梯度纯水相有机相

❶ 为什么普通C18色谱柱不能用纯水冲洗

容易引起疏水坍塌，把强保留物质冲出来，会毁了柱子的，所以水相不能超过95%，最开始的梯度淋洗也是高有机相到高水相，但是不是纯水相。

❷ 反相柱怎么过

反相柱的具体操作方法如下：

1、基本操作和硅胶柱相同，湿法装柱好些，匀浆液用甲醇。

2、流动相基本是水、有机相混合物，有机相可选择甲醇、乙腈、乙醇等。不能使用乙酸乙酯，氯仿，正己烷等正相溶剂。一般C18填料怕碱，多数C18填料使用pH范围2-8。慎用三乙胺，氨水之类的改性剂。流动相可加0.1%三氟乙酸或醋酸改善拖尾。

3、梯度洗脱从高水相开始，但有机相比例不低于5%，最好不要用纯水，有机相比例越高越容易洗脱。

4、洗脱结束用纯有机相，如纯甲醇冲洗。

5、使用后的填料不要干燥，保存在纯甲醇里，也方便下次装柱。

硅胶基质键合反相柱的清洗：

再生被污染HPLC柱子的关键是知道污染物的性质并且能找到适当的溶剂来去除。如果污染是因为重复进样时强保留物质的累积引起的，利用简单的清洗步骤来除去这些污染物往往就能恢复其色谱性能。

经过等度运行后的色谱柱，有时用90～100％含量的溶剂B（双溶剂反相系统中洗脱能力较强的溶剂，如甲醇、乙晴、四氢 呋喃等）冲洗20个柱体积可以清除污染物（色谱柱的柱体积和空柱管体积概念不同，一根4.6x250mm柱子的柱体积只有2.5ml，2.1x150mm的是0.28ml）。

如果使用的是缓冲盐系统，不要直接切换到强溶剂，突然转换到高浓度有机溶剂可能会使HPLC流动体系中的缓冲盐沉淀，这样会导致更大的问题，如柱头筛板堵塞、连接管路堵塞、泵泄漏、活塞损伤或进样阀转轴失灵。应该先用无缓冲盐流动相（即把缓冲液换成水），冲洗5～10个柱体积以后才切换到用强溶剂清洗。

有时候，强溶剂B也没法把残留在色谱柱上的污染物洗掉。那么就需要用更强的溶剂或者是系列溶剂组合。如果污染物不是生物质的，一种强溶剂或几种溶剂组合清洗基本能解决问题。柱子生产厂家的网页和产品说明书上很多也有清洗方法推荐。

❸ 高效液相色谱仪操作

不同牌子的机子差别稍微有点大，就算同样的牌子，比如都是岛津的，不同型号的还会稍有差别，如果你确定你要用哪台机子，搜搜那个牌子型号的液相，如何操作，有什么细节上的注意事项，是否需要更改一些基础设置，如果一个机子天天用倒没什么，就怕有的机子一段时间不用就把设置回归出厂设置了，比如最高压力才9Mp，流速一到0.8泵就莫名其妙关了之类，因为常用的设置是25MP，还有什么高级设置里也会有一些细节问题，稍微不对可能就进不了样，这类问题很多，网上细说不了，最好有老师现场指导。
现在以我常用的一个岛津机子为例，大致说一下，一般先要看流动相，确定你用什么流动相，甲醇还是乙腈，超纯水还是百分之多少的磷酸，或者是缓冲盐之类的，把流动相配好之后，分别抽滤，注意区别有机相用有机膜，水相用水膜，而且抽滤系统要注意清洁，过完一种洗一下，用纯水和超纯水荡干净之后才能继续使用，然后超声，一般5-15min左右，然后就可以把流动相放在机子上了，看一下用那种柱子，是C18还是苯基柱还是什么柱子之类的，把柱子装好，注意方向，不要装反了，开机子，电脑，先不要联工作站，机子自检完没有问题后再联工作站，然后选择方法，确定流动相比例、柱温、检测波长、流速，然后排气，有的排气需要打开排气阀，有的不需要，看机子类型了，排完气平衡机子，如果机子流速0.5已经平衡了，改为1.0，一般进样流速都是1.0，平衡之后可以选择进单针还是设置批处理，样品走完之后冲机子，如果有缓冲盐，需要从水到有机相梯度洗脱一个半小时，如果是磷酸，可以直接用有机相洗脱，半小时就可以了，柱子最后需要保存在纯甲醇或者乙腈中，有可能有一些我不知道的柱子要保存在其他相中。整个流程就这些了

❹ 那些HPLC色谱柱可以用纯水

你问的应该是反相色谱柱，因为凝胶过滤用纯水相是司空见惯的。
Agilent的Bonus系列，Aichorm的Aqua系列，都是回可以做纯水答相的。
但你如果只是考虑梯度起点的高水相比例，那就不必了，普通的C18、C8都可以用纯水相短时间冲洗，不超过10个柱体积，是没什么问题的。

❺ 微孔滤膜分有机系,水系是什么意思

1、微孔滤膜水系：聚丙烯性质稳定，耐各种溶剂。你所谓的水系/有机系，应该是根据滤膜的材质分的，分别适用于过滤水溶液（生命科学适用），和有机溶液（化学适用）。

所谓有机系，用来过滤水溶液应该也没什么问题，但是反过来水系的则可能会被有机溶剂溶解，不适用于有机体系的过滤。

2、微孔滤膜有机系：syringe filter结构为两部分，housing和membrane，可以分别由不同材质构成，通常housing是聚丙烯pp，或者nylon 聚酰胺。

1) 亲水性样品：选用亲水膜片，对水有亲和力，适合过滤水为基质的溶液。可用的滤膜有：混合纤维素酯、聚醚砜（PES）Nylon等。

2) 强腐蚀性有机溶剂：一般采用PTFE、聚丙烯（PP）等材质的滤膜。

3) 蛋白溶液：选择低蛋白吸附的滤膜，如PVDF滤膜。

4) 离子色谱：通常认为PES滤膜比较适合低无机离子的溶液的过滤。

(5)梯度纯水相有机相扩展阅读：

平板薄纸型滤膜(Flat Sheet Membrane) 、中空纤维型滤膜(Hollow Fiber Membrane) 和管状型滤膜(Tubular Membrane)。

其中，平板薄纸型滤膜又依其结构差异，可再细分为“无支撑物之平板薄纸型滤膜”(Unsupported)与“有支撑之平板薄纸型滤膜”(Supported)两种。根据两者制造所需科技的要求，“无支撑物之平板薄纸型滤膜”比“有支撑物之平板薄纸型滤膜”的生产工艺更为精密与复杂。

微孔过滤乃筛分过程，属于精密过滤。微孔精密过滤是指滤除0.1μm至10μm 微粒的过滤技术，一般而言，过滤机理分表面型与深层型两类。微孔过滤乃筛分过程，属于精密过滤。经由高级技术制造的MF膜其过滤机理为表面型过滤。

因过滤孔径固定，故可确保过滤的精度与可靠度。深层过滤又分非固定不规则孔径与固定不规则孔径，前者如化纤绕线型滤芯，一般只作为比较粗糙的预过滤。

❻ 高效液相色谱，流动相抽滤时，什么时候用有机系滤膜，什么时候用水系滤膜

过市场出售的水系膜是混合纤维素滤膜或者醋酸纤维素滤膜,
有机系滤膜一般是PVDF(聚偏氟乙烯滤膜)和PTFE(聚四氟乙烯滤膜).
用有机系滤膜是可以滤不含有机相的水或盐溶液的，只是速度较慢，还是建议水膜过滤。当然有机系滤膜也可以过滤水和有机相混合的流动相。
但是纤维素滤膜是会被有机相溶解的，有机相比例高的时候你会发现膜被溶解。有机相比例低的时候你看不到溶解，但是也不证明膜没有损失，这些损失导致的后果就是流动相被溶解的膜污染以及膜孔的扩大导致的过滤效果变差。
不要为了有机系和水系滤膜的差价而放弃试验的严谨性。
我的结论就是：含有有机相的流动相，即便比例低也不要用水膜过滤。除非你买特殊材质的混合滤膜，说明书上说明都可以过滤的就行。
也别再追求什么比例了，那些都是自欺欺人，既然叫做水膜，就不能用于有机相。

❼ hplc分析中A液B液分别是做什么的

请问你指的是流动相吧？一般在文章中或实验报告中提到A、B，分别是两种流动相。通常情况下，A和B一个是水相、一个是有机相。水相一般是纯水或稀酸（如0.2%醋酸、0.1%磷酸等），有机相一般是甲醇或乙腈。

❽ 液相小白求助：做塑化剂，走梯度，基线抬高怎么办

你的梯度方法写得不清楚。
应该是：
保留时间（min） 乙腈比例（%）
0 75
XXX XXX

第一，其实梯度基线波动很正常很正常的。因为你有机相变了，你可以监控一下压力，肯定在流动相变化时压力也变了。所以基线是会有变动的。
第二，你的基线波动没有影响到你色谱峰的积分。保留时间1.3min的色谱峰和2.6min的色谱峰都是在基线平稳处出峰的不是吗？那么就没有必要纠结基线波动的问题了呀。它又没碍着你，波动就波动吧。
第三，如果实在不符合要求或者影响美观，可以考虑换流动相。还是水，还是乙腈，但是需要换厂家。你的水是不是高纯水？实在不行最好的水是屈臣氏的纯净水，跑液相平平的。乙腈的影响特别大。如果跑梯度一定不要用国产的乙腈。进口的色谱纯乙腈跑出来效果要比国产的好很多。比如Fisher的。条件允许换个好点牌子的有机相。

❾ 液相梯度走的缓一些，怎样设置

是希望走缓一点儿吗？
一个是 水，最好是纯度很高的纯净水。如果是外面买的，起码是娃哈哈纯净水，最好用屈臣氏的绿色瓶子的那种。如果是自制的也最好是一级水。
一个是有机相，梯度的时候就不要随便了，最好用国外进口的有机相。跑出来效果会好一些。比如Fisher的什么的。
一个是盐。这个可能没办法，实验室也只有分析纯的盐了。不过要多过滤几次。

另外有些时候梯度就是波动大，比如有机相变化非常大的时候。这个是不好调解的。
另外都是缓冲液的时候醋酸盐比磷酸盐波动也要大很多。这个就看你的实验需要了。
当然，低波长的时候波动范围也会大一些。如果方法是固定的，那么这些都是不能改变的了。

❿ 流动相抽滤膜有机与水系怎么辨别

没什么特别大的区别，外观一致。
实际抽滤一下吧，用一点纯甲醇，水膜瞬间化掉，有机膜完好。
如果两个同时抽滤纯水相，水膜过滤速度会快一些。