离子交换层析柱价格

㈠ 离子交换层析分离两性化合物的原理

离子交换层析分离两性化合物的原理介绍如下：离子交换层析法（ion exchange chromatography，简称IEC）是从复杂的混合物中，分离性质相似大分子的方法之一，依据的原理是物质的酸碱性、极性，也就是所带阴阳离子的不同。电荷不同的物质，对管柱上的离子交换剂有不同的亲和力，改变冲洗液的离子强度和pH值，物质就能含雹依次从层析柱中分离出来。离子交换层析法大致分为5个步骤：
1. 离子扩散到树脂表面。
2. 离子通过树脂扩散到交换位置。
3. 在交换位置进行离子交换；被交换的分子所带电荷愈多，它与树脂的结合愈紧密，也就愈不容易被其它离子取代。
4. 被交换的离子扩散到树脂表面。
5. 冲洗液通过，被交换的离子扩散到外部溶液中。
离子交换树脂的交换反应是可逆的，遵循化学平衡的规律。定量的混合物通过管柱时，离子不断被交换，浓度逐渐降低，几乎全部都能被吸附在树脂上；在冲洗的过程中，由于连续添加新的交换溶液，所以会朝正反应方向移动，因而可以把树脂上的离子冲洗下来。
如果被纯化的物质是氨基酸类的分子，则分子上的净电荷取决于氨基酸的等电点和溶液的pH值。所以当溶液的pH值较低，氨基酸分子带正电荷，它将结合到强酸性的阳离子交换树脂上；随着通过的缓冲液pH逐渐增加，氨基酸将逐渐失去正电荷，结合力减弱，最后被洗下来。由于不同的氨基酸等电点不同，这些氨基酸将依次被洗出，最先被洗出的是酸性氨基酸，如 apartic acid 和 glutamic acid（在约pH 3~4时），随后是中性氨基酸，如glycine和alanine。碱性氨基酸如arginine和lysine在pH值很高的缓冲液中仍带有正电荷，因此这些在约pH值清大高达10~11时才出现。

㈡ 多糖分离纯化—离子交换层析和柱层析

多糖，与蛋白质一样，对生命过程起着关键作用，其复杂结构直接决定了其特性和功能。要深入理解多糖，分离纯化步骤至关重要。其中，离子交换层析和凝胶层析是常用的手段。

离子交换层析在多糖纯化中应用广泛，其根据多糖特性，选择合适的阳离子、阴离子或硼砂交换剂，如DEAE cellulose、DEAE Sephadex（葡聚糖）、DEAE Sepharose（琼脂糖）系列。以DEAE cellulose-52为例，它作为阴离子交换柱，其填料二乙氨乙基纤维素带有正电荷，能有效分离中性和酸性多糖，如果胶，通过盐溶液洗脱，中性糖先被洗脱，阴离子多糖随后。通过检测洗脱液糖含量，形成洗脱曲线，实现不同多糖的分离。

相比之下，凝胶层析则侧重于分子量的分离。其原理是利用分子筛特性，大分子先流出，小分子后流出，如Sephadex G系列填料，如G-15、G-25用于寡糖分离，G-100和G-200则适用于大分子多糖。通过观察洗脱曲线，可以精确收集不同分子量的样品。

㈢ 求问怎么用离子交换树脂层析分离混合氨基酸

离子交换树脂作为一种合成高聚物，不溶于水，能吸水膨胀。高聚物分子由能电离的极性基团及非极性的树脂组成。极性基团上的离子能与溶液中的离子起交换作用，而非极性的树脂本身物性不变。通常离子交换树脂根据所带基团可分为强酸（＝R＝SO3H）、弱（＝COOH）、强碱（＝N+＝R：）和弱碱（＝NH2＝NHR＝NR2）。离子交换树脂适用于分离小分子物质，如氨基酸、腺苷、腺苷酸等。然而，对于生物大分子如蛋白质，则不太适宜，因为它们不能扩散到树脂的链状结构中。因此，如果需要分离生物大分子，可以选择多糖聚合物如纤维素、葡聚糖为载体的离子交换剂。

本次实验利用磺酸阳离子交换树脂（Dowex 50）分离混合氨基酸，包括酸性氨基酸（天冬氨酸）、中性氨基酸（丙氨酸）和碱性氨基酸（赖氨酸）。在特定的pH条件下，这些氨基酸解离程度不同，通过调整脱液pH或离子强度可以实现分离。实验中所用到的材料包括层析柱、恒流泵、梯度混合器、试管及试管架、紫外分光光度计、2mol/L HCl、2mol/L NaOH、0.1mol/L HCl、0.1mol/L NaOH、pH4.2的柠檬酸缓冲液、pH5的醋酸缓冲液、0.2％中性茚三酮溶液以及氨基酸混合液。

树脂处理步骤为：首先将树脂置于100ml烧杯中，加入25ml 12mol/L HCl搅拌2小时，倾弃酸液后用蒸馏水洗涤至中性。随后，再加入25ml 12mol/L NaOH搅拌2小时，倾弃碱液后用蒸馏水洗涤至中性。最后，将树脂悬浮于50ml pH4.2柠檬酸缓冲液中备用。

装柱步骤包括：取直径0.8cm～1.2cm、长度10cm～12cm的层析柱，底部垫玻璃棉或海绵圆垫，自顶部注入经处理的树脂悬浮液。关闭层柱出口，待树脂沉降后，放出过量溶液，再加入一些树脂，使树脂沉积至8cm～10cm高度即可。于柱子顶部继续加入pH4.2柠檬酸缓冲液洗涤，确保流出液pH为4.2，关闭柱子出口，保持液面高出树脂表面1cm左右。

加样、洗脱及洗脱液收集步骤为：打开山口使缓冲液流出，待液面几乎平齐树脂表面时关闭出口。用长滴管将15滴氨基酸混合液直接加到树脂顶部，打开出口使其缓慢流入柱内。当液面刚平树脂表面时，加入0.1mol/L HCl 3ml，以10滴/分钟～12滴/分钟的流速洗脱，收集洗脱液，每管20滴，逐管收存。当HCl液面刚平树脂表面时，用1ml pH4.2柠檬酸缓冲液冲洗柱壁一次，接着用2ml pH4.2柠檬酸缓冲液洗脱，保持流速10滴/分钟～12滴/分钟并注意勿使树脂表面干燥。

在收集洗脱液的过程中，逐管用茚三酮检验氨基酸的洗脱情况，方法是：于各管洗脱液中加10滴pH5醋酸缓冲液和10滴中性茚三酮溶液，沸水浴中煮10分钟，如溶液呈紫蓝色，表示已有氨基酸洗脱下来。显色的深度可代表洗脱的氨基酸浓度，可比色测。在用pH4.2柠檬酸缓冲液把第二个氨基酸洗脱出来之后，再收集两管茚三酮反应阴性部分，关闭层析柱出口，将树脂顶部剩余的pH4.2柠檬酸缓冲液移去。于树脂顶部加入2ml 0.1mol/L NaOH，打开出口使其缓慢流入柱内，按上面步骤续用0.1mol/L NaOH洗脱并逐管收集，注意保持流速10滴/分钟～12滴/分钟，每管20滴。做洗脱液中氨基酸检验，在第三个氨基酸用0.1mol/L NaOH洗脱下来以后，再继续收集两管茚三酮反应阴性部分。

最后，以洗脱液管号为横坐标，洗脱液各管光密度（以水作空白，在570nm波长读取吸光度）或颜色深浅（以-，±，+，++．．．表示）为纵坐标作图，即可画出一条洗脱曲线。

实验注意事项包括：保持流速10滴/分钟～12滴/分钟，并注意勿使树脂表面干燥。在装柱时必须防止气泡、分层及柱子液面在树脂表面以下等现象发生。

㈣ 疫苗提纯分离用离子交换层析工艺介绍

阴离子交换层析去除乙脑疫苗制品中残留DNA，其特点在于将乙脑疫苗浓缩液经过凝胶过滤层析初步纯化后，利用阴离子交换层析，DNA被牢牢吸附在色可赛思离子交换介质上，而乙脑病毒蛋白则直接穿透，有效去除宿主DNA，解决乙脑疫苗行业面临的问题。

2010版《中国药典》提高人用狂犬病疫苗中蛋白含量标准，需确保纯化后的病毒液总蛋白不超过80μg/剂，牛血清蛋白残留低于50ng/剂，宿主细胞蛋白残留不超过24μg/剂。生物药企需优化纯化工艺，利用凝胶层析与色可赛思离子交换层析相结合，以提高疫苗纯化效果。层析柱的选择、上样体积、速度、浓度与抗原收集点，均影响疫苗纯化效率。结合两种层析柱，可优化疫苗纯化，确保质量与效率。

采用离子交换法去除流脑多糖疫苗粗糖中的杂蛋白，结合高效阴离子交换色谱与电化学检测，快速检测Hib结合疫苗中残余溴化氰与CDAP，为疫苗生产提供可靠检测方法。同时，HPAEC-PAD检测法测定脑膜炎球菌多糖含量，验证方法的专属性、精密度与准确性，与传统方法比较，结果一致，可用于疫苗成品多糖含量检测。

百日咳疫苗的分离纯化通过ELISA与还原性SDS-PAGE方法研究脲的影响，加入2mol/L脲作为稳定剂，显著提高色可赛思离子交换层析和凝胶过滤层析效果。

利用Sabin株脊髓灰质炎病毒纯化的离子交换层析条件，对粗纯液进行IEC，优化纯化步骤，提高疫苗质量。

重组幽门螺杆菌过氧化氢酶脂质体疫苗的制备中，阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化Kat重组蛋白，薄膜分散法制备疫苗，通过透射电镜测定粒径，为疫苗提供有效免疫保护。

离子交换层析纯化人轮状病毒灭活疫苗，通过色可赛思离子交换柱层析、透析脱盐、过滤除菌灭活等步骤，制备出总蛋白去除率为99.69%、保持良好抗原性和免疫原性的疫苗。

狂犬病疫苗中去除残余DNA，优化培养条件、选择合适孔径的超滤膜包、增加阴离子交换柱工艺，以降低Vero细胞DNA残留量，保证疫苗质量。

利用大肠杆菌表达系统制备HPV-6类病毒颗粒，研究其免疫原性，通过纯化、体外组装、形态检测与中和实验，评价诱导的抗HPV-6/11中和抗体水平，简便高效制备具有免疫原性的HPV-6疫苗。

㈤ 离子交换层析的原理是什么 已解决

离子交换层析法是从复杂的混合物中，分离性质相似大分子的方法之一，依据的原理是物内质的酸碱性容，极性，所带阴阳离子的不同。电荷不同的物质，对管柱上的离子交换剂有不同的亲和力，改变冲洗液的离子强度和pH值，物质就能依次从层析柱中分离出来。

层析开始前，功能基团与反离子稳定结合，就与反离子发生可逆交换，与层析剂结合被固定下来。因为盐离子可以与底物竞争功能基团，盐浓度越高样品与层析剂结合越不紧密，易被洗脱下来。不同物质与层析剂结合程度不同，洗脱下来的时间不同，因此得以分开。

(5)离子交换层析柱价格扩展阅读

离子交换剂的选择首重保持欲分离物质的生物活性，以及在不同pH值环境中，此物质所带的电荷和电性强弱，阴阳离子交换剂的选择若被分离物质带正电荷，这些碱性蛋白质，它们在酸性溶液中较稳定，亲和力强，故采用阳离子交换剂。

在碱性溶液中较稳定，则使用阴离子交换剂，如果欲分离的物质是两性离子，一般考虑在它稳定的pH范围带有何种电荷，作为交换剂的选择。离子交换剂的再生与保存离子交换剂可在柱上再生，若有脂溶性物质则可用非离子型去污剂洗柱后再生，也可用乙醇洗涤。