㈠ 蛋白在超滤管浓缩过程中出现沉淀怎么办
1、选择合抄适的超滤管,主要考虑袭MWCO和浓缩体积,最常见的是Ultra-15(10kD)。
通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。
若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同,表格中有。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。
注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开
离心机,否则离心机出问题时,无法第一时间处理,后果不可预测!膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
㈡ 为什么球蛋白在透析过程中(除盐)易发生沉淀析出
盐浓度对蛋白质的活性还是比较关键的。
我觉得你的解决方法可以从下面几个回方面去考虑答。
第一加一些保护剂,如蔗糖,甘油,巯基乙醇等。
第二,如果你仅仅为了脱盐的话,减少脱盐时间。考虑用超滤或者G系列的凝胶脱盐,这样时间较快,减少蛋白质的变性。
第三,增加你的蛋白质浓度,一定程度也可以减少透析过程中蛋白质的沉淀,但是效果不是特别好的。你可以试试。
望采纳 O(∩_∩)O谢谢
㈢ 蛋白质沉淀的原因
蛋白质的沉淀,沉淀是溶液中的溶质由液相变成固相析出的过程。蛋白质从溶液中析出的现象,称为蛋白质的沉淀。蛋白质沉淀常用的方法有盐析、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、生物碱试剂与某些酸沉淀等。
蛋白州笑质沉淀的原因:
1.盐析,在蛋白质水溶液中,加入了高浓度蚂蠢的强电解质盐如硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等而使蛋白质从溶液中析出,故而沉淀。
2.变性,当天然蛋白质受物理或化学因素影响后,失去原有的生物活性,并且物理化学性质均以改变的作用,导致分子中的次级键断裂,导致空间构象从紧密有序闷迹陪的变为松散无序的状态,因此产生沉淀。
㈣ 蛋白质沉淀的原因
定的因素:
一、蛋白质有水化膜;
二、蛋白质是带电荷的;
所以,当破坏这两个因素时,蛋白质从溶液中析出而产生沉淀。
然后,具体讲讲盐析和变性。
----盐析:
在蛋白质水溶液中,加入了高浓度的强电解质盐如硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等而使蛋白质从溶液中析出,称为盐析。(低浓度的盐溶液加入蛋白质溶液中,会导致蛋白质溶解度增加,称为盐溶)
[机理]:破坏了蛋白质的水化膜并且中和了表面的净电荷。
----变性:
当天然蛋白质受物理或化学因素影响后,失去原有的生物活性,并且物理化学性质均以改变的作用称为蛋白质的变性。
[机理](本质):分子中的次级键断裂,导致空间构象从紧密有序的变为松散无序的状态。(一级结构并无被破坏)
[表现]:
1、无生物活性;
2、溶解度下降、粘度增加、紫外线吸收增加、侧链反应增强、对酶的作用敏感,易被水解(这就是为何蛋白类食品在被加热至变性后人体对其中氨基酸的吸收能力增强)
2、再来说溶解
盐溶液(比如硫酸铜)使蛋白质沉淀的原因不是蛋白质变性而是盐析,少量的盐溶液改变了蛋白质的溶解度,所以在步骤一的时候,溶剂(水)的量相对不足,所以发生了沉淀,但是当加入足够的溶剂(硫酸铜是饱和了,但是蛋白质还能继续溶解),原来析出的蛋白质重新被溶解。这里可能有一个认识上的误区,所谓饱和硫酸铜溶液,饱和的只是硫酸铜,对于其他溶质,还是可以继续溶解的。
3、最后说下颜色反应,不知道
你指的是哪一种。
用双缩脲试剂鉴定,发生紫色反应,最终呈紫色。本质是与肽键发生络合反应
蛋白质中存在含苯环的氨基酸就会遇浓硝酸变黄色,因为苯环发生了硝化反应,蛋白质水解后也不会褪色。
㈤ 我纯化的蛋白总是有沉淀,该怎么办 已经改过盐浓度,沉淀还是在啊
刚纯化完就有沉淀?那上样的时候应该也有沉淀吧?
复性时出现沉淀是比较难解决,温度不要变化太大、速率降低点、浓度低点、加甘油保护剂等。