说明书
目前数实验室制采用微孔滤膜滤器（Zeiss滤器）或立式微孔滤器（Millipore、Pall）除菌微孔滤膜滤器锈钢间夹放0.22um滤膜使用种滤器重要步骤安装滤膜及菌滤程使用Zeiss滤器先要用培养用水滤膜充润湿安装滤膜其放置层定性滤纸再固定消毒旋钮要扭太紧凡与空气接触部位都要包（用牛皮纸、纱布、纺布等）；高压灭菌菌环境立即旋钮扭紧滤除菌结束要打滤器检查滤膜否完整滤膜破裂需重新进行滤除菌程立式微孔滤器选用同微孔滤柱体积滤膜折叠膜面积显著增液体处理量且容易发堵塞现象

9. 微生物薄膜过滤法，夹膜技巧

（1）验证试验方法：试验原理同前述薄膜过滤法。验证供试品对薄膜过滤法有抑细菌和抑真菌特性时，与实际的无菌检查相同，在同一型号的每个过滤器或过滤筒内过滤规定定量的供试品（容器数及每容器的过滤体积），用淋洗液淋洗滤膜至少3次，每次淋洗液体积为100ml，在最后一次淋洗液中，接入验证用菌种（接种量为10—100CFU）；另取一过滤器或滤筒，不过滤供试品，重复以上淋洗操作，作为阳性对照。根据具体情况，可将整张滤膜或半张滤膜转移至100ml的指定验证用培养基内，或将培养基加入到装有滤膜的滤筒内。分别对表中所列菌种及相应的培养基逐一进行验证，并将容器置于适当的温度下培养，培养时间不超过14d。如果使用新的滤膜或滤过器（包括不同厂家或批号、型号），则要按上述薄膜过滤法的要求做 , 组试验，即样品试验组、蛋白胨对照组和阳性对照组重新进行验证确认。
（2）验证结果评价：如果供试品培养基容器内的培养基内明显可见微生物生长（混浊），并且与阳性对照容器内的培养结果相似，则在无菌检查试验中必须要过滤与验证试验相等量的供试品、淋洗液，淋洗相同次数及使用同量的培养基。如果与阳性对照容器内的培养结果相比，供试品容器内微生物生长现象不明显，则说明该检验量在此检验条件下有抑菌作用。应增加淋洗次数，重复以上实验。也可通过更换过滤膜并使用中和剂来消除产品的抑菌作用。USP规定，如果已淋洗了5次，并且每次淋洗液体积达到500ml，仍无法中和膜上的残余抑菌性物质，那么在无菌检查试验中就采用此淋洗次数与淋洗量作为最终淋洗方法。