1. 关于实验室抽虑除菌的操作
问：最近要做一些培养基，有一些糖类需要过滤除菌，但不知道怎么操作，还需要什么辅助设备？
答：你只要有滤膜和配套的过滤器就可以了，一般在超净工作台上进行。滤膜用0.22微米或0.45微米两种规格，指的是滤膜的孔径大小吧。一般0.22就够了！
答：如果溶液的量比较大，超过500ml，可以采用已灭菌的抽滤瓶，预先垫好0.22um 的滤膜。抽滤瓶灭菌前要检查封口用纱布或棉花堵牢，使用时，不用在无菌室中进行，只要保证收集瓶无菌状态就可以。抽滤后，过滤好的溶液在无菌条件下倒进已灭菌的空试剂瓶中。
如果用小量的溶液过滤，无菌室内用一次性注射器和一次性0.22um滤膜（millipore或pall都有卖）就可以。
答：看过滤的量，如果量小，用注射器加滤器、0.22微米滤膜过滤，滤器加上滤膜后盖紧，稍旋松，饭盒密封100度蒸馏水煮沸30分钟灭菌，用来承接无菌糖水的瓶需高压。用时在无菌操作台上操作，并先旋紧滤器，注意滤器外流下去的哪怕一滴也会造成染菌；过滤应该是费力的，如果感觉很轻松，则滤膜已破。0.45微米的滤膜一般用于两次过滤的第一次，以防止0.22堵塞。注射器，若能高压更好些。
如果量大，正压可用蠕动泵接皮管接不锈钢滤器大张滤膜，这些都是要高压的。负压可用抽滤。
2. 过滤除菌操作时，将菌液注入滤器过滤，时间不宜过长，压力控制在多少为宜
1、灭菌方法
培养基的灭菌方法主要有两种，高压除菌及0.22um微孔滤膜过滤除菌。与过滤相比，高压灭菌的工作强度小，成本较低，但易造成营养成分的流失，而且在多次加样（无菌谷氨酰胺溶液，无菌碳酸氢钠溶液等）过程中容易造成二次污染。大多数培养基采用0.1～0.2μm孔径的微孔滤膜进行过滤灭菌，并且已成为培养基除菌的发展方向，它可低限度地减少培养基的营养损失。
1.1 高压灭菌
某些培养基（如MEM）可进行高压灭菌，例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压灭菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的无菌的液体。另外可高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）可代替L-谷氨酰胺。
可高压灭菌的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失，不需将灭菌时间延长。为保证高压灭菌的效果，灭菌设备的验证很关键。
1.2 过滤灭菌
可供过滤灭菌使用的滤膜很多，其材料多为polyethersulphone（PES）、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。一般情况下采取正压过滤，正压过滤较之负压过滤具有流速高、过滤快、不易污染，可避免蛋白质产生大量气泡等优点。一般使用过滤器可参照各供应商的产品说明书。
目前大多数实验室和制药企业采用微孔滤膜滤器（如Zeiss滤器）或立式微孔滤器（Millipore、Pall）除菌。微孔滤膜滤器为不锈钢，中间可夹放0.22um滤膜。使用这种滤器最重要步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。如在使用Zeiss滤器时，先要用培养用水将滤膜充分润湿，在安装滤膜时可在其上放置一层定性滤纸再固定。消毒时旋钮不要扭太紧，凡与空气接触部位都要包好（可用牛皮纸、纱布、无纺布等）；高压灭菌后，在无菌环境中立即将旋钮扭紧。过滤除菌结束后，要打开滤器，检查滤膜是否完整，如果滤膜破裂，需重新进行过滤除菌过程。立式微孔滤器可以选用不同的微孔滤柱体积，因为滤膜的折叠，膜面积显著增大，液体处理量大，而且不容易发生堵塞现象。
3. 配备液体培养基时硫酸亚铁为什么要过滤除菌
硫酸亚铁加热过滤会分解。
FeSO4 =加热= FeS + 2O2↑ 2. FeSO4 =加热= FeO + SO2↑ 3. 2FeSO4 =加热= Fe2O3 + SO2↑+ SO3↑
所以如果用加热除菌的方法，那么硫酸亚铁就在培养基中起不到作用。因此采用过滤除菌的方法。用滤器把杂质和细菌清楚出去，保证无菌状态，也没有破坏硫酸亚铁的成分。
硫酸亚铁的实验室制法：
1、可以用铁粉与稀硫酸反应直接制得。Fe+H2SO4（稀）=H2↑+FeSO4
2、可以用硫酸铜溶液与铁反应获得，反应方程式为：CuSO4+Fe=FeSO4+Cu（此反应类型为置换反应）
4. 过滤法杀菌
过滤法杀菌
有些需要灭菌的材料不能受热，例如许多维生素溶液。因此，许多液体可以用过滤法来灭菌。过滤法不是将微生物杀死，而是把它们排除出去。目前过滤除菌采用两类器具，一类叫深层滤器，例如用烧结玻璃、不上釉的陶瓷颗粒或石棉压成的滤板等：另一类是滤膜。深层滤器已经使用了100年以上，现在有逐渐被滤膜取代的趋势，但因为大量沉淀物容易堵塞滤膜，所以一般先用深层滤器除去大的颗粒。
滤膜一般由醋酸纤维素、硝酸纤维素、多聚碳酸酯、聚偏氟乙烯等合成纤维材料制成。滤膜的孔径一般为0.2微米，它可以滤除绝大多数微生物的营养细胞。过滤法的缺点是不能滤除病毒。
我们来看一下滤膜灭菌是如何工作的。如左图所示，在一个漏斗形容器上部放置数片滤膜。右图是整个过滤系统。待除菌的液体装在三角瓶中（1），用蠕动泵（2）将液体抽到过滤器（3）内，滤过的液体进入事先灭菌的瓶子中。
固定滤膜的装置
留存在尼龙和多聚碳酸酯滤膜上的杆菌
连接在注射器上的过滤除菌装置
如果是灭菌少量液体，可以采用一种简单的的滤器。
过滤法用途广泛，除在饮料、药物生产中使用外，空气也常常用过滤法除菌。我们通常做微生物学实验时灭过菌的容器一般用棉花塞堵在出口处，实际上就是过滤除去空气中的微生物，使进入容器的空气中没有微生物污染。微生物学实验室使用的超净台也是用过滤法除菌。