1. 正相色谱柱和反相色谱柱的适用范围
通常所说的正相柱和反相柱的区分其实不是很规范，最开始的时版候正相和反相是通过流动相和权色谱填料的极性去区分。而现在很多的时候大家都把正相柱和反相柱定义为硅胶基质的键合柱，如反相是指C18 C8等、而正相是SI 、氨基柱、氰基柱等等。而其实很多别的类型的柱子都是在这个范围之类的， 比如手性柱有正相的手性柱、反相的手性柱，所以就单独拿出来叫手性柱，而不用正相和反相去区别。
2. 什么是反相色谱柱
固定相为非极性的色谱柱。在反相键合相色谱中，溶剂的极性越弱洗脱能力越强，即弱极性溶剂的洗脱强度更大
3. 反相键合相色谱柱
在使用反相色谱柱时，应该是极性较强的组分先出来。苯的极性大于甲苯（虽然可能有点出乎意料），所以应该是苯先流出色谱柱。
4. 反相色谱中，为什么要平衡色谱柱
如果你用的来是一般的液相色谱仪，自需要很长的时间平衡柱子和系统，因为离子交换柱对流动相中的离子很敏感，一般的液相色谱仪内壁是金属的，多会产生离子或静电荷，对分析造成干扰。推荐用离子色谱仪，或氨基酸分析仪，不过也要平衡一定的时间
5. 请问C18柱是正相还是反相色谱柱CN柱呢
一般来说正相与反相是相对于使用的流动相与柱子的极性比来说的，这样更为科学，但一般内情况下，用C18柱，它毕容竟是非极性色谱柱基本上用于反相色谱，也以说可以认为是反相柱，而CN柱一般可用于正相与可用于反相，说是正相或反相不太科学了。
6. 怎么看某一物质用正相色谱柱还是反相色谱柱
本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱内，容洗脱顺序由强到弱。以下是详细说明：
1、正相色谱
正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene
Chloride）等。
2、反向色谱
反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
7. 请问C18柱是正相还是反相色谱柱CN柱呢
一般来说正相与反相是相对于使用的流动相与柱子的极性比来说的，专这样更为科学，属但一般情况下，用C18柱，它毕竟是非极性色谱柱基本上用于反相色谱，也以说可以认为是反相柱，而CN柱一般可用于正相与可用于反相，说是正相或反相不太科学了。
8. 正相色谱柱与反相色谱柱的区别
色谱柱的安装：
1、首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配。为减少死体积，进样阀、柱子、检测器之间的连接管路内径尽可能使用内径较小的管线，同时控制进样器、色谱柱和检测器之间连接管线的长度。安装色谱柱之前，确认流路系统中的溶剂是否正常。对分析较复杂的样品建议安装保护柱。
2、为了使色谱柱与仪器系统达最佳的连接效果，应尽量使用与色谱柱接口相匹配的螺帽和锥形接头，如原来的接头长期匹配其他类型的色谱柱，建议在连接新色谱柱前应检查匹配情况，避免造成色谱柱的损坏或因色谱柱不匹配造成的漏液。
3、使用PEEK 材料的通用接头，只需用手拧紧不需要特定扳手，使用压力为5000psi；使用温度不得超过100℃。
流动相平衡：
1、在进行样品检测前，至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。流动相一定要使用色谱级别的溶剂。如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生。
2、流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5％的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。还可以使色谱柱更容易平衡）。
3、流动相需脱气后使用，可避免因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。如果测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区别，应该使用过度分布的形式进行平衡。避免由于流动相的突然变化造成柱压增加过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。
样品制备与操作：
1、样品应当尽可能溶解在能与流动相相互溶的溶剂中。除特殊指明外，如使用强溶剂溶解样品柱子的分辨率将可能降低。
2、样品溶液在进样前应使用针头式过滤器对样品预先过滤。频繁改变流动相组成，会加速降低柱效。
3、色谱柱由高压匀浆法装填，能承受较高压力。为获得最佳分离效果，使用时请不要超过200kgf，而且避免压力突然上升或变化，否则会造成硅胶填料的破坏，减少色谱柱的使用寿命。除特殊要求外最高操作温度不要超过60℃。
保存色谱柱：
1、如果流动相含有酸或无机盐，应当先用去离子水（20倍柱体积）冲洗干净。然后用用100％乙腈或甲醇保存色谱柱。最后用柱子的接头密封，并放在稳定的环境中存放。
2、应避免色谱柱受到直接的机械冲击或摔落，避免造成色谱柱性能的降低。
色谱柱的再生：
1、用相当于20倍柱体积的溶剂按下列顺序冲洗柱子，建议按柱子的箭头方向冲洗，尽可能不反冲：冲洗时使用的的参考溶剂顺序是水、甲醇、氯仿、异丙醇、甲醇。
9. 反相键合相色谱柱
2，4-二硝基苯酚由于在2，4位置有吸电子基团会影响苯环中的共轭结构，使得整个分内子容净偶极矩较大，分子极性较强。在反相色谱中，由于固定相极性弱于流动相，根据色谱保留原理，极性较大的物质先于极性较小的物质流出，因此出峰顺序应为：2，4-二硝基苯酚>苯酚
10. 正相色谱柱与反向色谱柱是如何界定的各适合哪类物质的分离
这个也没有特别严格的界定，一般而言，C18、C8、C4、C1等色谱柱是反相色谱柱。剩余的极性的叫做正相色谱柱。“色谱世界”网站的产品中心，对这些都进行了分类，你自己去看看吧。